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Hieff UNICON® Universal Blue qPCR Master Mix 11184ES
物品单位 价格 品牌
223 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:11184ES03
  • 发布日期: 2020-03-31
  • 更新日期: 2021-09-02
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 11184ES03
用途范围 qPCR
纯度 %
CAS编号
规格 1 ml
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

促销价(元)

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES03

1 mL

383.00

223.00

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES08

5*1 ml (200rxn(25μl/rxn))

1653.00

663.00

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES25

5×5 mL

6933.00

3483.00

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES50

10×5 mL

12533.00

6613.00

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

11184ES60

20×5 mL

19833.00

12563.00

产品描述

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预溶液,具有高灵敏度和高特异性的特点,颜色为蓝色,具有加样示踪的作用。核心组分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动,可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。同时配方添加了提升PCR反应扩增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因扩增的促进因子,使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

本产品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye,适用于所有qPCR仪器,无需在不同的仪器上调整ROX的浓度,只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。

运输和保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存,有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR Green I,保存或配制反应体系时需避免强光照射。

注意事项

1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒(货号:11141ES),以有效去除RNA样品中残留的基因组。
2. 解冻后Master Mix可能出现絮状或白色沉淀,手握缓慢溶解并上下轻柔颠倒混匀至溶液澄清,不影响试剂性能。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途!

反应体系

组分

体积(μL)

体积(μL)

终浓度

Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

25

10

Forward Primer (10 μM)

1

0.4

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

1

0.4

0.2 μM

模板DNA

X

X

-

无菌超纯水

to 50

to 20

-

【注】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度:通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

b) 模板浓度:如模板为未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

c) 模板稀释:cDNA原液建议5-10倍稀释,最佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好。

d) 反应体系:推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95℃

2 min

1

变性

95℃

10 sec

40

退火/延伸

60℃

30 sec★

熔解曲线阶段

仪器默认设置

1

快速程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

95℃

30 sec

1

变性

95℃

3 sec

40

退火/延伸

60℃

20 sec★

熔解曲线阶段

仪器默认设置

1

【注】 快速程序适用于绝大多数基因,个别复杂二级结构基因可尝试标准程序。

a) 退火温度和时间:请根据引物和目的基因的长度进行调整。

b) 荧光信号采集(★):请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec:Applied Biosystems 7300

32 sec:Applied Biosystems 7500

c) 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。

1) 扩增曲线:标准扩增曲线为S型。

Ct值落在20-30之间时,定量分析最准确;

Ct值小于10,需要将稀释模板后,重新进行实验;

Ct值介于30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性;

Ct值大于35时,检测结果无法定量分析基因的表达量,但可用于定性分析。

2) 熔解曲线:

熔解曲线单峰,表明反应特异性好可以进行定量结果分析;若熔解曲线出现双峰或者多峰,则不能进行定量分析。

熔解曲线出现双峰,需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体,建议降低引物浓度,或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增,请提高退火温度,或者重新设计更高特异性的引物。

引物设计指南

1. 推荐引物长度25 bp左右。扩增产物长度150 bp为佳,可以在100 bp-300 bp内选择。

2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。

3. 引物碱基分布要均匀,避免出现连续的4个相同碱基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。

4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。

5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。

6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测,只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。

适用机型

ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler;

Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

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