Teknologi diagnostik molekuler membedakan dirinya dari berbagai metode deteksi karena sensitivitas dan spesifisitasnya yang luar biasa. Namun, reagen diagnostik cair konvensional memiliki kekurangan seperti biaya transportasi yang tinggi dan masa simpan yang terbatas, yang membatasi kegunaannya. Sebagai respons terhadap kebutuhan pasar yang terus berkembang dan kemajuan teknologi, reagen pengujian diagnostik molekuler yang dibekukan telah muncul. Produk yang dikeringkan dengan beku menawarkan beberapa keunggulan dibandingkan reagen pengujian cair tradisional, termasuk:

  • Stabil pada suhu ruangan - Struktur tiga dimensinya tetap, yang dapat memastikan stabilitas enzim dan sistem reaksi pada suhu ruangan. Tidak perlu transportasi rantai dingin dan penyimpanan di lemari es atau ruang penyimpanan dingin, yang dapat memperpanjang masa simpan produk.
  • Mudah digunakan- Tidak perlu pembekuan dan pencairan berulang kali, pengeluaran cairan, dan sebagainya.
  • Biaya dikurangi- Tidak perlu transportasi rantai dingin dan penyimpanan beku, secara efektif mengurangi biaya transportasi dan penyimpanan.
  • Presisi tinggi- Satu inti mikro kering beku digunakan dalam satu reaksi untuk mengurangi kesalahan komposisi selama persiapan reagen, memperpendek waktu operasi, mencegah hilangnya aktivitas biologis selama persiapan cairan, dan pada dasarnya meningkatkan presisi.
  • Penggunaan yang fleksibel- Tidak dibatasi oleh jumlah sampel, satu sampel juga dapat dimuat.

Enzim molekuler konvensional atau campuran awal sering kali mengandung gliserin dalam konsentrasi tinggi sebagai agen krioprotektif dan penstabil. Akan tetapi, keberadaan gliserin dalam reagen dapat mengganggu integritas struktural air, sehingga sulit untuk menghilangkan air secara efektif. Hal ini, pada gilirannya, berdampak buruk pada struktur dan stabilitas produk yang dikeringkan dengan beku. Oleh karena itu, saat memilih pengeringan beku, disarankan untuk memilih reagen bebas gliserol.

Lebih jauh lagi, dalam aplikasi yang sangat sensitif terhadap komposisi reagen, seperti PCR digital, pemanfaatan enzim bebas gliserin konsentrasi tinggi dapat lebih mengurangi pengaruh gliserol pada reaksi PCR digital. Pendekatan ini tidak hanya meminimalkan gangguan tetapi juga memperluas potensi untuk mengoptimalkan sistem reagen deteksi PCR digital.

Yeasen Bebas gliserol larutan enzim molekuler

Yeasen telah membangun platform penelitian dan pengembangan serta produksi enzim molekuler non-gliserin yang komprehensif, dan telah mencapai produksi skala besar berbagai enzim molekuler bebas Gliserol melalui pemilihan material, pengendalian lingkungan, optimalisasi proses, dan jaminan kualitas.

  • Uji coba proses dialisis

Mengoptimalkan proses dialisis untuk volume enzim gliserin yang tetap:

  1. Penyaringan untuk penyangga dialisis yang optimal untuk berbagai enzim molekuler;
  2. Penyaringan solusi penyimpanan yang stabil untuk berbagai enzim molekuler guna memungkinkan penyimpanan jangka panjang pada suhu 4℃ atau -20℃.
  • Amplifikasi proses filtrasi aliran tangensial

Berdasarkan penyaringan proses dialisis, komponen buffer dialisis yang optimal dan larutan penyimpanan optimalnya dapat ditentukan. Selanjutnya, proses filtrasi aliran tangensial (juga dikenal sebagai UFDF) dapat digunakan untuk penggantian larutan buffer.

Gambar 1: Diagram skema sistem filtrasi aliran tangensial

Faktor krusial dalam pengembangan proses penyaringan aliran tangensial berkisar pada pilihan formula larutan penyimpanan, formula larutan pencucian dan penyaringan, serta tekanan transmembran dan laju aliran yang diterapkan selama penyaringan. Yeasen telah menetapkan pendekatan standar untuk penyaringan aliran tangensial, yang memungkinkan penentuan cepat volume pencucian dan penyaringan serta parameter waktu berdasarkan kandungan gliserin yang diinginkan dalam enzim molekuler target. Pendekatan ini membantu menghemat bahan dan waktu.

Gambar 2: Aliran Eksperimen Sistem Filtrasi Aliran Tangensial
  • Kontrol kualitas

Berbagai proses persiapan yang diuraikan di atas dirancang untuk mengakomodasi berbagai persyaratan untuk berbagai volume dan jenis produk. Untuk menilai stabilitas produk di berbagai kelompok dan dalam proses yang sama, Yeasen telah mengembangkan sistem karakterisasi parameter kinerja yang komprehensif. Sistem ini memungkinkan evaluasi menyeluruh terhadap dampak pengukuran bebas gliserol dari berbagai perspektif. Metode karakterisasi mencakup kuantifikasi protein, penilaian aktivitas enzim (laju pemulihan), analisis kandungan gliserin, penilaian kandungan agen pelindung, dan evaluasi kinerja enzim, antara lain.

Yeasen produk enzim molekuler bebas gliserol

Yeasen telah mengadopsi metode penyiapan enzim molekuler bebas gliserol untuk menghasilkan enzim tanpa kandungan gliserin dari enzim yang awalnya mengandung gliserin. Saat ini, kami dapat menyediakan bahan baku enzim bebas gliserol dalam jumlah besar yang cocok untuk aplikasi qPCR/RT-qPCR dan LAMP/RT-LAMP. Bahan baku ini dirancang untuk pengeringan beku dalam pengujian diagnostik, sekaligus mempertahankan tingkat kualitas dan kinerja yang sama dengan bahan baku cair.

Produk enzim molekuler bebas gliserol

Premix qPCR disiapkan menggunakan Yeasen 14316ES E-Taq DNA polimerase dan enzim bebas gliserol yang sesuai, masing-masing, dan templat 105, 104 dan 103 salinan/mL diperkuat pada saat yang sama. Hasil penelitian menunjukkan bahwa efek amplifikasi 14316ES bebas gliserol konsisten dengan yang mengandung gliserin. padanan. Uji stabilitas yang dipercepat dari 14316ES dilakukan pada suhu 37℃. Hasil menunjukkan bahwa kinerja ekspansi 14316ES konsisten dengan kontrol yang tidak dipercepat setelah 54 hari perlakuan yang dipercepat pada suhu 37℃. Hasil di atas menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan dalam kinerja enzim bebas gliserol dan enzim yang mengandung gliserin. padanannya, dan stabilitasnya bagus.

Gambar 3: Data uji produk enzim bebas gliserol
  • Produk beku-kering RT-qPCR: Dipercepat pada 50℃ selama 25 hari, produk beku-kering memiliki morfologi dan kinerja yang stabil

Yeasen 14316ES disiapkan menjadi larutan RT-qPCR yang telah dicampur sebelumnya, yang dikeringkan beku dan diuji untuk stabilitas yang dipercepat pada suhu 50℃ selama 25 hari. Pada saat yang sama, 105, 104 dan 103 salinan/mL templat pseudovirus korona baru diperkuat.Hasil penelitian menunjukkan bahwa morfologi produk, nilai Ct dan nilai fluoresensi tidak mengalami perubahan yang signifikan sebelum dan sesudah pengeringan beku, serta produk pengeringan beku mempunyai stabilitas yang baik.

Gambar 4: Data uji stabilitas yang dipercepat dari produk RT-qPCR yang dikeringkan beku
  • Produk beku-kering RT-LAMP: Dipercepat pada suhu 45℃ selama 30 hari, produk beku-kering memiliki morfologi dan kinerja yang stabil

Premix RT-LAMP disiapkan dengan Yeasen 14405ES dan 11297ES, dan uji kinerja dilakukan setelah pengeringan beku. Lubang reaksi positif berwarna jingga dan lubang reaksi negatif berwarna magenta, yang menunjukkan kontras yang hebat, dan hasilnya ditafsirkan dengan jelas. Selain itu, morfologi produk yang dikeringkan beku tidak berubah secara signifikan setelah 30 hari akselerasi pada suhu 45℃. Hasil penelitian menunjukkan bahwa produk yang dikeringkan beku stabil dalam bentuk dan kinerja.

Gambar 5: Data uji produk beku-kering RT-LAMP

Informasi produk

Klasifikasi

Nsaya

Nomor Katalog.

Produk enzim bebas gliserol untuk qPCR/RT-qPCR

Kit RT-qPCR Satu Langkah Hifair™ Lyo Multiplex -11831ES

11831ES

Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polimerase, Bebas Gliserol

14316ES

Hifair® V Reverse Transcriptase, Bebas Gliserin

11301ES

Uracil DNA Glikosilase (UDG), Bebas Gliserol

10707ES

Inhibitor RNase Murine (200 U/μL, Bebas Gliserol)

10703ES

Produk enzim bebas gliserol untuk RT-LAMP

Hifair® III Reverse Transcriptase, 600U/μl, Bebas Gliserol

11297ES

DNA Polimerase Bst Plus yang Diliofilisasi (60 U/μL, Bebas Gliserol)

14405ES

Pertanyaan