—Nyalakan selaput noda Anda, di ujung jari Anda!
Reagen ECL, yang dikenal sebagai substrat chemiluminescent untuk peroksidase lobak (HRP), saat ini merupakan reagen paling sensitif yang digunakan dalam deteksi Western blotting. Masalah umum dengan reagen ECL di pasaran meliputi pendinginan, latar belakang tinggi, ketidakstabilan, dan kesulitan dalam mendeteksi protein dengan kelimpahan rendah, yang dapat memengaruhi hasil eksperimen akhir.
Fitur Produk
- Sensitivitas Luar Biasa — Deteksi antigen dari pikogram hingga tingkat femtogram rendah.
- Rasio Sinyal-ke-Derau yang Lebih Tinggi — Substrat luminescent yang presisi mengurangi kebisingan latar belakang.
- Lebih Efisien Antibodi — Sistem substrat yang dioptimalkan untuk afinitas pengikatan antibodi yang lebih tinggi.
- Rasio Biaya-Kinerja Tinggi — Kinerja lebih tinggi dengan harga lebih rendah.
- Stabilitas yang sangat baik — Oksidan baru memastikan penyimpanan yang stabil pada suhu 4°C hingga satu tahun.
Prinsip Produk
Prinsip inti deteksi reagen ECL adalah pendaran cahaya dari reaksi oksidasi: Luminol, komponen utama substrat pendaran cahaya, dioksidasi oleh H2O2 dalam kondisi basa melalui katalisis peroksidase lobak (HRP), membentuk zat antara keadaan tereksitasi dari asam 3-amino-ftalat. Ketika kembali ke keadaan dasar, foton dipancarkan, dengan panjang gelombang emisi maksimum 425 nm. Sinyal foton ini dapat ditangkap oleh film sinar-X atau perangkat pencitraan CCD.
Panduan Pemilihan
Jadi, produk mana yang harus Anda pilih untuk percobaan Anda?
Tabel 1.Panduan Pemilihan Reagen ECL
| | ECL yang ditingkatkan Tipe yang Disempurnakan | Super ECL Tipe Sangat Sensitif | SuperDura Tipe Tahan Lama | Sinyal Maxi Tipe Sensitivitas Ultra Tinggi |
| Contoh Yang Berlaku | Target dengan kelimpahan tinggi, sampel protein rutin | Target dengan kelimpahan rendah, sampel terbatas | Target dengan kelimpahan rendah, sampel terbatas | Target dengan kelimpahan yang sangat rendah, sampel yang berharga |
| Sensitivitas Deteksi | Tingkat pikogram sedang | Tingkat pikogram rendah | Tingkat femtogram sedang | Tingkat femtogram rendah |
| Durasi Sinyal | < 2 jam | < 12 jam | < 24 jam | < 8 jam |
| Sistem Deteksi yang Berlaku | Semua reagen cocok untuk film sinar-X, perangkat pencitraan CCD | |||
| Konsentrasi Pengenceran Antibodi Primer | Skala 1:1000-1:4000 | Skala 1:1000-1:10.000 | Skala 1:1000-1:50.000 | Tingkat kepekatan 1:5000-1:100.000 |
| Konsentrasi Pengenceran Antibodi Sekunder | Skala 1:1000-1:4000 | Skala 1:2000-1:10.000
| Skala 1:50.000-1:250.000 | Skala 1:100.000-1:500.000 |
| Membran yang Direkomendasikan | membran NC | Membran NC atau membran PVDF | Membran NC atau membran PVDF | Membran NC atau membran PVDF |
| Stabilitas Penyimpanan | Suhu ruangan selama 1 tahun | 4°C selama 1 tahun, suhu ruangan selama setengah tahun | ||
| Keuntungan | Sinyal terkuat di antara tingkat sensitivitas yang sama | Rasio biaya-kinerja tertinggi, cocok untuk sebagian besar eksperimen WB | Durasi sinyal terpanjang, sangat cocok untuk beberapa eksposur | Sensitivitas yang sangat baik, sangat cocok untuk deteksi protein jejak |
Catatan: Konsentrasi pengenceran antibodi yang disarankan didasarkan pada konsentrasi stok antibodi 1 mg/mL.
Aplikasi Produk
Gambar 1. Perbandingan efek deteksi antara
Gambar 2. Perbandingan efek deteksi antara
Gambar 3.Perbandingan efek deteksi antara
Literatur yang Diterbitkan
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, dkk. Sel B yang mengekspresikan leusin-tRNA-sintase-2 berkontribusi terhadap imunoevasion kanker kolorektal. Imunitas. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, dkk.Struktur dan rekayasa miniaturAcidibacillus sulfuroxidansCas12f1[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, dkk. Makrofag IRX3 meningkatkan obesitas dan peradangan metabolik yang disebabkan oleh pola makan. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (JIKA:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, dkk. Pengatur ritme dan memori hipokampus melalui plastisitas sinaptik pada interneuron penghambat. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Keunggulan Harga
Gambar 7.Perbandingan harga
Pertanyaan yang Sering Diajukan
| Masalah yang Dihadapi | Analisis Penyebab | Solusi yang Direkomendasikan |
| Film memiliki gambar terbalik | Film memiliki gambar terbalik | Film memiliki gambar terbalik |
| Film memiliki pita coklat atau kuning | ||
| Pemadaman fluoresensi | Waktu operasi terlalu lama, membran mengering secara bertahap | Mencegah membran mengering |
| Kontaminasi pada plastik pembungkus, pengembang, atau perekat | Mengembangkan kebiasaan eksperimen yang baik | |
| HRP tidak mencukupi dalam sistem reaksi | Meningkatkan materi berlabel HRP | |
| Tidak ada pita atau sinyal lemah pada film | Efisiensi transfer rendah | Tingkatkan efisiensi transfer, gunakan spidol pra-noda untuk penilaian |
| Antigen/antibodi tidak mencukupi atau tidak cocok | Tingkatkan jumlah antigen/antibodi atau pilih antigen/antibodi yang sesuai | |
| Masalah film sinar-X | Jika film X-ray berwarna hitam seluruhnya (tidak transparan) setelah terpapar, itu menunjukkan film tersebut terpapar sepenuhnya; gunakan film X-ray baru | |
| Masalah pengembang/pemecahan masalah | Lakukan pra-ekspos film untuk memeriksa; jika ada masalah, ganti dengan pengembang/pemecah masalah yang baru | |
| HRP berlebihan dalam sistem reaksi | Encerkan bahan berlabel HRP | |
| Latar Belakang Tinggi | Konsentrasi antibodi primer dan sekunder terlalu tinggi | Mengurangi konsentrasi antibodi, memperpanjang waktu pemblokiran |
| Antibodi tidak dibersihkan secara menyeluruh | Tingkatkan jumlah pencucian | |
| Pemblokiran tidak lengkap | Optimalkan kondisi pemblokiran | |
| Agen pemblokiran yang salah digunakan | Gunakan agen pemblokiran yang berbeda | |
| Paparan berlebihan | Kurangi waktu pencahayaan | |
| Spesifisitas antibodi yang buruk | Ganti dengan antibodi berkualitas tinggi | |
| HRP berlebihan dalam sistem reaksi | Encerkan bahan berlabel HRP | |
| Band dengan tempat kosong | Konsentrasi tinggi antigen dan antibodi sekunder | Encerkan sampel dan jalankan kembali gel, atau dinginkan larutan kromogenik campuran dan aplikasikan ke membran untuk pengembangan cepat dan segera. |
| Bentuk pita tidak beraturan | Gelembung udara selama pemindahan atau hidrasi yang tidak merata dengan metanol (untuk membran PVDF) | Mengoptimalkan kondisi transfer. |
| Tempat film | Agregat bahan berlabel HRP | Filter bahan berlabel HRP dengan membran 0,2μm |
| Pita non-spesifik | HRP berlebihan dalam sistem reaksi | Encerkan bahan berlabel HRP |
| SDS menyebabkan pengikatan protein non-spesifik | Jangan gunakan SDS dalam prosedur percobaan | |
| Spesifisitas antibodi yang buruk | Ganti dengan antibodi berkualitas tinggi | |
| Pemblokiran tidak memadai | Tingkatkan waktu pemblokiran atau gunakan agen pemblokiran yang berbeda |
Informasi Pemesanan
| Nama Produk | Nomor Produk | Spesifikasi |
| Reagen Deteksi Super ECL | 36208ES60/76 | 100ml/50ml |
| Kit Substrat Chemiluminescent ECL yang Disempurnakan | 36222ES60/76 | 100ml/500ml |
| Substrat Durasi Diperpanjang SuperSignal SuperDura | 36223ES10/60/70/76 | 10ml/100ml/200ml/500ml |
| Substrat Sensitivitas Maksimum SuperSignal MaxiSignal | 36224ES10/60/70/76 | 10ml/100ml/200ml/500ml |