เพื่อให้ผู้ป่วยโรคเบาหวานมีทางเลือกในการรักษามากขึ้น ยาเบาหวานชนิดใหม่บางชนิดจึงถือกำเนิดขึ้นในช่วงต้นศตวรรษที่ 21 เช่น แอนะล็อกของเปปไทด์คล้ายกลูคากอน-1 (GLP-1) เซมากลูไทด์ ซึ่งเป็นหนึ่งในยาตัวแทนของแอนะล็อกของ GLP-1 ได้รับการพิสูจน์แล้วจากการศึกษาทางคลินิกหลายครั้งว่าสามารถควบคุมน้ำตาลในเลือดได้อย่างมีประสิทธิภาพเมื่อใช้ร่วมกับยาลดน้ำตาลในเลือดชนิดรับประทานชนิดต่างๆ และสามารถช่วยให้ผู้ป่วยลดน้ำหนัก ลดความดันซิสโตลิก และปรับปรุงการทำงานของเซลล์เบต้าของตับอ่อนได้ สูตรยาทั้งสามสูตร (ยาฉีดลดน้ำตาลในเลือด Ozempic ยาลดน้ำตาลในเลือดชนิดรับประทาน Rybelsus และยาฉีดลดน้ำหนัก Wegovy) มียอดขายเกิน 2 หมื่นล้านดอลลาร์ในปี 2023 เนื่องจากมีประสิทธิภาพที่โดดเด่น การลดน้ำตาลในเลือดและการลดน้ำหนัก, ภาคอุตสาหกรรมคาดหวังว่า Semaglutide จะรักษาโมเมนตัมการขายที่แข็งแกร่งได้สักระยะหนึ่ง ซึ่งจะดึงดูดบริษัทต่างๆ มากมายให้เข้ามาแข่งขันกันด้านการออกแบบ!
โครงสร้างสายหลักของเซมากลูไทด์เป็นโพลีเปปไทด์ตัวกลาง 29 กรดอะมิโน Arg34GLP-1(9-37) หรือโพลีเปปไทด์ตัวกลาง 27 กรดอะมิโน Arg34GLP-1(11-37) การผลิตและการผลิตโพลีเปปไทด์ตัวกลางนี้ส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์ทางเคมีและวิธีการเตรียมทางชีวภาพ เมื่อเปรียบเทียบกับการสังเคราะห์ทางเคมี การเตรียมทางชีวภาพได้ทะลุขีดจำกัดของกำลังการผลิตและเหมาะสำหรับการผลิตต่อเนื่องในปริมาณมาก ซึ่งสามารถลดต้นทุนการผลิตได้อีกทั้งยังนำมาซึ่งผลประโยชน์ทางเศรษฐกิจที่สำคัญยิ่งขึ้น
ตารางที่ 1 ตัวอย่างวิธีการเตรียมชีวภาพสำหรับเปปไทด์ตัวกลางเซมากลูไทด์
| วิธีการเตรียมทางชีวภาพ (ตัวอย่างที่ 1)
| วิธีการเตรียมทางชีวภาพ (ตัวอย่างที่ 2)
| |
| การสังเคราะห์ยีน | สังเคราะห์ลำดับโปรตีนฟิวชั่น ซึ่งรวมถึงเปปไทด์ฟิวชั่น ไซต์การแยกเอนเทอโรคิเนส และลำดับโมเลกุลหลักเป้าหมาย | สังเคราะห์ลำดับการแสดงออกควบคู่กับลำดับยีน GLP-1(9-37) |
| วิศวกรรมการก่อสร้างแบคทีเรีย | นำเข้าสู่ E. coli เพื่อสร้างแบคทีเรียที่ดัดแปลงพันธุกรรม | นำเข้าสู่ E. coli เพื่อสร้างแบคทีเรียที่ดัดแปลงพันธุกรรม |
| การแสดงออกของโปรตีนฟิวชั่น | โดยการปรับลำดับเปปไทด์ฟิวชั่นให้เหมาะสม การเปลี่ยนจุดไอโซอิเล็กทริกและความชอบน้ำของโปรตีน ฯลฯ จะทำให้การแสดงออกของโปรตีนฟิวชั่นเพิ่มขึ้นอย่างมีประสิทธิภาพ
| หลังการเหนี่ยวนำการหมักความหนาแน่นสูง จะได้โปรตีนอินคลูชันบอดีที่มีการแสดงออกคู่กันซึ่งแสดง GLP-1(9-37) และการพับซ้ำจะให้โปรตีนที่ละลายน้ำได้ |
| การได้มาซึ่งเปปไทด์ระดับกลาง | หลังจากที่โปรตีนฟิวชั่นผ่านกระบวนการแยกเอนเทอโรคิเนส การทำให้บริสุทธิ์ และขั้นตอนอื่นๆ แล้ว ก็จะสามารถรับเปปไทด์ตัวกลางเซมากลูไทด์ Arg34GLP-1(9-37) ได้ | สามารถรับโปรตีนที่ละลายน้ำได้หลังจากผ่านกระบวนการแยกเอนไซม์สองขั้นตอนด้วยเอนไซม์ Kex2 และคาร์บอกซีเปปไทเดส B และขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ เพื่อให้ได้โพลีเปปไทด์ตัวกลางเซมากลูไทด์ GLP-1(9-37) |
เอนไซม์ Enterokinase หรือ Kex2 ที่รวมกับคาร์บอกซีเปปติเดส B เป็นเอนไซม์สำคัญสำหรับสายเปปไทด์หลักของเซมากลูไทด์ (วิธีเตรียมทางชีวภาพ) และผลการตัดเอนไซม์และต้นทุนมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการผลิตYisheng Biology มุ่งมั่นที่จะจัดหาเอนไซม์วัตถุดิบที่มีเสถียรภาพสำหรับบริษัทเภสัชกรรม โดยนำเสนอเอนไซม์คุณภาพสูงและมาตรฐานการควบคุมคุณภาพที่สมบูรณ์เพื่อช่วยให้ลูกค้าปรับปรุงกำลังการผลิตและความเสถียรของชุดผลิตภัณฑ์ ลดต้นทุน และเข้าสู่ตลาดอย่างรวดเร็ว ตลาด.
1.รีคอมบิแนนท์ เอนเทอโรคิเนส
รีคอมบิแนนท์เอนเทอโรคิเนส (rEK) เป็นซับยูนิตโซ่เบาของเอนเทอโรไคเนสในลำไส้วัวที่มีความบริสุทธิ์สูง ซึ่งมีกิจกรรมเอนไซม์ตัดเฉพาะแบบเดียวกับเอนเทอโรไคเนสที่สกัดตามธรรมชาติ โดยมีไซต์ตัดของ Asp-Asp-Asp-Asp-Lys ที่สามารถกำจัดโปรตีนฟิวชันที่อยู่ที่ปลาย N ของโปรตีนเพื่อกำจัดแท็กฟิวชันที่ไม่จำเป็น และเป็นโปรตีเอสที่มักเลือกใช้สำหรับฟิวชันปลาย N มีระดับการตัดที่ไม่สม่ำเสมอต่ำบนสารตกค้างอื่นๆ
ปัจจุบัน Yisheng มีผลิตภัณฑ์ recombinant enterokinase จากแหล่งต่างๆ เกรดต่างๆ และมีแท็ก His หรือไม่ให้ลูกค้าเลือก
คุณสมบัติ
ความจำเพาะสูง: โปรตีเอสจำเพาะที่ตัดปลายคาร์บอกซิลของไลซีนซึ่งประกอบด้วยกรดแอสปาร์ติกสี่ชนิด: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys
ความบริสุทธิ์สูง: ไม่มีโปรตีเอสอื่น ไม่มีการตัดแบบไม่จำเพาะ
ไม่มีแหล่งกำเนิดจากสัตว์: การผลิตแบบรีคอมบิแนนท์ ไม่มีการปนเปื้อนของไวรัสจากภายนอก ไม่มีการใช้วัตถุดิบใดๆ ที่ได้มาจากสัตว์ในกระบวนการผลิต
คุณภาพมีเสถียรภาพ: การผลิตแบบแบตช์สามารถรับประกันการผลิตแบบแบตช์ที่เสถียรและต่อเนื่อง ไม่มีข้อแตกต่างระหว่างแบตช์ต่อแบตช์ คุณภาพเสถียร
ความจุเพียงพอ: ถังหมักขนาด 500 ลิตรสามารถผลิตเอนเทอโรไคเนสได้ประมาณ 50 MU
การจัดหาผลิตภัณฑ์เกรดที่แตกต่างกัน: ผลิตภัณฑ์เกรด R&D (20395ES), เกรด GMP (20396ES), เกรด GMP เป็นไปตามระบบการจัดการคุณภาพ ISO 13485
ข้อมูลการทดสอบ
การทดสอบกิจกรรมเอนเทอโรคิเนส:
รูปที่ 1. ผลของเอนไซม์ในการตัด
หมายเหตุ: สารตั้งต้นเชิงบวก (20391ES) เป็นโปรตีนฟิวชันที่ประกอบด้วยลำดับโปรตีนเฉพาะ 2 ลำดับที่เชื่อมต่อกันด้วย DDDDK (การจดจำเอนเทอโรคิเนสและตำแหน่งการตัด) โดยมีน้ำหนักโมเลกุลรวมประมาณ 64.6 kDa ซึ่งสามารถตัดเป็นชิ้นโปรตีนอิสระ 2 ชิ้นโดยเฉพาะด้วยเอนเทอโรคิเนส โดยมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 27.9 kDa และ 36.6 kDa ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์นี้ในฐานะสารตั้งต้นเอนเทอโรคิเนสสามารถใช้สำหรับการตรวจจับกิจกรรมเอนไซม์แบบกึ่งเชิงปริมาณหรือเชิงคุณภาพของเอนเทอโรคิเนสแบบรีคอมบิแนนท์หรือแบบธรรมชาติ
การทดสอบความบริสุทธิ์ของเอนเทอโรคิเนส:
หมายเหตุ: ค่าทางทฤษฎีของเอนเทอโรคิเนสคือ 22.7 kDa เนื่องจากผลของไกลโคซิเลชันหลังจากการแสดงออกใน Pichia pastoris SDS-PAGE จึงแสดงให้เห็นว่าน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนเป้าหมายอยู่ที่ประมาณ 40 kDa โดยทั่วไปแถบที่ไกลโคซิเลชันจะมีแถบกระจายเล็กน้อยวิ่งขึ้นด้านบน (ดังที่แสดงในรูปด้านขวา) บริษัทของเราสามารถจัดหาเอ็นไซม์ดีไกลโคซิเลชัน Endo H (Cat#20414) ให้ลูกค้าดีไกลโคซิเลชันและวิ่งเจลเพื่อวัดความบริสุทธิ์ได้ (ดังที่แสดงในรูปด้านซ้าย)
การทดสอบความจำเพาะในการตัดเอนเทอโรคิเนส:
รูปที่ 3.
หมายเหตุ: ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน
การทดสอบความเสถียรของการแช่แข็งและละลายซ้ำของ Enterokinase เร่ง:
รูปที่ 4.
บันทึก:
เมื่อเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 25°C เป็นเวลา 7, 16, 32 วัน และ 37°C เป็นเวลา 7, 14 วัน กิจกรรมของเอนไซม์ไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญจากกิจกรรมเอนไซม์เริ่มต้น
2.เอนไซม์รีคอมบิแนนท์ Kex2, คาร์บอกซีเปปติเดส B
ตารางที่ 2.
| หมายเลขสินค้า | 20418ES | 20417ES |
| ผลิตภัณฑ์ ชื่อ | โปรตีเอส Kex2 แบบรีคอมบิแนนท์ที่แสดงออกในยีสต์
| CPB แบบรีคอมบิแนนท์ แสดงออกใน E.coli
|
| เกรดสินค้า | เกรด GMP | เกรด GMP |
| แหล่งที่มา | การแสดงออกแบบรีคอมบิแนนท์จาก Pichia pastoris | การแสดงออกแบบรีคอมบิแนนท์จาก E. อีโคไล |
| กิจกรรม | ≥10.0 หน่วย/มก. โปร
| ≥170 หน่วย USP/มก.โปร
|
| สถานที่แยกร่าง | จดจำและแยกพันธะเปปไทด์ที่ปลายกรดคาร์บอกซิลิกของกรดอะมิโนไดเบสิก เช่น Arg-Arg, Lys-Arg โดยเฉพาะ | ไฮโดรไลซ์โปรตีนโดยเฉพาะที่ด้านปลายอะมิโนของกรดอะมิโนเบส (ไลซีน อาร์จินีน ฮีสทิดีน) ที่ปลาย C |
| การประยุกต์ใช้ผลิตภัณฑ์ | 1. กระบวนการแยกเอนไซม์ในการผลิตยาเปปไทด์ 2. การย่อยโปรตีนด้วยเอนไซม์ และการทำแผนที่เปปไทด์ การเรียงลำดับ ฯลฯ | 1. การผลิตอินซูลินรีคอมบิแนนท์และอนาล็อกของอินซูลิน 2.การกำหนดกรดอะมิโนที่ปลาย C ของโปรตีน 3. การกำจัดแท็กฮีสทิดีนที่ปลาย C ของโปรตีน 4. การผลิตสารเปปไทด์รีคอมบิแนนท์อื่น ๆ 5. การสังเคราะห์เอนไซม์ของสารประกอบพิเศษบางชนิด |
เอนไซม์ Kex2 รวมกับคาร์บอกซิเปปติเดส B: ความต้องการกระบวนการแสดงออกแบบคู่ขนาน ผลผลิตสูงของสารตัวกลางเซมากลูไทด์หลังการตัดเอนไซม์
ย.อีเซน ฐานการผลิตเอนไซม์เกรด GMP
ฐานการผลิตเอนไซม์โมเลกุลสะอาดพิเศษที่ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO - UCF.MEซึ่งติดตั้งอุปกรณ์การฟอกและวิเคราะห์ทางเคมีฟิสิกส์ระดับอุตสาหกรรมของ AKTA หน่วยการหมักความหนาแน่นสูงขนาด 100 ลิตร ห้องปฏิบัติการสะอาดมาตรฐานขนาด 10,000 เกรด และสายการผลิตอัตโนมัติ บริษัทมีระบบการหมักและฟอกที่มีข้อกำหนดต่างๆ รวมถึง 5L, 10L, 30L, 100L, 500L และ 1,500L พร้อมความสามารถในการขยายขนาดการผลิตจาก 5L เป็น 1,500L ในด้านการผลิตเอนไซม์ระดับโมเลกุลในอุตสาหกรรม ตอบสนองความต้องการวัตถุดิบเอนไซม์หลักของลูกค้าปลายน้ำในขั้นตอนต่างๆ เช่น การวิจัยและพัฒนา ระดับนำร่อง และการผลิตขนาดใหญ่
ข้อมูลสินค้าส่งเสริมการขาย
| ชื่อสินค้า | หมายเลขสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ | ราคาขายปลีก($） | การส่งเสริมการขาย ราคา($） |
| เอนไซม์ Enterokinase ของวัว Recombinant His ที่แสดงออกในยีสต์ | 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 ยู/500 ยู/ 5000 คุณ- 100 ก.ว./ 1 MU(1000KU) | 45/115/ 825/ 12000/ 360000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
ข้อมูลสินค้าที่เกี่ยวข้อง
| ชื่อสินค้า | หมายเลขสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ |
| 20391ES03/11 | 1 มก./ 4 มิลลิกรัม | |
| โปรตีเอส Kex2 แบบรีคอมบิแนนท์ที่แสดงออกในยีสต์ | 20418ES60 | 100 ไมโครกรัม |
| 20417ES03/10 | 1 มก./10 มก. | |
| 20414ES92/97 | 10,000 ยู/50,000 ยู |