Elektroforesis protein adalah teknik analisis protein. Protein bermuatan negatif atau positif dalam buffer dan bergerak ke anoda dalam medan listrik yang disebut elektroforesis. Molekul protein yang berbeda memiliki mobilitas elektroforesis yang berbeda. Bagian yang sangat penting dari elektroforesis protein adalah persiapan gel. Persiapan gel konvensional sering kali memakan waktu beberapa jam, dan ada juga masalah seperti kebocoran cairan, gel yang tidak rata, dan gelembung udara. Selain masalah persiapan, reagen bahan baku juga akan memiliki toksisitas tertentu, yang akan menyebabkan kerusakan pada badan dispenser lem, dan munculnya lem prefabrikasi dapat mengatasi masalah ini. Jadi apa prinsip dasar elektroforesis protein, dan apa fungsi dan prinsip gel pracetak?

1. Apa prinsip dasar elektroforesis protein?
2. Apa fungsi dan prinsip lem prefabrikasi?
3. Pengenalan lem prefabrikasi yang disediakan oleh Yeasen
4. Tanya Jawab
5. Detail produk

1. Apa prinsip dasar elektroforesis protein?

Sebagian besar makromolekul biologis, seperti protein dan asam nukleat, memiliki gugus kationik dan anionik, yang disebut zwitterion. Metode elektroforesis zona di mana partikel didispersikan dalam larutan dan gel pati, gel agar atau agarosa, gel poliakrilamid, dll. sebagai media pendukung disebut elektroforesis gel. Elektroforesis gel poliakrilamid adalah metode elektroforesis di mana pendukungnya adalah gel poliakrilamid. Dipercayai bahwa ukuran pori gel poliakrilamid dikontrol untuk berpolimerisasi, dan protein dipisahkan oleh aksi saringan molekuler yang serupa.

Elektroforesis protein mencakup dua bentuk, elektroforesis gel poliakrilamid asli (Native-PAGE) dan elektroforesis gel poliakrilamid-natrium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Native-PAGE menjaga protein tetap utuh selama elektroforesis dan memisahkannya dalam gradien berdasarkan berat molekul, bentuk, dan muatan yang menyertainya. Di sisi lain, SDS-PAGE memisahkan protein menurut berat molekul subunitnya. SDS adalah deterjen anionik. Sebagai denaturan dan agen pelarut, ia dapat memutus ikatan hidrogen intramolekul dan intermolekul, melipat molekul, dan menghancurkan struktur sekunder dan tersier molekul protein. Sebagai agen pereduksi kuat, merkaptoetanol, dithiothreitol, dapat memutus ikatan disulfida antara residu sistein. Setelah menambahkan agen pereduksi dan SDS ke sampel dan gel, molekul-molekul tersebut didepolimerisasi menjadi rantai polipeptida, dan rantai samping asam amino yang didepolimerisasi dan SDS digabungkan menjadi misel protein-SDS. Muatan negatif misel protein-SDS melebihi muatan asli protein, sehingga menghilangkan perbedaan muatan dan perbedaan struktur antara molekul yang berbeda. Mobilitas protein hanya bergantung pada massa molekul protein, dan massa molekul protein dapat ditentukan dengan membandingkannya dengan standar massa molekul yang diketahui.

2. Apa fungsi dan prinsip lem prefabrikasi?

Dibandingkan dengan gel cetak tangan tradisional, gel protein pracetak dapat menghindari kontak dengan sejumlah besar reagen beracun, menghemat banyak waktu, dan secara efektif memecahkan masalah perbedaan besar dalam gel cor tangan.

Gel terdiri dari dua lapisan gel yang berbeda, lapisan atas adalah gel susun dan lapisan bawah adalah gel pemisah. Gel susun juga dikenal sebagai gel susun.Konsentrasi gel relatif kecil dan ukuran pori relatif besar. Sampel ditambahkan ke gel susun dan dipekatkan di zona sempit melalui migrasi gel berukuran pori besar. Gel pemisah, juga dikenal sebagai gel elektroforesis, biasanya memiliki ukuran pori kecil, dan pemilihan konsentrasi gel yang tepat dapat membuat komponen sampel terpisah dengan baik.

Gel pemisah dapat dibagi menjadi gel tetap dan gel gradien. Konsentrasi poliakrilamida adalah 8%, 10%, 12%, 15%, 4% hingga 12%, dan 4% hingga 20%. Empat yang pertama adalah gel pracetak dengan konsentrasi tetap, dan dua yang terakhir adalah gel gradien. Konsentrasi mewakili kisaran berat molekul protein yang diisolasi. Gradien gel dibentuk oleh pencampur gradien. Larutan akrilamida konsentrasi tinggi ditambahkan ke pelat kaca, dan kemudian konsentrasi larutan menurun dalam gradien, dan ukuran pori gel lebih besar di bagian atas dan lebih kecil di bagian bawah. Gel fiksatif hanya dapat memisahkan protein dalam rentang pemisahannya, tidak terlalu besar atau terlalu kecil. Gel gradien tidak memiliki batasan ini, di mana molekul besar dipisahkan di bagian atas dan molekul kecil dipisahkan di bagian bawah. Karena ukuran pori gel gradien secara bertahap menjadi lebih kecil, ia memiliki efek pemusatan pada protein di dekat ukuran pori yang tidak dapat ditembus oleh protein, sehingga zona yang sangat sempit akan terbentuk setelah elektroforesis. Protein dengan perbedaan kecil dalam berat molekul sering kali tidak dapat dipisahkan pada gel tetap tetapi dapat dipisahkan pada gel gradien.

3. Pengenalan lem prefabrikasi yang disediakan oleh Yeasen

Yeasen Gel Protein Pracetak Plus berisi Konsentrasi gradien dan konsentrasi tetap, berbagai konsentrasi yang berbeda dapat memenuhi kebutuhan elektroforesis protein yang berbeda. Disiapkan melalui proses persiapan gel yang unik dan memiliki efek elektroforesis yang sangat baik. Kompatibel dengan semua jenis tangki elektroforesis di pasaran (Bio-RAD, Tanon, Life, dll.) dan memiliki keunggulan kemampuan beradaptasi yang luas, resolusi tinggi, stabilitas tinggi, pita yang jelas dan seragam, dll.

3.1 Yeasen Gel Protein Pracetak Plus tingkatkan ke papan plastik, kualitas lebih baik!

Mudah digunakan: siap digunakan; Sobek pita perekat dari bagian bawah papan plastik

Berbagai macam aplikasi: kompatibel dengan protein terdenaturasi dan protein alami

Pita bening: Perlakuan khusus pelat plastik sangat mengurangi penyerapan protein

Menghemat waktu: percobaan dapat diselesaikan dalam waktu 18 menit paling cepat

Jaminan kualitas: jaminan stabilitas antar batch yang ketat

Umur simpan yang lama: dapat disimpan pada suhu 4℃ selama 12 bulan

3.2 Parameter berikut dapat membantu Anda memilih seri gel yang sesuai

Sistem penyangga elektroforesis: penyangga protein terdenaturasi atau penyangga protein alami

Jumlah sumur dan pemuatan sampel: 10 atau 15 sumur, ukuran sampel maksimum masing-masing adalah 70 μL dan 40 μL

konsentrasi gel: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabel 1.Konsentrasi gel dan rentang pemisahan linier

3.3 Data menunjukkan

Gambar 1. Data menunjukkan

Gambar 2. Data menunjukkan

4. Tanya Jawab Umum

Q1: Apakah harus pracetak? gel ditempatkan pada suhu 4℃? Apakah penting jika Anda membiarkannya pada suhu ruangan selama beberapa saat?

A: Direkomendasikan 4℃, dapat disimpan selama 12 bulan. Jangan simpan di bawah 0℃, dapat disimpan pada suhu ruangan (25℃) selama 30 hari.

Q2: Bagaimana cara memilih antara konsentrasi gradien dan konsentrasi tetap? Berapa berat molekul minimum protein yang dipisahkan dengan precast? gel?

A: Ukuran pemisahan protein dengan precast gel terkait dengan konsentrasinya, dan rentang pemisahan yang sesuai ditunjukkan pada gambar di atas.

Precast konsentrasi tetap gel memiliki resolusi yang lebih baik. Konsentrasi gradien pracetak gel memiliki jangkauan pemisahan yang lebih luas dan jangkauan aplikasi yang lebih luas; Pelanggan harus memilih konsentrasi yang tepat berdasarkan kebutuhannya sendiri.

Precast gradien 4%-20% kami gel (Cat#36250, Cat#36256) memiliki rentang pemisahan yang luas untuk protein serendah 3,5kDa.

Gambar 3. Pracetak gradien data gelnya

Q3: Apakah pracetak gel harus dilengkapi dengan buffer khusus? Bisakah Anda membuat buffer sendiri?

A: Yeasen penyangga khusus (Cat#36236, Cat#36237) dan pracetak aplikasi gel lebih baik. Jangan dicampur dengan buffer lain. Buffer dapat disiapkan dengan membeli reagen, tetapi pelanggan perlu menggunakan rumus kami, yang dapat ditemukan di pracetak yang relevan petunjuk gel.

Q4: Bagaimana cara membedakan antara gel pemisah? dan gel pekat? Apakah diperlukan untuk elektroforesis tegangan penampang?

A: Kedua komponennya sama, tetapi konsentrasinya tidak sama, tidak dapat dibedakan dengan mata telanjang; Ketinggian lem pekat adalah 1,5 cm.

Tidak, elektroforesis pada 150 V direkomendasikan, dan diperlukan waktu 30-40 menit untuk menyelesaikan percobaan.

Q5: Apakah pracetak Anda gel yang cocok untuk semua jenis tangki elektroforesis di pasaran?

A: Ya, kami precast gel cocok untuk semua jenis tangki elektroforesis di pasaran,

Bio-rad Mini-Protean (Sistem II/3 /Tetra) dan Tanon VE180 (Perhatikan rakitan terbalik strip penyegel);

Life Technology Novex Mini-cell (digunakan dengan penyekat khusus);

Lebar pelat gel lainnya dalam tangki elektroforesis 10 cm.

5. Detail produk

Produk yang disediakan oleh Yeasen adalah sebagai berikut:

Tabel 2.Detail produk