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一文Get外泌体分离技术 2021-11-23

外泌体是直径为30-150 nm的小细胞外囊泡。在生理和病理条件下,几乎所有类型的细胞都可以释放外泌体,在细胞通讯和表观遗传调控中发挥重要作用。外泌体天然存在于体液中,包括血液,唾液,尿液和脑脊液等,内部含有其来源细胞的核酸,蛋白等物质,因此基于外泌体的疾病诊断和治疗方法得到了深入的研究。但是如何拿到纯净的外泌体一直是外泌体研究所面临的难题之一,因此研究人员也开发了许多外泌体分离的方法,来一起看一下吧。


常见外泌体分离方法

01差速离心法

离心力从300×g到100,000×g的下进行多次循环离心,最后收集外泌体颗粒。

1637548337197492.jpg02密度梯度离心法

等密度梯度超速离心法是通过从下到上逐步降低密度分层(A)。动区梯度超速离心法由两个梯度介质部分组成,样品根据密度/质量/大小被依次分离(B)。

密度梯度离心.jpg03超滤法

超滤的外泌体分离示意图。(A)串联配置的微滤器,细胞外液通过串联配置的微滤器收集外泌体。(B) 顺序超滤,细胞外液依次通过不同直径的过滤器收集外泌体。

1637548360919350.jpg04切向流过滤在切向流过滤过程中,进料流与膜面平行流动,施加的压力使一部分水流根据过滤器的大小通过膜从而分离外泌体。
切向流过滤.jpg05尺寸排阻层析尺寸排除层析法的外泌体分离,溶液通过固定相,分子根据大小尺寸进行分离。

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06聚合物沉淀聚合物沉淀含有外泌体的溶液中加入高亲水性聚合物后,降低外泌体的溶解度并诱导其随后的沉淀。
聚合物沉淀.jpg07免疫亲和捕获基于免疫亲和的外泌体分离示意图。识别外泌体特异性标志物的抗体和外泌体的流体一起孵育富集外泌体,通过额外的洗脱步骤收集外泌体。
1637548479248185.jpg08微流体集成微流体技术结合了外泌体分离和分析,将含外泌体的流体添加到介质中后,根据细胞外囊泡的物理和生化特性,分离外泌体,可以从少量体液中快速分离外泌体,并进行实时外泌体表征分析以进行原位诊断。
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外泌体分离方法比较

01差速离心法优点:低成本低试剂污染,适合大量制备。缺点:费时费力,有设备要求,易有蛋白质聚集影响纯度,不适合少量样本。02密度梯度离心法优点:纯度高,可以分离外泌体亚群缺点:设备要求高,费时间,不适合少量样本03超滤分离优点:成本低,速度快缺点:纯度一般,剪切应力可能造成外泌体损伤,滤膜可能会导致外泌体损失04尺寸排阻分离优点:高纯度,耗时短,保持外泌体的天然状态,良好的重复性,样本量适用范围广,样本类型适用范围广缺点:成本高,需要额外的外泌体富集方法05聚合物沉淀优点:操作简单,样本量适用范围广,效率高。缺点:蛋白质聚集合其他囊泡的污染,可能影响后续的分析和量化06免疫亲和捕获优点:适用于特定来源的外泌体,纯度高,方便,无试剂污染缺点:抗体成本高,外泌体标记需要筛选优化,产量低,洗脱可能会损伤外泌体结构07微流控技术优点:高效方便,可实现自动化并和诊断缺点:只适合小样本分离

翌圣生物外泌体分离试剂盒,为你提供简单,快速,高效的外泌体分离办法,只需要简单4步,就可以从血液,细胞上清,脑脊液,唾液,腹水,羊水等多种样品中分离出大量形态完好的外泌体。


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分离产物经过电镜分析,NTA粒径分析和WB实验三大外泌体金标准验证,满足您的下游实验需求。


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参考文献


Yang D, Zhang W, Zhang H, Zhang F, Chen L, Ma L, Larcher LM, Chen S, Liu N, Zhao Q, Tran PHL, Chen C, Veedu RN, Wang T. Progress, opportunity, and perspective on exosome isolation - efforts for efficient exosome-based theranostics. Theranostics. 2020 Feb 19;10(8):3684-3707. doi: 10.7150/thno.41580. PMID: 32206116; PMCID: PMC7069071.