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产品展厅 > 分子生物学 > 核酸合成与提取 > UCF·ME™ T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)10613es

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UCF·ME™ T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)10613es
物品单位 品牌
Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:10613ES92
  • 发布日期: 2021-05-28
  • 更新日期: 2021-10-28
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 10613ES92
用途范围
英文名称
纯度 %
CAS编号
规格 10 KU
保质期
是否进口

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)

10613ES92

10 KU

1955

10613ES97

50 KU

8655

10613ES98

500 KU

74855

10613ES99

5000 KU

询价

 

产品描述

 

本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶,以含有T7启动子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

注:G*为RNA转录的第一个碱基。

本品是按照GMP工艺要求生产,产品以无菌液体形式提供。 

 

产品性质

 

来源(Source)

重组E. coli

最适温度(Optimum Temperature)

37℃

宿主核酸残留Host nucleic acid residue

<10 fg/U

宿主蛋白残留Host protein residue

<50 ppm

病原体(HBV/ HCV/HIV)检测

无检出

RNA酶残留(RNase residue

阴性

内毒素残留Endotoxin residue

<0.05EU/1000U

支原体检测Mycoplasma detection

无检出

无菌检测Sterility testing

无检出

储存缓冲液(Storage Buffer)

50 mM Tris-HCl1 mM EDTA10 mM DTT100 mM NaCl0.1% Triton X-100,50%v/v)甘油pH7.9@25℃

活性单位定义(Unit Definition)

在 37℃、pH8.0 的条件下,1 h内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

注:具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告

 

产品组分

 

编号

组分

产品编号/规格

10613ES92

(10 KU)

10613ES97

(50 KU)

10613ES98

(500 KU)

10613ES99

(5000 KU)

10613-A

T7 RNA polymerase (1 KU/μL)

10 μL

50 μL

500 μL

5 mL

10613-B

10×Transcription Buffer

100 μL

500 μL

1 mL×5

10 mL×5

注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT,但不含有NTP,如需请购买本公司NTP set solution 10133。

 

产品应用

 

1. 单链 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体,以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针)

2. 以(Cap analog)为引物合成Capped mRNA

 

运输和保存方法

 

干冰运输。-20℃保存,有效期一年。

 

应用实例

 

1、按下列体系配制反应体系

组分

体积(μL)

终浓度

10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)

2

CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)

0.4 each

2 mM each

T7 RNA Polymerase (1 KU/μL)

0.5-1

-

RNase inhibitor (40 U/μL)

1

-

RNase free H2O

Up to 18

-

模板DNA

2 (100 ng-1 μg)

-

【注】:

①. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

②. Buffer和水建议放置到室温,然后开始使用,反应于室温下配制,防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。

③.若转录长度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。

④. RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。

⑤.为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。

2、37℃反应1-2 h(若转录长度≤ 100 nt,增加时间至4-8 h)。

3、反应结束后,使用2 U DNaseⅠ(无RNase)37℃、15 min去除DNA模板。

4、转录产物纯化:体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化(12602),以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法(具体操作步骤可联系Yeasen索取)。

 

注意事项

 

1、DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板;PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

3、在20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。

4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 



HB211021