จุดที่ต้องใส่ใจ

1. วิธีการจัดเก็บ: จัดเก็บได้อย่างเสถียรที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 ถึง 6 เดือน สำหรับระยะเวลาที่ยาวนานกว่านั้น ให้เก็บที่อุณหภูมิ 4°C หรือ -20°C
2. DNA Marker เหมาะสำหรับการวิเคราะห์แถบ DNA ในอิเล็กโทรโฟรีซิสเจลอะกาโรส และไม่แนะนำให้ใช้ในอิเล็กโทรโฟรีซิสเจลโพลีอะคริลาไมด์
3. การเลือกความเข้มข้นของเจลและสารละลายบัฟเฟอร์:

ความเข้มข้นของอะกาโรส	ช่วงการแยกที่มีประสิทธิภาพ (bp)	บัฟเฟอร์ที่แนะนำ
0.5%	2,000-50,000	1×ทีเออี
0.8%	800-10,000	1×ทีเออี
1.0%	400-8,000	1×ทีเออี
1.2%	300-7,000	1×ทีเออี
1.5%	200-3,000	1×TAE/0.5×TBE
2.0%	100-2,000	1×TAE/0.5×TBE
3.0%	25-1,000	0.5×ทีบีอี

【หมายเหตุ】: สำหรับชิ้นส่วนขนาดใหญ่ ให้เลือกเจลที่มีความเข้มข้นต่ำและใช้ระบบบัฟเฟอร์ TAE สำหรับอิเล็กโทรโฟเรซิส สำหรับชิ้นส่วนขนาดเล็ก ให้เลือกเจลที่มีความเข้มข้นสูงและใช้ระบบบัฟเฟอร์ TBE สำหรับอิเล็กโทรโฟเรซิส

4. การคัดเลือกสีย้อมกรดนิวคลีอิก:

EB (เอทิเดียมโบรไมด์) เป็นสีย้อมเรืองแสงที่มีความไวสูง โดยมีความยาวคลื่นในการกระตุ้นสูงสุด 302 นาโนเมตร ซึ่งสามารถใช้สังเกตกรดนิวคลีอิกในเจลอะกาโรสและโพลีอะคริลาไมด์ได้ EB แทรกซึมกับเบสในกรดนิวคลีอิกและทราบกันว่าเป็นพิษ

YeaRed (Cat#10202ES76) และ YeaGreen (Cat#10204ES76) เป็นสีย้อมกรดนิวคลีอิกใหม่ที่ไม่เป็นพิษซึ่งมีโครงสร้างโมเลกุลน้ำมันเฉพาะตัวซึ่งไม่สามารถทะลุผ่านเยื่อหุ้มเซลล์เพื่อเข้าสู่เซลล์ได้ ไม่ระเหยหรือระเหิดได้ง่าย และด้วยเหตุนี้จึงไม่ถูกสูดดมโดยมนุษย์ จึงรับประกันความปลอดภัยของผู้ทดลองผลการทดสอบ Ames ยังแสดงให้เห็นว่า YeaRed และ YeaGreen ไม่มีการกลายพันธุ์ที่ความเข้มข้นของการย้อมเจล ทำให้เป็นทางเลือกที่ปลอดภัยและไม่เป็นพิษต่อ EB ที่ก่อมะเร็งได้สูง นอกจากนี้ YeaRed ยังมีลักษณะของสเปกตรัมเหมือนกับ EB จึงสามารถทดแทน EB ได้อย่างสมบูรณ์แบบโดยไม่ต้องเปลี่ยนระบบถ่ายภาพที่มีอยู่

ถาม-ตอบ

คำถามที่ 1: เหตุใดแถบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงของ DNA Marker จึงลากและแยกออกจากกันไม่ได้ดี?

A1: สีย้อมกรดนิวคลีอิกไม่สามารถจับกับ DNA Marker ได้อย่างเพียงพอ เนื่องจากแถบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงต้องใช้สีย้อมกรดนิวคลีอิกมากขึ้น หากสีย้อมไม่อิ่มตัว แถบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงจะไวต่อผลกระทบจากการโยกย้ายมากขึ้น ทำให้เกิดการลากและการแยกตัวที่ไม่ดี ขอแนะนำให้ลดปริมาณ DNA Marker ที่ใช้ (สามารถเจือจางด้วยน้ำได้ 5 เท่า จากนั้นจึงเติมได้ 8-10 μL) หรือเพิ่มความเข้มข้นของสีย้อมกรดนิวคลีอิก

คำถามที่ 2: ทำไมจึงไม่มีแบนด์หรือแบนด์อ่อนสำหรับ DNA?

A2:

1. การโหลด DNA ไม่เพียงพอ เพิ่มปริมาณการโหลด;
2. แถบ DNA หมดออกจากเจลแล้ว
3. แถบ DNA ถูกบดบังด้วยสีย้อมสำหรับการติดตาม
4. ไม่มีการเติมสีกรดนิวคลีอิกลงในเจล
5. หากปล่อยเจลอะกาโรสไว้นานเกินไป แนะนำให้เตรียมและใช้ทันที

คำถามที่ 3: ทำไมแถบเครื่องหมาย DNA จึงกระจายตัว?

A3:

1. การย่อยสลายบางส่วนของ DNA ตรวจสอบว่าสภาวะการเก็บรักษาอุ่นเกินไปหรือไม่
2. แรงดันไฟฟ้าระหว่างอิเล็กโตรโฟเรซิสต่ำเกินไป ทำให้แถบ DNA แพร่กระจาย แนะนำให้ใช้เจลที่ 110V-130 วี นานกว่า 45 นาที;
3. ความเข้มข้นของเจลอะกาโรสไม่เหมาะสม ให้เตรียมตามความเข้มข้นของเจลที่แนะนำในคู่มือ
4. เจลอะกาโรสมีคุณภาพไม่ดี แนะนำให้เตรียมเจลใหม่

คำถามที่ 4: เหตุใดแถบตัวอย่างจึงดูเหมือนว่าจะมีขนาดต่างกันเมื่อเปรียบเทียบกับแถบ DNA Marker

ก4:

1. การโยกย้ายของดีเอ็นเอไม่ได้ขึ้นอยู่กับขนาดจริงเท่านั้น แต่ยังขึ้นอยู่กับว่าดีเอ็นเอนั้นรวมกับโปรตีน สถานะไอออน โครงสร้างของดีเอ็นเอ เจล และปัจจัยอื่นๆ หรือไม่ อัตราการโยกย้ายแบบอิเล็กโทรโฟเรติกของกรดนิวคลีอิกนั้นเกี่ยวข้องกับอัตราส่วนของดีเอ็นเอต่อสีย้อม และเมื่อปริมาณสีย้อมของกรดนิวคลีอิกไม่เพียงพอ อาจทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการโยกย้ายที่มากขึ้นได้
2. หากตัวอย่างมีไอออนเกลือในปริมาณสูง อาจทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการอพยพอย่างมีนัยสำคัญได้เช่นกัน
3. หากปริมาณตัวอย่างที่โหลดแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากปริมาณแถบ DNA Marker หรือหากปริมาตรแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ อาจทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการโยกย้ายที่มากขึ้นได้

ข้อมูลการสั่งซื้อ

การวางแนวผลิตภัณฑ์	ชื่อสินค้า	หมายเลขสินค้า	ข้อมูลจำเพาะ
เครื่องหมายดีเอ็นเอ	เครื่องหมายดีเอ็นเอ GoldBand DL2000	10501ES60/80	100 ตัน/10×100 ตัน
	เครื่องหมายดีเอ็นเอ GoldBand DL5000	10504ES60/80	100 ตัน/10×100 ตัน
	บันได DNA 100bp ของ GoldBand	10507ES60/80	100 ตัน/10×100 ตัน
	บันได DNA GoldBand 1 kb	10510ES60/80	100 ตัน/10×100 ตัน