การวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสเป็นเทคนิคการวิเคราะห์โปรตีน โปรตีนมีประจุลบหรือบวกในบัฟเฟอร์และเคลื่อนตัวไปที่ขั้วบวกในสนามไฟฟ้าที่เรียกว่าอิเล็กโทรโฟเรซิส โมเลกุลโปรตีนต่าง ๆ มีการเคลื่อนที่ด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสต่างกัน ส่วนที่สำคัญมากอย่างหนึ่งของการวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสคือการเตรียมเจล การเตรียมเจลแบบทั่วไปมักใช้เวลาหลายชั่วโมง และยังมีปัญหา เช่น การรั่วไหลของของเหลว เจลที่ไม่สม่ำเสมอ และฟองอากาศ นอกเหนือจากความยุ่งยากในการเตรียมแล้ว รีเอเจนต์ของวัตถุดิบยังมีพิษในระดับหนึ่ง ซึ่งจะก่อให้เกิดอันตรายต่อตัวเครื่องจ่ายกาว และลักษณะของกาวสำเร็จรูปสามารถแก้ปัญหาเหล่านี้ได้ หลักการพื้นฐานของการวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสคืออะไร และเจลสำเร็จรูปมีหน้าที่และหลักการอย่างไร

1. หลักการพื้นฐานของการวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสคืออะไร?
2. กาวสำเร็จรูปมีหน้าที่และหลักการอะไร?
3. การแนะนำกาวสำเร็จรูปที่ให้มาโดย Yeasen
4. คำถามที่พบบ่อย
5. รายละเอียดสินค้า

1. หลักการพื้นฐานของการวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสคืออะไร?

โมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีววิทยาส่วนใหญ่ เช่น โปรตีนและกรดนิวคลีอิก มีกลุ่มประจุบวกและประจุลบ ซึ่งเรียกว่า zwitterions วิธีการอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบโซนซึ่งอนุภาคกระจายอยู่ในสารละลาย และเจลแป้ง เจลวุ้นหรือเจลอะกาโรส เจลโพลีอะคริลาไมด์ เป็นต้น เป็นตัวรองรับ เรียกว่าอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเจล อิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเจลโพลีอะคริลาไมด์เป็นวิธีอิเล็กโทรโฟรีซิสซึ่งตัวรองรับคือเจลโพลีอะคริลาไมด์ เชื่อกันว่าขนาดของรูพรุนของเจลโพลีอะคริลาไมด์ได้รับการควบคุมเพื่อทำให้เกิดการพอลิเมอไรเซชัน และโปรตีนจะถูกแยกออกจากกันโดยการทำงานของตะแกรงโมเลกุลที่คล้ายกัน

การวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟรีซิสประกอบด้วย 2 รูปแบบ ได้แก่ การวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเจลโพลีอะคริลาไมด์ดั้งเดิม (Native-PAGE) และการวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเจลโพลีอะคริลาไมด์โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS-PAGE) โดย Native-PAGE จะรักษาโปรตีนให้คงอยู่ในสภาพเดิมระหว่างการวิเคราะห์ด้วยอิเล็กโทรโฟรีซิส และแยกโปรตีนออกในลักษณะไล่ระดับตามน้ำหนักโมเลกุล รูปร่าง และประจุที่เกี่ยวข้อง ในทางกลับกัน SDS-PAGE จะแยกโปรตีนออกตามน้ำหนักโมเลกุลของซับยูนิต SDS เป็นสารทำความสะอาดแบบแอนไออนิก ในฐานะของสารทำให้เสียสภาพและตัวทำละลาย มันสามารถทำลายพันธะไฮโดรเจนภายในโมเลกุลและระหว่างโมเลกุล พับโมเลกุล และทำลายโครงสร้างทุติยภูมิและตติยภูมิของโมเลกุลโปรตีนได้ ในฐานะของสารรีดิวซ์ที่มีฤทธิ์แรง เมอร์แคปโตเอธานอล ไดไธโอไทรอิทอล สามารถทำลายพันธะไดซัลไฟด์ระหว่างสารตกค้างของซิสเทอีนได้ หลังจากเติมสารรีดักชันและ SDS ลงในตัวอย่างและเจล โมเลกุลจะถูกดีโพลีเมอร์ไรซ์เป็นโซ่พอลิเปปไทด์ และโซ่ข้างของกรดอะมิโนที่ถูกดีโพลีเมอร์ไรซ์และ SDS จะถูกผสมกันเป็นไมเซลล์โปรตีน-SDS ประจุลบของไมเซลล์โปรตีน-SDS จะเกินประจุเดิมของโปรตีน ทำให้ความแตกต่างของประจุและโครงสร้างระหว่างโมเลกุลต่างๆ หายไป การเคลื่อนที่ของโปรตีนขึ้นอยู่กับมวลโมเลกุลของโปรตีนเท่านั้น และสามารถกำหนดมวลโมเลกุลของโปรตีนได้โดยการเปรียบเทียบกับมาตรฐานมวลโมเลกุลที่ทราบ

2. กาวสำเร็จรูปมีหน้าที่และหลักการอะไร?

เมื่อเปรียบเทียบกับเจลหล่อด้วยมือแบบดั้งเดิม เจลโปรตีนสำเร็จรูป สามารถหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับสารเคมีที่เป็นพิษจำนวนมาก ประหยัดเวลาได้มาก และแก้ปัญหาความแตกต่างจำนวนมากของเจลหล่อด้วยมือได้อย่างมีประสิทธิภาพ

เจลประกอบด้วยชั้นเจลที่แตกต่างกันสองชั้น ชั้นบนเป็นเจลซ้อน และชั้นล่างเป็นเจลแยก เจลซ้อนเรียกอีกอย่างว่าเจลซ้อนความเข้มข้นของเจลค่อนข้างเล็กและขนาดรูพรุนค่อนข้างใหญ่ ตัวอย่างจะถูกเติมลงในเจลซ้อนและทำให้เข้มข้นในโซนแคบๆ ผ่านการเคลื่อนตัวของเจลที่มีขนาดรูพรุนใหญ่ เจลแยกซึ่งเรียกอีกอย่างว่าเจลอิเล็กโตรโฟเรซิส มักมีขนาดรูพรุนเล็ก และการเลือกความเข้มข้นของเจลที่เหมาะสมจะทำให้แยกส่วนประกอบของตัวอย่างได้ดี

เจลแยกสามารถแบ่งออกเป็นเจลคงที่และเจลไล่ระดับ ความเข้มข้นของโพลีอะคริลาไมด์คือ 8%, 10%, 12%, 15%, 4% ถึง 12% และ 4% ถึง 20% สี่ตัวแรกเป็นเจลสำเร็จรูปที่มีความเข้มข้นคงที่และสองตัวสุดท้ายเป็นเจลไล่ระดับ ความเข้มข้นแสดงถึงช่วงของน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนที่แยกได้ การไล่ระดับของเจลเกิดขึ้นจากเครื่องผสมไล่ระดับ สารละลายอะคริลาไมด์ที่มีความเข้มข้นสูงจะถูกเติมลงในแผ่นแก้ว จากนั้นความเข้มข้นของสารละลายจะลดลงตามลำดับ และขนาดรูพรุนของเจลจะใหญ่ขึ้นที่ด้านบนและเล็กลงที่ด้านล่าง เจลตรึงสามารถแยกโปรตีนภายในช่วงการแยกได้เท่านั้น ไม่ใหญ่หรือเล็กเกินไป เจลไล่ระดับไม่มีข้อจำกัดนี้ โดยโมเลกุลขนาดใหญ่จะถูกแยกที่ด้านบนและโมเลกุลขนาดเล็กจะถูกแยกที่ด้านล่าง เนื่องจากขนาดรูพรุนของเจลไล่ระดับจะค่อยๆ เล็กลง จึงมีผลทำให้โปรตีนที่มีขนาดใกล้เคียงกับรูพรุนมีความเข้มข้นมากขึ้น ซึ่งโปรตีนไม่สามารถทะลุผ่านได้ ดังนั้นหลังจากอิเล็กโทรโฟเรซิส โซนที่แคบมากจะเกิดขึ้น โปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่างกันเล็กน้อยมักไม่สามารถแยกออกจากกันบนเจลคงที่ได้ แต่สามารถแยกออกได้บนเจลไล่ระดับ

3. การแนะนำกาวสำเร็จรูปที่ให้มาโดย Yeasen

Yeasen พรีคาสท์ โปรตีน พลัส เจล ประกอบด้วย ความเข้มข้นแบบไล่ระดับและความเข้มข้นคงที่ ความเข้มข้นที่แตกต่างกันหลากหลายสามารถตอบสนองความต้องการของการวิเคราะห์โปรตีนด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสที่แตกต่างกันได้ โดยเตรียมด้วยกระบวนการเตรียมเจลเฉพาะและมีผลการวิเคราะห์ด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสที่ยอดเยี่ยม สามารถใช้งานร่วมกับถังวิเคราะห์ด้วยอิเล็กโทรโฟเรซิสทุกชนิดในท้องตลาด (Bio-RAD, Tanon, Life เป็นต้น) และมีข้อดีคือสามารถปรับใช้ได้หลากหลาย ความละเอียดสูง ความเสถียรสูง แถบใสและสม่ำเสมอ เป็นต้น

3.1 Yeasen พรีคาสท์ โปรตีน พลัส เจล อัพเกรดเป็นแผ่นพลาสติก คุณภาพดีขึ้น!

ใช้งานง่าย: พร้อมใช้งาน ฉีกเทปกาวออกจากด้านล่างของแผ่นพลาสติก

ขอบเขตการใช้งานกว้าง: เข้ากันได้กับโปรตีนที่เปลี่ยนสภาพและโปรตีนธรรมชาติ

แถบใส: การบำบัดพิเศษของแผ่นพลาสติกช่วยลดการดูดซับโปรตีนได้อย่างมาก

ประหยัดเวลา: การทดลองสามารถเสร็จสิ้นได้ในเวลา 18 นาที เร็วที่สุด

การรับประกันคุณภาพ: การรับประกันเสถียรภาพระหว่างชุดที่เข้มงวด

อายุการเก็บรักษาที่ยาวนาน: สามารถเก็บได้ที่อุณหภูมิ 4℃ เป็นเวลา 12 เดือน

3.2 พารามิเตอร์ต่อไปนี้สามารถช่วยคุณเลือกชุดเจลที่เหมาะสมได้

ระบบบัฟเฟอร์อิเล็กโทรโฟเรซิส: บัฟเฟอร์วิ่งโปรตีนที่เปลี่ยนสภาพหรือบัฟเฟอร์วิ่งโปรตีนธรรมชาติ

จำนวนหลุมและการโหลดตัวอย่าง: 10 หรือ 15 หลุม ขนาดตัวอย่างสูงสุดคือ 70 μL และ 40 μL ตามลำดับ

ความเข้มข้นของเจล: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

ตารางที่ 1.ความเข้มข้นของเจลและช่วงการแยกเชิงเส้น

3.3 การแสดงข้อมูล

รูปที่ 1. การแสดงข้อมูล

รูปที่ 2. การแสดงข้อมูล

4. คำถามที่พบบ่อย

คำถามที่ 1: จำเป็นต้องมีแผ่นคอนกรีตสำเร็จรูป เจล วางไว้ที่อุณหภูมิ 4℃ ได้ไหม ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องสักพักจะมีผลไหม?

ก: แนะนำ 4℃ สามารถเก็บได้ 12 เดือน ห้ามเก็บที่อุณหภูมิต่ำกว่า 0℃ สามารถเก็บได้ที่อุณหภูมิห้อง (25℃) เป็นเวลา 30 วัน

คำถามที่ 2: จะเลือกความเข้มข้นแบบไล่ระดับหรือความเข้มข้นคงที่อย่างไร น้ำหนักโมเลกุลขั้นต่ำของโปรตีนที่แยกจากกันโดยพรีคาสท์คือเท่าใด เจลหรอ?

A: ขนาดของการแยกโปรตีนด้วยแผ่นพรีคาสท์ เจล เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นและช่วงการแยกที่สอดคล้องกันดังแสดงในรูปด้านบน

คอนกรีตสำเร็จรูปความเข้มข้นคงที่ เจล มีความละเอียดที่ดีกว่า ความเข้มข้นแบบไล่ระดับ หล่อสำเร็จ เจล มีระยะการแยกที่กว้างขึ้นและขอบเขตการใช้งานที่กว้างขึ้น ลูกค้า ควรเลือกความเข้มข้นให้เหมาะสมกับความต้องการของตัวเอง

แผ่นคอนกรีตสำเร็จรูปความลาดชัน 4%-20% ของเรา เจล (Cat#36250, Cat#36256) มีช่วงการแยกที่กว้างสำหรับโปรตีนที่ต่ำถึง 3.5 kDa

รูปที่ 3. แผ่นคอนกรีตสำเร็จรูปไล่ระดับ ข้อมูลเจล

ไตรมาสที่ 3: แผ่นคอนกรีตสำเร็จรูป เจล ต้องมีบัฟเฟอร์พิเศษติดตั้งมาด้วยไหม สามารถทำบัฟเฟอร์เองได้ไหม

ก: Yeasen บัฟเฟอร์พิเศษ (Cat#36236, Cat#36237) และคอนกรีตสำเร็จรูป เจลสามารถนำไปใช้ได้ดีกว่า ไม่ต้องผสมกับบัฟเฟอร์อื่น ๆ สามารถเตรียมบัฟเฟอร์ได้โดยการซื้อรีเอเจนต์ แต่ลูกค้า ต้องใช้สูตรของเราซึ่งหาได้ในคอนกรีตสำเร็จรูปที่เกี่ยวข้อง คำแนะนำการใช้เจล

Q4: การแยกเจลออกจากกันทำอย่างไร และเจลเข้มข้น? จำเป็นหรือไม่สำหรับการทำอิเล็กโทรโฟเรซิสแบบแรงดันไฟฟ้าภาคตัดขวาง?

A: ส่วนประกอบทั้งสองนั้นเหมือนกัน แต่ความเข้มข้นไม่เท่ากัน ไม่สามารถแยกแยะได้ด้วยตาเปล่า ความสูงของกาวเข้มข้นคือ 1.5 ซม.

ไม่ แนะนำให้ใช้อิเล็กโทรโฟเรซิสที่ 150 V และต้องใช้เวลา 30-40 นาทีจึงจะทดลองเสร็จ

Q5: แผ่นสำเร็จรูปของคุณ เจลที่เหมาะกับถังอิเล็กโตรโฟเรซิสทุกชนิดในท้องตลาด?

A: ใช่ครับ แผ่นคอนกรีตสำเร็จรูปของเรา เจล เหมาะสำหรับถังอิเล็กโตรโฟเรซิสทุกชนิดในท้องตลาด

Bio-rad Mini-Protean (ระบบ II/3 /Tetra) และ Tanon VE180 (สังเกตการประกอบแบบย้อนกลับของแถบปิดผนึก)

Life Technology Novex Mini-cell (ใช้ร่วมกับแผ่นกั้นพิเศษ)

แผ่นเจลความกว้างอื่นๆ ในถังอิเล็กโทรโฟเรซิสขนาด 10 ซม.

5. รายละเอียดสินค้า

ผลิตภัณฑ์ที่จัดทำโดย Yeasen มีดังต่อไปนี้:

ตารางที่ 2.รายละเอียดสินค้า