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Hieff Canace® Gold High Fidelity DNA Polymerase 10148ES
物品单位 价格 品牌
103 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:10148ES10
  • 发布日期: 2020-03-17
  • 更新日期: 2021-09-27
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 10148ES10
用途范围 基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。
纯度 %
CAS编号
规格 10 U
是否进口


产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff Canace®Gold High-Fidelity   DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES10

10 U

103.00

Hieff Canace®Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES60

100 U

683.00

Hieff Canace®Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES76

500 U

2383.00

Hieff Canace®Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES80

1000 U

4583.00


产品描述

Hieff Canace®Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增速度达到15 sec/kb,扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。


产品组分

编号

组分

产品编码/规格

10148ES10

(10U)

10148ES60

(100U)

10148ES76

(500U)

10148ES80

(1000U)

10148-A

Hieff Canace®Gold High-Fidelity DNA   Polymerase

(2 U/μL)

5 μL

50 μL

250 μL

250 μL×2

10148-B

2×Canace®Gold PCR buffer(含Mg2+,dNTPs)

300 μL

1 mL×3

1 mL×15

1 mL×30


产品应用

基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


活性定义

用活性化的大马哈鱼精DNA为模板/引物,74℃,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。


质量控制

核酸外切酶残留检测:10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

切口酶残留检测:10 U本品和0.5 μg IL23R质粒,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。


运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2)本产品仅作科研用途!

推荐PCR反应体系(冰上配制)

组分

体积

终浓度

ddH2O

to 50 μL

-

2×Canace®Gold PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

25   μL

DNA模板

适量

-

Primer正向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Primer反向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Hieff Canace®Gold High-Fidelity DNA   Polymerase(2 U/μL)

0.5 μL

1 U/50 μL

【注】:
1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。
2)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。
3)聚合酶添加:为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4)Mg2+终浓度:体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5)高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
6)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

模板种类


扩增片段1 kb-10 kb


基因组DNA


50ng-200 ng


质粒或病毒DNA


10pg-20 ng


cDNA


1-5   μL (不超过PCR反应总体积的1/10)



PCR扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序

两步法程序(优先推荐):

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

延伸

68℃

30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1


三步法程序(常规程序):

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

退火

60℃

20 sec

延伸

72℃

30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1


梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序):

步骤

温度

时间

循环数

循环步骤

循环步骤

循环步骤

1

预变性

预变性

预变性

15,每个循环降低1℃

变性

变性

变性

退火

退火

退火

延伸

延伸

延伸

20

终延伸

终延伸

终延伸

循环步骤

循环步骤

循环步骤

预变性

预变性

预变性

1

【注】:

1)预变性温度和时间:推荐温度:98℃,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。
2)退火温度和时间:推荐温度:60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3)延伸温度和时间:推荐温度:72℃。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
5)不同扩增程序下的特点:

程序类型

两步法

三步法

梯度退火

速度

最快

中等

特异性

中等

PCR产量

中等

最高

中等

检出率

中等


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货号

规格

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