—จุดประกายเยื่อบล็อทของคุณที่ปลายนิ้วของคุณ!

ปัจจุบันรีเอเจนต์ ECL ซึ่งเรียกว่าสารตั้งต้นเรืองแสงเคมีสำหรับเอนไซม์ฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดส (HRP) เป็นรีเอเจนต์ที่มีความไวสูงที่สุดที่ใช้ในการตรวจจับแบบเวสเทิร์นบล็อต ปัญหาทั่วไปของรีเอเจนต์ ECL ที่วางจำหน่ายในท้องตลาด ได้แก่ การดับ แบ็คกราวด์สูง ความไม่เสถียร และความยากลำบากในการตรวจจับโปรตีนที่มีปริมาณน้อย ซึ่งอาจส่งผลต่อผลการทดลองขั้นสุดท้าย

Yeasen บริษัทไบโอเทคได้รวบรวมนักวิจัยทางวิทยาศาสตร์ที่โดดเด่นในด้านการตรวจจับภูมิคุ้มกัน โดยการควบคุมคุณภาพของวัตถุดิบลูมินอลอย่างเคร่งครัดและปรับปรุงสูตรของสารเพิ่มประสิทธิภาพและสารคงตัวอย่างต่อเนื่อง เราได้พัฒนารีเอเจนต์ ECL สี่ประเภทเพื่อตอบสนองความต้องการของการทดลองต่างๆ ได้แก่ ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการปรับปรุง ไวต่อแสงเป็นพิเศษ ทนทาน และไวต่อแสงเป็นพิเศษ ผลิตภัณฑ์เหล่านี้ไม่เพียงแต่ตอบสนองความต้องการในการตรวจจับโปรตีนเป้าหมายตั้งแต่ระดับต่ำไปจนถึงระดับสูงเท่านั้น แต่ยังเพิ่มความเข้มของการเรืองแสงโดยไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลอง ส่งผลให้ได้ภาพที่ชัดเจนยิ่งขึ้น

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

  • ความไวแสงที่ยอดเยี่ยม — การตรวจจับแอนติเจนตั้งแต่ระดับพิโกแกรมถึงเฟมโทแกรมต่ำ
  • อัตราส่วนสัญญาณต่อสัญญาณรบกวนที่สูงขึ้น พื้นผิวเรืองแสงที่แม่นยำช่วยลดสัญญาณรบกวนพื้นหลัง
  • แอนติบอดีมีประสิทธิภาพมากขึ้น — ระบบพื้นผิวที่ปรับให้เหมาะสมสำหรับความสัมพันธ์ในการจับกับแอนติบอดีที่สูงขึ้น
  • อัตราส่วนต้นทุนต่อประสิทธิภาพสูง — ประสิทธิภาพที่สูงขึ้นในราคาที่ต่ำกว่า
  • เสถียรภาพดีเยี่ยม สารออกซิไดเซอร์ชนิดใหม่ช่วยให้เก็บรักษาได้อย่างเสถียรที่อุณหภูมิ 4°C นานถึงหนึ่งปี

หลักการผลิตภัณฑ์

หลักการสำคัญของการตรวจจับรีเอเจนต์ ECL คือการเรืองแสงจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ลูมินอล ซึ่งเป็นองค์ประกอบหลักของสารตั้งต้นเรืองแสง จะถูกออกซิไดซ์โดย H2O2 ในสภาวะด่างผ่านการเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์เปอร์ออกซิเดสจากพืชตระกูลฮอร์สแรดิช (HRP) ซึ่งจะสร้างสารตัวกลางสถานะกระตุ้นของกรด 3-อะมิโน-พาทาลิก เมื่อกลับสู่สถานะพื้นฐาน โฟตอนจะถูกปล่อยออกมา โดยมีความยาวคลื่นการปล่อยสูงสุดที่ 425 นาโนเมตร สัญญาณโฟตอนเหล่านี้สามารถจับภาพได้ด้วยฟิล์มเอกซเรย์หรืออุปกรณ์ถ่ายภาพ CCD

คำแนะนำในการเลือก

Yeasen ปัจจุบันมีผลิตภัณฑ์ ECL สี่ประเภท โดยแต่ละประเภทมีคุณลักษณะเฉพาะตัว เพื่อตอบสนองความต้องการของแอปพลิเคชันการทำอิบโนบล็อตของผู้ใช้ได้อย่างครบถ้วน

แล้วคุณควรเลือกผลิตภัณฑ์ใดสำหรับการทดลองของคุณ?

ตารางที่ 1.คู่มือการเลือกรีเอเจนต์ ECL

Yeasen

ECL ที่ได้รับการปรับปรุง

ประเภทที่ได้รับการปรับปรุง

ซุปเปอร์อีซีแอล

ประเภทที่อ่อนไหวมาก

ซุปเปอร์ดูร่า

ชนิดทนทาน

แม็กซี่ซิกแนล

ประเภทความไวสูงพิเศษ

ตัวอย่างที่สามารถนำไปใช้ได้

เป้าหมายที่มีตัวอย่างโปรตีนจำนวนมากเป็นประจำ

เป้าหมายที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ำ ตัวอย่างจำกัด

เป้าหมายที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ำ ตัวอย่างจำกัด

เป้าหมายที่มีความอุดมสมบูรณ์ต่ำมาก ตัวอย่างอันมีค่า

ความไวในการตรวจจับ

ระดับพิโกแกรมกลาง

ระดับพิโกแกรมต่ำ

ระดับเฟมโตแกรมกลาง

ระดับเฟมโตแกรมต่ำ

ระยะเวลาสัญญาณ

< 2 ชม.

< 12 ชม.

< 24 ชม.

< 8 ชม.

ระบบตรวจจับที่สามารถใช้งานได้

สารเคมีทั้งหมดเหมาะสำหรับฟิล์มเอกซเรย์ อุปกรณ์สร้างภาพ CCD

ความเข้มข้นของการเจือจางแอนติบอดีขั้นต้น

1:1000-1:4000

1:1000-1:10,000

1:1000-1:50,000

1:5000-1:100,000

ความเข้มข้นของการเจือจางแอนติบอดีรอง

1:1000-1:4000

1:2000-1:10,000

1:50,000-1:250,000

1:100,000-1:500,000

เมมเบรนที่แนะนำ

เมมเบรน NC

เมมเบรน NC หรือ เมมเบรน PVDF

เมมเบรน NC หรือ เมมเบรน PVDF

เมมเบรน NC หรือ เมมเบรน PVDF

ความเสถียรในการจัดเก็บ

อุณหภูมิห้อง 1 ปี

4°C เป็นเวลา 1 ปี อุณหภูมิห้องเป็นเวลาครึ่งปี

ข้อดี

สัญญาณที่แรงที่สุดในระดับความไวเดียวกัน

อัตราส่วนต้นทุนต่อประสิทธิภาพสูงสุด เหมาะสำหรับการทดลอง WB ส่วนใหญ่

สัญญาณมีระยะเวลายาวนานที่สุด เหมาะมากสำหรับการเปิดรับแสงหลายครั้ง

ความไวที่ยอดเยี่ยม เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการตรวจจับโปรตีนร่องรอย

หมายเหตุ: ความเข้มข้นของการเจือจางแอนติบอดีที่แนะนำนั้นขึ้นอยู่กับความเข้มข้นสต็อกแอนติบอดีที่ 1 มก./มล.

การประยุกต์ใช้ผลิตภัณฑ์

Yeasen สารเคมี ECL มีประสิทธิภาพการใช้ที่ดีกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับผลิตภัณฑ์ของยี่ห้ออื่นในระดับเดียวกัน

รูปที่ 1 การเปรียบเทียบผลการตรวจจับระหว่าง Yeasen ECL Ultra-Sensitive Substrate Super และสารตั้งต้นเทียบเท่าแบรนด์ T อย่าง Pico

รูปที่ 2 การเปรียบเทียบผลการตรวจจับระหว่าง Yeasen พื้นผิวที่มีความไวสูงพิเศษ ECL MaxiSignal และพื้นผิวเทียบเท่าของยี่ห้ออื่น West Femto

รูปที่ 3.การเปรียบเทียบผลการตรวจจับระหว่าง Yeasen ECL Reliable Substrate SuperDura และสารตั้งต้นเทียบเท่าของยี่ห้ออื่น West Dura

วรรณกรรมตีพิมพ์

[1]Wang Z, Lu Z, Lin S และคณะ เซลล์ B ที่แสดงออกถึง Leucine-tRNA-synthase-2 มีส่วนช่วยในการหลีกเลี่ยงภูมิคุ้มกันต่อมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนัก Immunity. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)

[2] Wu Z, Liu D, Pan D และคณะ โครงสร้างและวิศวกรรมของ Acidibacillus sulfuroxidans ขนาดเล็ก Cas12f1[J] Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)

[3] Yao J, Wu D, Zhang C และคณะ Macrophage IRX3 ส่งเสริมโรคอ้วนที่เกิดจากอาหารและการอักเสบของระบบเผาผลาญ Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (ถ้า:25.606)

[4] He X, Li J, Zhou G และคณะ การกำหนดประตูจังหวะฮิปโปแคมปัสและความจำโดยความยืดหยุ่นของซินแนปส์ในอินเตอร์นิวรอนยับยั้ง Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

ข้อได้เปรียบด้านราคา

รูปที่ 7.การเปรียบเทียบราคาของ Yeasen สินค้า ECL กับสินค้ายี่ห้ออื่นในระดับเดียวกัน

คำถามที่พบบ่อย

ปัญหาที่พบ

การวิเคราะห์สาเหตุ

โซลูชั่นที่แนะนำ

ฟิล์มมีภาพกลับด้าน

ฟิล์มมีภาพกลับด้าน

ฟิล์มมีภาพกลับด้าน

ฟิล์มมีแถบสีน้ำตาลหรือสีเหลือง

การดับการเรืองแสง

เวลาใช้งานนานเกินไป เมมเบรนจะแห้งช้า

ป้องกันเมมเบรนไม่ให้แห้ง

การปนเปื้อนของพลาสติกห่อ ดีเวลลอปเปอร์ หรือฟิกเซอร์

พัฒนาพฤติกรรมการทดลองที่ดี

HRP ในระบบปฏิกิริยาไม่เพียงพอ

เพิ่มวัสดุที่มีฉลาก HRP

ไม่มีแบนด์หรือสัญญาณอ่อนบนฟิล์ม

ประสิทธิภาพการถ่ายโอนต่ำ

ปรับปรุงประสิทธิภาพการถ่ายโอน ใช้มาร์กเกอร์ที่ย้อมสีไว้ล่วงหน้าเพื่อการตัดสิน

แอนติเจน/แอนติบอดีไม่เพียงพอหรือไม่ตรงกัน

เพิ่มปริมาณแอนติเจน/แอนติบอดี หรือเลือกแอนติเจน/แอนติบอดีให้เหมาะสม

ปัญหาฟิล์มเอกซเรย์

หากฟิล์มเอกซเรย์เป็นสีดำสนิท (ไม่โปร่งใส) หลังจากการฉายแสง แสดงว่าฟิล์มได้รับการฉายแสงเต็มที่แล้ว ให้ใช้ฟิล์มเอกซเรย์ใหม่

ปัญหาของผู้พัฒนา/ผู้แก้ไข

เปิดรับแสงฟิล์มก่อนเพื่อตรวจสอบ หากมีปัญหา ให้เปลี่ยนด้วยน้ำยาล้างฟิล์ม/น้ำยาซ่อมใหม่

HRP ที่มากเกินไปในระบบปฏิกิริยา

วัสดุที่มีฉลาก HRP เจือจาง

พื้นหลังสูง

ความเข้มข้นของแอนติบอดีปฐมภูมิและทุติยภูมิสูงเกินไป

ลดความเข้มข้นของแอนติบอดี ขยายเวลาการบล็อก

แอนตี้บอดีไม่ได้ทำความสะอาดอย่างทั่วถึง

เพิ่มจำนวนครั้งในการซัก

การบล็อคไม่สมบูรณ์

เพิ่มประสิทธิภาพเงื่อนไขการบล็อค

ใช้สารบล็อคผิดประเภท

ใช้ตัวแทนการบล็อกที่แตกต่างกัน

การเปิดรับแสงมากเกินไป

ลดเวลาการเปิดรับแสง

ความจำเพาะของแอนติบอดีต่ำ

ทดแทนด้วยแอนติบอดีคุณภาพสูง

HRP ที่มากเกินไปในระบบปฏิกิริยา

วัสดุที่มีฉลาก HRP เจือจาง

วงดนตรีที่มีจุดว่าง

ความเข้มข้นของแอนติเจนและแอนติบอดีรองสูง

เจือจางตัวอย่างและรันเจลอีกครั้ง หรือทำให้สารละลายโครโมเจนิกที่ผสมเย็นลงและทาบนเมมเบรนเพื่อการพัฒนาอย่างรวดเร็วทันที

รูปทรงแถบไม่เรียบ

ฟองอากาศระหว่างการถ่ายโอนหรือการเติมความชื้นที่ไม่สม่ำเสมอด้วยเมทานอล (สำหรับเมมเบรน PVDF)

เพิ่มประสิทธิภาพเงื่อนไขการถ่ายโอน

จุดภาพยนต์

มวลรวมของวัสดุที่มีฉลาก HRP

กรองวัสดุที่มีฉลาก HRP ด้วยเมมเบรน 0.2μm

แบนด์ไม่เฉพาะเจาะจง

HRP ที่มากเกินไปในระบบปฏิกิริยา

วัสดุที่มีฉลาก HRP เจือจาง

SDS ทำให้จับโปรตีนแบบไม่จำเพาะ

ห้ามใช้ SDS ในขั้นตอนการทดลอง

ความจำเพาะของแอนติบอดีต่ำ

ทดแทนด้วยแอนติบอดีคุณภาพสูง

การบล็อคไม่เพียงพอ

เพิ่มเวลาการบล็อคหรือใช้ตัวแทนการบล็อคอื่น

ข้อมูลการสั่งซื้อ

ชื่อสินค้า

หมายเลขสินค้า

ข้อมูลจำเพาะ

น้ำยาตรวจจับ Super ECL

36208ES60/76

100มล./50มล.

ชุดสารตั้งต้นเรืองแสงเคมี ECL ที่ได้รับการปรับปรุง

36222ES60/76

100มล./500มล.

สารตั้งต้นระยะเวลาขยาย SuperSignal SuperDura

36223ES10/60/70/76

10มล./100มล./200มล./500มล.

SuperSignal MaxiSignal สารตั้งต้นที่มีความไวสูงสุด

36224ES10/60/70/76

10มล./100มล./200มล./500มล.

การสอบถาม