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UCF.ME™ mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade 10614es
物品单位 品牌
Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:10614ES84
  • 发布日期: 2021-06-04
  • 更新日期: 2021-06-04
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 10614ES84
用途范围
纯度 %
CAS编号
别名
规格 2000u
分子式
产品英文名称
是否进口

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

 

 

UCF.METM mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES84

2000 U

4265

10614ES92

10000 U

17825

10614ES94

20000 U

29825

10614ES96

100000 U

119325

 

产品描述

 

真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1和D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5'末端(m7Gppp5'N)。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,并且保证正确的方向。

本品是按照GMP工艺要求生产,产品以无菌液体形式提供,可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5'末端标记反应。

 

产品性质

 

来源(Source

携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

最适温度(Optimum Temperature

37℃

宿主核酸残留Host nucleic acid residue

<10fg/U

宿主蛋白残留Host protein residue

<50ppm

病原体(HBV/ HCV/HIV)检测

无检出

内毒素残留Endotoxin residue

<0.05EU/1000U

支原体检测Mycoplasma detection

无检出

无菌检测Sterility testing

无检出

储存缓冲液(Storage Buffer

20 mM Tris-HCl pH 8.0100 mM NaCl1 mM DTT0.1 mM   EDTA0.1% Triton X-10050%甘油

活性单位定义(Unit Definition

37℃条件下,1小时内将10 pmol GTPα- 32P)掺入到一条含80个核苷酸(80 nt)转录产物上所需要的酶量,即为1个单位。

【注】:具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告

 

产品组分

 

组分编号

组分名称

产品编码/规格


10614ES84

(2000 U)

10614ES92

(10000 U)

10614ES94

(20000 U)

10614ES96

(100000 U)

10614-A

10×Capping Buffer

500 μL

1.25 mL×2

1.25 mL×4

25 mL

10614-B

Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL)

200 μL

1 mL

1 mL×2

10 mL

【注】:10×Capping Buffer配方为:0.5 M Tris-HCl,pH 8.0,50 mM KCl,10 mM MgCl210 mM DTT。

 

运输和保存方法

 

冰袋运输,-20℃保存,有效期1年。

 

注意事项

 

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

2)所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬;

3)在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构;

4)对于已知5'末端结构的RNA,可以延长反应时间至60分钟,提高加帽效率

5)5'末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

 

使用方法

 

1. 加帽反应(反应体系20 μL

本步骤适用于10 μg RNA(≥ 100 nt)的加帽反应,且可根据实验需要放大。

1)取10 μg RNA至1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至15 μL;

2)65℃加热5分钟;

3)取出离心管置于冰上5分钟;

4)依次加入以下组分:

组分

体积

上述变性的RNA

15 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

GTP(10 mM)

1.0 μL

SAM(2 mM)

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL)

1.0 μL

【注】:10×Capping Buffer配方为:0.5 M Tris-HCl,pH 8.0,50 mM KCl,10 mM MgCl210 mM DTT。

5)37°C孵育30分钟;

6)RNA加帽完成,可进行后续实验。

2. 5'末端标记反应(反应体系20 μL

本步骤适用于5'末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大,其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。

1)取适量RNA到1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至14 μL;

2)65℃加热5分钟;

3)取出离心管置于冰上5分钟;

4)依次加入以下组分:

组分

体积

上述变性的RNA

14.0 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

GTP mix

2.0 μL

SAM(2 mM)

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme(10 U/μL)

1.0 μL

【注】:GTP mix为GTP和少量标记物,其中GTP使用浓度参照注意事项5)。

5)37°C孵育30分钟;

6)RNA 5'末端标记完成,可进行后续实验。

HB210526