1. บทนำพื้นหลัง
สเตรปตาวิดินเป็นโปรตีนที่จับไบโอตินซึ่งได้มาจากสเตรปโตไมซีส อะวิดิน การจับแบบไม่จำเพาะของโปรตีนชนิดนี้ต่ำกว่าอะวิดินมาก และเมื่อเปรียบเทียบกับอะวิดินจากไข่ขาวซึ่งมีประจุบวกสุทธิที่ค่า pH เป็นกลางและมีคาร์โบไฮเดรตประมาณ 7% แล้ว สเตรปตาวิดินจะมีคุณสมบัติทางเคมีที่ดีกว่า เช่น แทบไม่มีประจุสุทธิที่ค่า pH เป็นกลาง และไม่มีคาร์โบไฮเดรต ดังนั้นจึงนิยมใช้แทนอะวิดิน
2.คุณสมบัติของผลิตภัณฑ์
โครงสร้างเททราเมอร์:สเตรปตาติดินมีอยู่เป็นโฮโมเตตระเมอร์ที่มีขนาด 66KDa
ความสัมพันธ์สูง:โมเลกุลสเตรปตาติดินแต่ละโมเลกุลสามารถจับกับไบโอติน 4 โมเลกุลได้อย่างเฉพาะเจาะจง โดยมีความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งระหว่างโมเลกุลทั้งสองเป็นอย่างมาก
การใช้งานที่กว้างขวาง: ค่าคงที่การแยกตัวของสารเชิงซ้อนสเตรปตาติดิน-ไบโอตินอยู่ในช่วงนาโนโมลาร์ ซึ่งเป็นคุณสมบัติที่ใช้กันทั่วไปในแอปพลิเคชันทางชีววิทยาโมเลกุล ในการใช้งานส่วนใหญ่ สามารถใช้แทนโปรตีนแอนติบอดีได้
การสกัดคุณภาพสูง: ได้จากการชำระล้างจาก สเตรปโตไมซีส อะวิดินี-
รูปที่ 1. สเตรปตาติดิน
ผลิตภัณฑ์ แอปพลิเคชัน
การประยุกต์ใช้ 1: เรซินบริสุทธิ์ด้วยสเตรปตาติดิน
1)หลักการประยุกต์ใช้สเตรปตาติดินมีปฏิสัมพันธ์กับอะกาโรส 6% อย่างมากโดยอาศัยปฏิกิริยาระหว่างสเตรปตาติดินและไบโอติน และกระบวนการเตรียมที่มีเอกลักษณ์เฉพาะทำให้สเตรปตาติดินมีคุณสมบัติทางเคมีกายภาพที่สูงขึ้น ทำให้สามารถทนต่อแรงกดดันที่สูงขึ้นได้ สเตรปตาติดินสามารถทำความสะอาดโปรตีนเป้าหมายได้ด้วยอัตราการไหลที่ค่อนข้างสูง จึงเหมาะสำหรับการทำความสะอาดโปรตีนในอุตสาหกรรมขนาดใหญ่
รูปที่ 2 หลักการทำให้บริสุทธิ์ของเรซินสเตรปตาติดิน
2）
รูปที่ 3 โปรตีนที่บริสุทธิ์ด้วยเรซินสเตรปตาติดิน
3）คำถามที่พบบ่อย| คำถาม | สาเหตุที่เป็นไปได้ | วิธีแก้ไขปัญหาที่แนะนำ |
| แรงดันย้อนกลับของคอลัมน์สูงเกินไป | การบรรจุถูกบล็อค | ทำความสะอาดเรซิน |
| บัฟเฟอร์ไลซิสประกอบด้วยอนุภาคแข็งขนาดเล็ก แนะนำให้กรองด้วยเมมเบรนกรองขนาด 0.22μm หรือ 0.45μm ก่อนโหลด หรือใช้เครื่องเหวี่ยงเพื่อแยกออก | ||
| ตัวอย่างมีความหนืดเกินไป | ตัวอย่างมีกรดนิวคลีอิกในความเข้มข้นสูง ให้ยืดเวลาการสลายออกจนกว่าความหนืดจะลดลง หรือเติม DNase I (ความเข้มข้นสุดท้าย 5 μg/ml) แมกนีเซียม2+ (ความเข้มข้นสุดท้าย 1 มิลลิโมลาร์) ฟักบนน้ำแข็งเป็นเวลา 10-15 นาที | |
| บัฟเฟอร์มีความหนืดเกินไป | รีเอเจนต์อินทรีย์หรือรีเอเจนต์รักษาเสถียรภาพโปรตีน (เช่น กลีเซอรอล เป็นต้น) อาจทำให้แรงดันย้อนกลับเพิ่มขึ้น ลดอัตราการไหลในการทำงาน | |
| โปรตีนที่ไม่มีจุดประสงค์ในส่วนประกอบการชะออก | การแยกส่วนที่มากเกินไปทำให้โปรตีนที่สนใจเปลี่ยนสภาพ | ใช้สภาวะการสลายแบบอ่อน สภาวะการทดลองจะขึ้นอยู่กับประสบการณ์ |
| โปรตีนเป้าหมายรวมตัวกันเพื่อสร้างการตกตะกอน | เติม DTT ลงในสารละลายไลซิสเซลล์ก่อนโดยมีความเข้มข้นสุดท้าย 1-10 มิลลิโมลาร์ | |
| โปรตีนเป้าหมายไม่ถูกชะออกจนหมด | ปริมาตรการชะล้างน้อยเกินไป | เพิ่มปริมาตรของสารชะล้างและลดอัตราการไหลของสารชะล้าง |
| ค่า pH ของบัฟเฟอร์การชะเปลี่ยนแปลง | ใช้สารละลายที่เตรียมสดใหม่ | |
| เวลาในการฟักตัวของสารละลายไม่เพียงพอ | เพิ่มเวลาการฟักตัวของบัฟเฟอร์การชะด้วยเจล |
การประยุกต์ใช้ 2: กลุ่มเรืองแสงและเอนไซม์คอนจูเกตที่มีฉลากสเตรปตาติดิน
รูปที่ 4 สเตรปตาวิดินคอนจูเกตที่แตกต่างกัน
1）เอนไซม์คอนจูเกตสเตรปตาวิดิน- เอนไซม์ฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดส (HRP) สเตรปตาวิดินคอนจูเกต
Ⅰ. ผลิตโดยสเตรปตาติดินและเอนไซม์เปอร์ออกซิเดสจากพืชตระกูลฮอร์สแรดิชที่มีความบริสุทธิ์สูงผ่านเทคนิคคอนจูเกชันพิเศษ
Ⅱ. รักษาการทำงานของเอนไซม์เปอร์ออกซิเดสให้มีประสิทธิภาพสูงสุด การใช้งาน: อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC), อิมมูโนไซโตเคมี (ICC), อินซิทูไฮบริดิเซชัน (ISH) เป็นต้น
ความเข้มข้นที่แนะนำ: 0.01-0.1 µg/mL สำหรับ WB (วิธีเคมีเรืองแสง); 1-2µg/mL สำหรับ ELISA, HC/ICC, WB (การพัฒนาสีของสารตั้งต้น)
- สเตรปตาติดินคอนจูเกตอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (AP)
Ⅰ เหมาะสำหรับการวิเคราะห์เฟสแข็ง ระบบการย้อมเนื้อเยื่อ/เซลล์ และการใช้งานบล็อต โดยมีการเชื่อมโยงโควาเลนต์เฉพาะ
Ⅱ คอนจูเกตมีความคงตัวและมีการทำงานสูง
การใช้งาน: อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC), อิมมูโนไซโตเคมี (ICC), เอ็นไซม์ลิงค์อิมมูโนสปอตแอสเซย์ (ELISPOT), เอ็นไซม์ลิงค์อิมมูโนซอร์เบนต์แอสเซย์ (ELISA), อินซิทูไฮบริดิเซชัน (ISH) และการใช้งานบล็อต
ความเข้มข้นที่แนะนำ: 1-2 µg/mL สำหรับ ELISA, IHC/ICC; 0.1-1 µg/mL สำหรับ WB
2）สเตรปตาวิดินคอนจูเกตฟลูออโรโฟร์- ฟลูออร์® ฟลูออเรสซีนคอนจูเกตสเตรปตาวิดิน
Ⅰ.แนะนำสำหรับการตรวจภูมิคุ้มกันฟลูออเรสเซนซ์แบบประจำ
Ⅱ. มีความบริสุทธิ์สูง โดยมีคุณสมบัติการจับยึดแบบไม่จำเพาะที่ต่ำมาก
Ⅲ.มีความสัมพันธ์สูงกับไบโอติน
การใช้งาน: อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ (IF), ไฮบริดิเซชันแบบ In situ (ISH), การไหลของไซโตเมทรี (Flow Cyt)
ความเข้มข้นที่แนะนำ: 0.5-2 µg/mL (IF)
- สเตรปตาวิดินคอนจูเกตสีย้อม DyLight™
Ⅰ สามารถใช้ในการตรวจจับแอนติบอดีตัวที่สองที่ถูกไบโอตินิเลตและโมเลกุลขนาดใหญ่ชนิดอื่นๆ ในอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ ไฮบริดิเซชันในสถาน หรือการไหลของไซโตเมทรี
Ⅱ. มีความบริสุทธิ์สูง โดยมีคุณสมบัติการจับยึดแบบไม่จำเพาะที่ต่ำมาก
Ⅲ.มีความสัมพันธ์สูงเป็นพิเศษกับไบโอติน
Ⅳ. ความคงตัวของแสงสูง ไม่ไวต่อค่า pH และมีการเรืองแสงที่สว่างกว่า
การใช้งาน: อิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ (IF), ไฮบริดิเซชันแบบ In situ (ISH), การไหลของไซโตเมทรี (Flow Cyt)
ความเข้มข้นที่แนะนำ: 0.5-2 µg/mL (ถ้า)
ข้อมูลสินค้า
| ซีรี่ส์ผลิตภัณฑ์ | หมายเลขสินค้า | ชื่อสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ |
| สเตรปตาติดิน | 35099ES | สเตรปตาติดิน (ผง) | 100 มก./1 ก. |
| 35101ES | สเตรปตาติดิน (5มก./มล.) | 1 มก./5 มก./10 มก./ 100 มก./1 ก. | |
| เอนไซม์คอนจูเกตสเตรปตาวิดิน | 35105ES | เอชอาร์พี สเตรปตาวิดิน | 100 ไมโครลิตร |
| 35106ES | เอพี สเตรปตาวิดิน | 100 ไมโครลิตร | |
| สเตรปตาติดินที่มีฉลากเรืองแสง | 35102ES | ไดไลท์ 405™ สเตรปตาติดิน | 100 ไมโครลิตร |
| 35103ES | วายเอสฟลูออร์ทีเอ็ม สเตรปตาติดิน 488 คอนจูเกต | 100 ไมโครลิตร | |
| 35104ES | วายเอสฟลูออร์ทีเอ็ม สเตรปตาติดิน 647 คอนจูเกต | 100 ไมโครลิตร | |
| 35107ES | วายเอสฟลูออร์ทีเอ็ม สเตรปตาวิดิน 584 คอนจูเกต | 100 ไมโครลิตร | |
| 35108ES | สเตรปตาติดินที่จับคู่กับ Cy3 | 1 มก. | |
| ซีรีย์การทำให้บริสุทธิ์สเตรปตาติดิน | 20512ES | สเตรปตาติดินอะกาโรสเรซิน 6FF | 5มล./5มล.×5/100มล. |
| 20513ES | คอลัมน์โครมาโตกราฟี Streptavidin 6FF ของ BiotSep ขนาด 1 มล. | 1 มล./1 มล.×5 | |
| 20514ES | คอลัมน์โครมาโตกราฟี Streptavidin 6FF ของ BiotSep ขนาด 5 มล. | 5มล./5มล.×5 |