Romatoid Artrit (RA), kalıcı sinovit, sistemik inflamasyon ve kemik ve kıkırdak erozyonu ile karakterize kronik bir inflamatuar eklem hastalığıdır ve bu da nihayetinde eklem ankilozuna ve deformiteye yol açabilir. RA hayvan modelleri, patogenez ve tedavi yöntemlerinin incelenmesi için yaygın olarak kullanılır. RA etiyolojisi, patogenez, etkileyen faktörler ve yeni tedavi hedeflerinin araştırılması ve yeni tedavilerin değerlendirilmesi için çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur.

RA hayvan modelleri genel olarak iki kategoriye ayrılabilir: indüklenmiş ve transgenik modeller. Yaygın indüklenmiş modeller arasında Kolajen-İndüklenmiş Artrit (CIA) ve Adjuvan-İndüklenmiş Artrit (AA) bulunurken, transgenik fare modelleri arasında insan TNF-α transgenik modelleri vb. bulunur.

Freund Adjuvanı, Jules Freund tarafından 1940'larda icat edilmiş, bir antijen sulu çözeltisinin bir yağ ajanı ile karıştırılması ve bir emülgatör eklenmesiyle yapılan bir su içinde yağ antijen emülsiyonudur. Hayvan deneylerinde en sık kullanılan adjuvandır.

Freund Adjuvanı, Mycobacterium tuberculosis içeren Tam Freund Adjuvanı (CFA) ve Mycobacterium tuberculosis içermeyen Eksik Freund Adjuvanı (IFA) olarak ikiye ayrılır. Bunlar esas olarak farelerde Kolajenle İndüklenen Artrit (CIA) ve Adjuvanla İndüklenen Artrit (AA) modellerini indüklemek için kullanılır.

Şekil 1. İnsan romatoid artriti

Şekil 2. Fare romatoid artriti

1 Kolajen kaynaklı artrit (CIA) (sadece referans amaçlı)

1.1 Fare Modeli

CIA modeli en yaygın kullanılan RA fare modellerinden biridir. Hayvanların heterolog tip II kollajen ile bağışıklanması, eklem kıkırdağında tip II kollajene karşı bir otoimmün yanıtı indükleyebilir ve poliartiküler periferik artritin klinik belirtileri ortaya çıkabilir.

Model İnşa Yöntemi: Sığır tip II kollajeni (CII), 4°C'de bir gece boyunca buzlu asetik asitte çözülür. Daha sonra, ısıyla öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis (BCG), Tam Freund Adjuvanı (CFA) hazırlamak için sıvı parafine yerleştirilir. İkisi karıştırılır ve tip II kollajen emülsiyonu hazırlamak için emülsifiye edilir. Bu emülsiyon, iltihabı indüklemek için farenin kuyruğunun tabanına 0,1-0,2 mL deri altına enjekte edilir. İlk aşılamadan sonraki 21. günde, tip II kollajen emülsiyonunun 0,1-0,2 mL'lik bir güçlendirici enjeksiyonu intraperitoneal olarak uygulanır. İlk aşılamadan sonra, farelerde yaklaşık bir hafta içinde iyileşen lokal inflamatuar reaksiyonlar olacaktır; adjuvandan sonra, farelerde 24. günden itibaren arka ayaklardan ön ayaklara ve sonra kuyruğa doğru ilerleyen eklem şişliği gelişecektir.

1.2 Sıçan Modeli

Model İnşa Yöntemi: Sığır tip II kollajeni (CII), eşit hacimlerde Eksik Freund Adjuvanı (IFA) ile karıştırılır ve emülsifiye edilir. İlk gün, sıçanlara birden fazla bölgeden intradermal olarak enjekte edilir ve bir hafta sonra, intraperitoneal bir destek alırlar. Model, ikinci aşılamadan 3-7 gün sonra elde edilir. Duyarlılaştırmadan yedi gün sonra, ayak bileği eklemleri hafifçe şişmiş ve kırmızı olacaktır ve semptomlar 3 hafta sonra kötüleşecektir, cilt ülserasyonu olasıdır; 5-6 hafta sonra, patolojik değişiklikler daha da kötüleşecek, eklem kıkırdağı ve subkondral kemik pannus tarafından aşındırılacak ve yok edilecektir.

2 Adjuvan İndüklenen Artrit (AA) (sadece referans amaçlı)

En yaygın kullanılan sıçan RA modeli AA modeli olup iki tipi vardır: Eksik Freund Adjuvanı (IFA) ve Tam Freund Adjuvanı (CFA).

Model İnşa Yöntemi: Sıçanlara inflamasyon oluşturmak amacıyla intradermal enjeksiyon yapılır.Model genellikle indüksiyondan 10-20 gün sonra sürekli inflamatuar semptomlar gösterir ve yaklaşık 20 günde zirveye ulaşır. Enflamasyon esas olarak ayak bileği eklemindedir ve ayak tabanını ve tüm ayağı etkileyebilir. Eklem şişmesi semptomları klinik RA hastalarının semptomlarına benzerdir ancak bağışıklık disfonksiyonu fenomeni ortaya çıkabilir.

3 Kolajen Kaynaklı Artrit (CIA) Modelleme Adımları (sadece referans amaçlı)

• Sığır tip II kollajeni (CII), 2 mg/mL konsantrasyonda buzlu asetik asit solüsyonunda çözülür ve 4°C'de bir gece bekletilir.
• Eksik Freund Adjuvanı, 2-5 mg/mL konsantrasyona kadar ısıyla öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis ile desteklenir. Yisheng Biology tarafından sağlanan 60718ES Eksiksiz Freund Adjuvanındaki Mycobacterium tuberculosis konsantrasyonu 10 mg/mL'den azdır.
• Sığır tip II kollajen asetik asit çözeltisi, eşit hacimlerde Tam Freund Adjuvanı ile karıştırılarak emülsifiye edilir.
• Her deney faresine sırt bölgesine toplam 0,1-0,2 mL olacak şekilde 4-6 adet deri altı enjeksiyon uygulandı.
• Üç hafta sonra, Eksik Freund Adjuvanı eşit hacimlerde sığır tip II kollajen asetik asit solüsyonu ile karıştırılıp emülsifiye edilir ve her fareye kuyruk tabanına toplam 0,1-0,2 mL olacak şekilde 3-5 deri altı enjeksiyon yapılır.

4 Adjuvan İndüklenen Artrit (AA) Modelleme Adımları (sadece referans amaçlı)

• Deney ve kontrol gruplarının ayarlanmasına dikkat ederek ilgili reaktifleri hazırlayın.
• Gözlem ve kayıt: Genellikle farelerin %80'inden fazlasında ikinci aşılamadan 7-12 gün sonra artrit semptomları görülür. Klinik semptomlar farenin eklemindeki kızarıklık ve aktiviteye göre derecelendirilir ve gözlemler deneyden önce ve deneyden sonraki 3., 5., 7. ve 12. günlerde kaydedilir ve derecelendirme kriterleri aşağıdaki gibidir:

Tablo 1 Puanlama Kriterleri

Sçekirdek	Sbelirti
0	Aktivite normaldi, eritem ve şişlik belirtisi yoktu.
1	Aktivite normaldi, sadece ciltte kızarıklık vardı, belirgin bir şişlik yoktu.
2	Aktivite hafif etkilenir, pençelerde, ayak tabanlarında veya diz ekleminde kızarıklık olur.
3	Aktivite etkilendi, pati parmakları ve eklemlerde hafif deformasyon ve şişlik oluştu.
4	Hareket kabiliyeti kısıtlanmıştır, ayak parmakları ve eklemler ciddi şekilde kızarır ve şişer, sertleşir veya deforme olur.

• Fare ölçümü: Deneyden önce ve sonra farenin arka bacağının eklem hacmini ölçmek için bir fare pençesi hacim ölçer kullanın. Her farenin arka bacağının diz ekleminin yaklaşık 5 mm altındaki hacmi üç kez ölçün, ortalama değeri kaydedin ve hacim eklem kızarıklığı ve şişlik derecesine orantılıdır. Tespit her üç günde bir gerçekleştirilir.
• Patolojik inceleme: Deney ve kontrol gruplarından fareleri alın, deriyi çıkarın, %4 formaldehit ile 48 saatten fazla fiksasyon yapın, %5 nitrik asit ile 2 saat dekalsifiye edin, ksilene daldırın ve parafine gömün. 6 mm'lik kesitler yapın, HE ile boyayın ve patolojik tanı için bir puanlama standardı oluşturmak üzere geleneksel bir optik mikroskopla gözlemleyin.

5 Deneysel vaka görselleri (Literatürden alıntı)