Untuk menyediakan lebih banyak pilihan pengobatan bagi pasien diabetes, beberapa obat diabetes baru muncul pada awal abad ke-21, seperti analog glukagon-like peptide-1 (GLP-1). Semaglutide, sebagai salah satu obat representatif analog GLP-1, telah terbukti dalam berbagai studi uji klinis untuk mengendalikan gula darah secara efektif bila dikombinasikan dengan berbagai obat hipoglikemik oral, dan dapat membantu pasien menurunkan berat badan, mengurangi tekanan sistolik, dan meningkatkan fungsi sel β pankreas. Ketiga formulasinya (injeksi hipoglikemik Ozempic, obat hipoglikemik oral Rybelsus, dan injeksi penurunan berat badan Wegovy) melampaui penjualan $20 miliar pada tahun 2023. Karena kinerjanya yang luar biasa dalam penurunan gula darah dan penurunan berat badanIndustri ini mengharapkan Semaglutide untuk mempertahankan momentum penjualan yang kuat untuk beberapa waktu, menarik banyak perusahaan untuk bersaing dalam tata letak!

Struktur rantai utama Semaglutide adalah polipeptida antara 29 asam amino Arg34GLP-1(9-37) atau polipeptida antara 27 asam amino Arg34GLP-1(11-37). Produksi dan pembuatan polipeptida antara ini terutama mencakup metode sintesis kimia dan biopreparasi. Dibandingkan dengan sintesis kimia, biopreparasi telah menembus hambatan kapasitas dan lebih cocok untuk produksi berkelanjutan skala besar, yang selanjutnya dapat mengurangi biaya produksi dan membawa manfaat ekonomi yang lebih signifikan.

Tabel 1. Contoh metode biopreparasi untuk polipeptida intermediet semaglutida

	Metode biopreparasi (Contoh 1)	Metode biopreparasi (Contoh 2)
Sintesis Gen	Mensintesis urutan protein fusi, termasuk peptida fusi, situs pembelahan enterokinase, dan urutan molekul utama target	Mensintesis urutan ekspresi tandem dengan urutan gen GLP-1(9-37)
Rekayasa Konstruksi Bakteri	Memasukkan ke dalam E. coli untuk membangun bakteri rekayasa rekombinan	Memasukkan ke dalam E. coli untuk membangun bakteri rekayasa rekombinan
Ekspresi Protein Fusi	Dengan mengoptimalkan urutan peptida fusi, mengubah titik isoelektrik dan hidrofilisitas protein, dll., ekspresi protein fusi secara efektif ditingkatkan	Setelah induksi fermentasi kepadatan tinggi, protein badan inklusi ekspresi tandem yang mengekspresikan GLP-1(9-37) diperoleh, dan pelipatan ulang menghasilkan protein larut
Akuisisi Peptida Menengah	Setelah protein fusi mengalami pembelahan enterokinase, pemurnian, dan langkah-langkah lainnya, polipeptida perantara semaglutida Arg34GLP-1(9-37) dapat diperoleh	Protein yang larut dapat diperoleh setelah menjalani pembelahan enzim dua langkah dengan enzim Kex2 dan karboksipeptidase B, dan langkah pemurnian, untuk mendapatkan polipeptida perantara semaglutida GLP-1(9-37)

Enzim Enterokinase atau Kex2 yang dikombinasikan dengan karboksipeptidase B merupakan enzim kunci untuk rantai peptida utama Semaglutide (metode biopreparasi), dan efek pemotongan serta biaya enzim sangat penting untuk produksi.Yisheng Biology berkomitmen untuk menyediakan bahan baku enzim yang stabil untuk perusahaan farmasi, menawarkan enzim berkualitas tinggi dan standar kontrol kualitas lengkap untuk membantu pelanggan meningkatkan kapasitas produksi dan stabilitas batch, mengurangi biaya, dan dengan cepat memasuki pasar. pasar.

Yeasen solusi menyeluruh untuk Semaglutide

1.Enterokinase Rekombinan

Enterokinase rekombinan (rEK) adalah subunit rantai ringan enterokinase usus sapi dengan kemurnian tinggi, yang memiliki aktivitas enzim pemotongan spesifik yang sama seperti enterokinase yang diekstraksi secara alami, dengan situs pemotongan Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, yang mampu menghilangkan protein fusi yang terletak di N-terminus protein untuk menghilangkan tag fusi yang tidak perlu, dan merupakan protease yang umum dipilih untuk fusi N-terminal. Ia memiliki tingkat pemotongan tidak teratur yang rendah pada residu lainnya.

Yisheng saat ini menawarkan enterokinase rekombinan dari berbagai sumber, berbagai tingkatan, dan dengan atau tanpa tag His agar pelanggan dapat memilih.

Yeasen Rekombinan Termasuk keluarga sapi Enterokinase, His, Diekspresikan dalam Ragi adalah enterokinase sapi dengan kemurnian tinggi, aktivitas tinggi, dan sangat spesifik yang diekspresikan oleh sekresi Pichia pastoris. Ia dapat secara efektif membelah protein fusi dalam rentang pH yang luas (4,5-9,5) dan rentang suhu yang luas, dan masih memiliki aktivitas parsial di bawah berbagai deterjen dan denaturan. Produk ini memiliki label His, yang dapat dengan mudah dihilangkan melalui Ni²⁺ kolom afinitas setelah reaksi pemotongan, sangat menyederhanakan proses pemurnian selanjutnya.

Fitur

Spesifisitas tinggi: Protease spesifik yang memotong ujung karboksil lisin yang mengandung empat asam aspartat: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;

Kemurnian tinggi: Tidak ada protease lain, tidak ada pemotongan non-spesifik;

Tidak berasal dari hewan: Produksi rekombinan, tidak ada kontaminasi virus eksogen, tidak menggunakan bahan baku yang berasal dari hewan dalam proses produksi;

Kualitas stabil: Produksi batch dapat memastikan produksi batch yang stabil dan berkelanjutan; tidak ada perbedaan antar batch, kualitas stabil;

Kapasitas yang cukup: Fermenter 500L dapat memperoleh ~50 MU enterokinase, Yeasen memiliki 5L-1500L sistem fermentor yang berbeda untuk memenuhi kebutuhan pelanggan yang berbeda pada berbagai tahap untuk kebutuhan batch produk;

Pasokan produk dengan mutu berbeda: Produk kelas R&D (20395ES), kelas GMP (20396ES), kelas GMP mematuhi sistem manajemen mutu ISO 13485.

Data Uji

Uji aktivitas enterokinase:

Gambar 1. Efek pemotongan enzim Yeasen enterokinase (20395ES) sesuai dengan Pesaing N

Catatan: Substrat positif (20391ES) adalah protein fusi yang terdiri dari dua urutan protein spesifik yang dihubungkan oleh DDDDK (situs pengenalan dan pemotongan enterokinase), dengan berat molekul keseluruhan sekitar 64,6 kDa, yang dapat dipotong secara spesifik menjadi dua fragmen protein independen oleh enterokinase, dengan berat molekul masing-masing sekitar 27,9 kDa dan 36,6 kDa. Produk ini, sebagai substrat enterokinase, dapat digunakan untuk deteksi aktivitas enzim semi-kuantitatif atau kualitatif dari enterokinase rekombinan atau alami.

Uji kemurnian enterokinase:

Catatan: Nilai teoritis enterokinase adalah 22,7 kDa. Karena efek glikosilasi setelah ekspresi dalam Pichia pastoris, SDS-PAGE menunjukkan bahwa berat molekul protein target adalah sekitar 40 kDa. Umumnya, pita glikosilasi akan memiliki pita yang sedikit menyebar ke atas (seperti yang ditunjukkan pada gambar kanan). Perusahaan kami juga dapat menyediakan enzim deglikosilasi Endo H (Cat#20414) bagi pelanggan untuk mendeglikosilasi dan menjalankan gel guna mengukur kemurnian (seperti yang ditunjukkan pada gambar kiri).

Uji spesifisitas pemotongan enterokinase:

Gambar 3. Yeasen enterokinase (20395ES) memiliki pemotongan non-spesifik yang lebih sedikit daripada pesaing impor N

Catatan: Dalam kondisi yang sama, Yeasen enterokinase (20395ES) dan enterokinase pesaing impor N digunakan untuk uji pemotongan enzim. Hasil penelitian menunjukkan bahwa setelah pemurnian, pengotor pemotongan non-spesifik yang dihasilkan oleh Yeasen enterokinase (20395ES) secara signifikan lebih rendah dibandingkan dengan pesaing impor N.

Enterokinase mengulangi pembekuan-pencairan, uji stabilitas yang dipercepat:

Gambar 4. Yeasen enterokinase (20395ES) mengulangi pembekuan-pencairan, uji stabilitas yang dipercepat menunjukkan bahwa aktivitas enzim tidak berubah secara signifikan.

Catatan: Yeasen enterokinase (20395ES) dipilih secara acak 2 batch, diulang beku-cair 10 kali, 20 kali, aktivitas enzim tidak berubah secara signifikan dari aktivitas enzim awal.

Penyimpanan pada suhu 25°C selama 7, 16, 32 hari, 37°C selama 7, 14 hari, aktivitas enzim tidak berubah secara signifikan dari aktivitas enzim awal.

2. Enzim Kex2 Rekombinan, Karboksipeptidase B

Tabel 2.  Yeasen Panduan Pemilihan Produk Enzim Kex2 Rekombinan, Karboksipeptidase B

Nomor Produk	20418ES	20417ES
Produk Nama	Protease Kex2 Rekombinan, Diekspresikan dalam Ragi	CPB rekombinan, Diekspresikan dalam E.coli
Mutu produk	Kelas GMP	Kelas GMP
Sumber	Ekspresi Rekombinan dari Pichia pastoris	Ekspresi Rekombinan dari E. koli
Aktivitas	≥10,0 unit/mg pro	≥170 Satuan USP/mg pro
Situs Pembelahan	Secara khusus mengenali dan membelah ikatan peptida di terminal asam karboksilat dari asam amino dibasic seperti Arg-Arg, Lys-Arg	Secara khusus menghidrolisis protein di sisi amino-terminal asam amino basa (lisin, arginin, histidin) di C-terminus
Aplikasi Produk	1. Proses pembelahan enzim dalam produksi obat peptida. 2. Pencernaan protein secara enzimatik dan pemetaan peptida, pengurutan, dll.	1. Produksi insulin rekombinan dan analognya. 2.Penentuan asam amino pada C-terminus protein. 3. Penghapusan tag histidin pada C-terminus protein. 4. Produksi zat peptida rekombinan lainnya. 5. Sintesis enzimatik senyawa khusus tertentu.

Enzim Kex2 dikombinasikan dengan karboksipeptidase B: Persyaratan proses ekspresi tandem, hasil tinggi dari intermediet semaglutida setelah pemotongan enzim

kamusantai saja Basis Produksi Enzim Kelas GMP

Basis Produksi Enzim Molekuler Ultra-Bersih Bersertifikasi ISO - UCF.ME, dilengkapi dengan peralatan pemurnian AKTA dan analisis fisikokimia kelas industri, unit fermentasi kepadatan tinggi seratus liter, bengkel bersih standar sepuluh ribu mutu, dan jalur produksi otomatis. Pabrik ini memiliki sistem fermentasi dan pemurnian dengan berbagai spesifikasi, termasuk 5L, 10L, 30L, 100L, 500L, dan 1.500L, dengan kemampuan untuk meningkatkan produksi dari 5L menjadi 1.500L di bidang industrialisasi enzim molekuler, yang sepenuhnya memenuhi kebutuhan bahan baku enzim inti dari pelanggan hilir pada berbagai tahap seperti penelitian dan pengembangan, skala percontohan, dan produksi skala besar.

Yeasen memiliki tim R&D yang kuat dan basis produksi enzim yang canggih, terus meningkatkan kualitas dan kapasitas enzim utama untuk produksi semaglutida (enterokinase rekombinan) melalui inovasi dan pengoptimalan teknologi yang berkelanjutan, menawarkan harga gradien untuk spesifikasi yang berbeda guna memenuhi berbagai kebutuhan pelanggan di berbagai tahap produksi.

Informasi produk promosi

Nama Produk	Nomor Produk	Spesifikasi	Daftar Harga($）	Promosi Harga($）
Enterokinase Bovin Rekombinan, His, Diekspresikan dalam Ragi	20395ES60/76/90/ tahun 92/94	100 U/500 U/ 500angka 0 kamu/ 100 KU/ 1 MU (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ tahun 19600

Informasi produk terkait

Nama Produk	Nomor Produk	Spesifikasi
Protein Kontrol Pembelahan (Enterokinase)	Tanggal 20391ES03/11	1mg/4 mg
Protease Kex2 Rekombinan, Diekspresikan dalam Ragi	nomor 20418ES60	100 mikrogram
CPB rekombinan, Diekspresikan dalam E.coli	Nomor telepon 20417ES03/10	1mg/10mg dosis tunggal
Endo H	Nomor 20414ES92/97	10000U/50000U