1、Çekirdek enzim materyali-Taq DNA Polimeraz

Uygulama test alanlarının genişlemesi ve pazar talebindeki artış nedeniyle, vahşi tip Taq DNA polimerazı artık gereksinimleri tam olarak karşılayamıyor. Yeasen'in ZymeEditor™ enzim modifikasyon platformu, çeşitli uygulama ihtiyaçlarını karşılamak için Taq DNA polimerazını kapsamlı ve yönlü olarak modifiye ederek, önceden karıştırılmış, inhibitöre dirençli, ultra temiz ve diğer uygulamalar için uygun bir dizi sıcak başlatmalı Taq DNA polimerazı piyasaya sürdü.

• Üstün Stabilite: Primer ve probları içeren tam bir premiks solüsyonu halinde formüle edilmiş olup, 37°C'de 7 gün süreyle işlemden geçirildikten sonra düşük konsantrasyon tespitinde herhangi bir değişiklik görülmemiştir.

Şekil 1: HBV nükleik asidini şablon olarak kullanarak, 10726ES ile bir qPCR tam ön karışım çözeltisi hazırlandı ve şablon dışındaki tüm bileşenler 7 gün boyunca 37°C'de hızlandırılmış kararlılık açısından test edildi. Sonuçlar, yüksek, orta ve düşük konsantrasyonlarda Ct değerlerinde ve floresan değerlerinde önemli bir değişiklik olmadığını gösterdi ve bu da 10726ES ile hazırlanan ön karışım çözeltisinin kararlı performansa sahip olduğunu gösteriyor.

• Düşük konak gDNA kalıntısı: Kalan E. coli genomik DNA'sı 100 U başına 0,5 kopyadan azdır.

Şekil 2: E. coli genomik DNA'sının doğrusal aralığı: 30 fg/μL ila 300 pg/μL, 0,9999'luk bir korelasyon katsayısı R2 ile. (B) Üç parti Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polimerazındaki kalan E. coli genomik DNA'sı 100 U başına 0,5 kopyadan azdır.

2、Çekirdek enzim materyali-Ters Transkriptaz

RT-qPCR reaksiyonunun temel bileşenlerinden biri olarak, ters transkriptaz daha hızlı ters transkripsiyon hızına, daha yüksek sentez verimine ve daha iyi ısı direncine sahip olmalıdır. RT-qPCR için daha uygun ters transkriptaz elde etmek için Yeasen Biotech, genetik modifikasyon yoluyla M-MLV'ye dayalı Hifair® serisi ters transkriptazları geliştirmiştir.Bu enzimler daha düşük RNaseH aktivitesine, daha yüksek termal stabiliteye ve daha güçlü sürekli sentez kabiliyetlerine sahiptir.

• 58℃ reaksiyon sıcaklığına dayanabilir ve karmaşık RNA şablonlarının ters transkripsiyonu için uygundur

Şekil 3: Hifair® V Ters Transkriptaz ve ithal marka T* ters transkriptaz, kalıntı enzim aktivitesini tespit etmek için 55°C ve 58°C'de 30 dakika inkübe edildi. Sonuçlar, Hifair® V Ters Transkriptaz'ın 58°C'de 30 dakika inkübasyondan sonra %70 aktiviteyi koruduğunu ve ithal markayı önemli ölçüde aştığını göstermektedir.

• Diğer markalara kıyasla RT-qPCR'de üstün tespit oranı, 1 pg ila 1 μg tespit aralığı

Şekil 4: 1 pg ila 1 μg (7 gradyan) arasında değişen konsantrasyonlarda 293T hücre toplam RNA'sını şablon olarak kullanarak, ters transkripsiyon Hifair® V tek adımlı RT-gDNA sindirimi SuperMix for qPCR (Cat#11142), V* ve T* kullanılarak gerçekleştirildi. Elde edilen cDNA daha sonra kantitatif analiz için qPCR'ye tabi tutuldu. Sonuçlar, 11142ES'nin duyarlılığının 1 pg'ye ulaşabileceğini ve rakip ürünlerden daha üstün bir tespit oranına sahip olduğunu göstermektedir.

3、Diğer Enzimler ve Enzim İnhibitörleri: RNase İnhibitörü, UDG Enzimi

Yeasen Biotech, RNase inhibitörleri ve UDG enzimleri de dahil olmak üzere IVD endüstriyel uygulamaları için doğrulanmış çeşitli enzimler ve enzim inhibitörleri sunarak, geniş bir yelpazede in vitro tanı ürünlerinin geliştirilmesi ve üretimi için zengin bir yüksek kaliteli ham madde çözümleri yelpazesi sunmaktadır. Bu enzimle ilgili ürünler, moleküler tespit hedef ürünlerinin korunmasında yaygın olarak kullanılmaktadır.

RNaz inhibitör：Yeasen, E. coli içinde çözünür bir formda rekombinant fare/domuz RNaz inhibitörlerini ifade eder ve saflaştırır, bu da polimerazların aktivitesini bastırmadan çeşitli RNaz tiplerini (RNaz A, B, C) geniş ölçüde inhibe edebilir. Bu inhibitörler, RT-PCR/qPCR, RNA-seq, cDNA klonlama ve kütüphane oluşturma gibi birden fazla uygulamada yaygın kullanım için doğrulanmıştır. Geleneksel RNaz inhibitörlerine ek olarak, Yeasen ayrıca daha düşük konak kalıntısına sahip ve arka plan bakterileri için daha sıkı gereksinimleri olan uygulamalar için uygun olan UCF.ME® ultra düşük kalıntı teknolojisi ile işlenmiş RNaz inhibitörleri geliştirmiştir, patojen tespitinde arka plan bakteri müdahalesinin çözülmesine yardımcı olur ve tespitin doğruluğunu artırır.

Urasil DNA Glikosilaz (UDG/UNG enzimi)）：Urasil-DNA glikozilaz (UDG enzimi), dUTP ile birlikte kullanıldığında bir PCR kontaminasyon önleme sistemi oluşturabilir. Yisheng'in termolabil, düşük UDG enzimi, oda sıcaklığında dU içeren amplifikasyon ürünlerinin bozulmasına neden olabilen inaktivasyondan sonra geleneksel UDG enzimlerinin kalıntı aktivitesini önleyebilir. Ayrıca moleküler enzimlerde bulunan arka plan bakterilerinin neden olduğu PCR sonuçlarındaki yanlış pozitifleri de önler. Bu, bulaşıcı patojenleri doğru bir şekilde tanımlamak ve enfeksiyonların ve bulaşıcı hastalıkların klinik tanısına yardımcı olmak için çok önemlidir.

Taq DNA Polimeraz Antikoru：Spesifik olmayan amplifikasyon, PCR performansını önemli ölçüde etkileyen başlıca sorunlardan biridir ve sıcak başlatma teknolojisi, spesifik olmayan amplifikasyonu etkili bir şekilde azaltabilir. Antikorlarla modifiye edilen sıcak başlatma enzimi, yüksek bir sızdırmazlık verimliliğine ve mükemmel bir performansa sahiptir, enzim aktivitesinin hızlı bir salınım oranıyla oda sıcaklığında stabildir.Yisheng Biotech tarafından geliştirilen ikili antikorlu sıcak başlangıçlı Taq enzimi, sadece Taq enziminin 5'→3' polimeraz aktivitesini mühürlemekle kalmaz, aynı zamanda aynı anda 5'→3' ekzonükleaz aktivitesini de mühürler. Bu ikili yaklaşım, yanlış eşleşme veya primer dimerlerinden kaynaklanan spesifik olmayan amplifikasyonu etkili bir şekilde önler ve ayrıca probların veya primerlerin bozulması nedeniyle spesifik olmayan sinyallerin oluşmasını önler, böylece reaktiflerin kararlılığını iki katına çıkarır.

4、Evrensel Yüksek Performanslı Bir tüp qPCR Master Mix

Yeasen Biotech, optimize edilmiş bir tampon sistemiyle eşleştirilmiş yüksek performanslı sıcak başlatmalı Taq polimeraz içeren yüksek kaliteli qPCR reaktifleri sunar. Şirket, evrensel ana karışımlar, hepsi bir arada ana karışımlar, genotipleme ana karışımları ve dondurularak kurutulmuş ana karışımlar dahil olmak üzere bir dizi ürün sağlar. Bu reaktifler, moleküler tanı ürünlerinizin gelişimini hızlandıran kullanım kolaylığı, yüksek hassasiyet ve güçlü stabiliteleriyle karakterize edilir.

• iyi çok yönlülük：Birden fazla tipte primer ve prob için uygundur (40'tan fazla farklı tipte hedef doğrulanmıştır) ve mükemmel amplifikasyon performansına sahiptir;
• ben Süper tam premiks stabilitesi: 37℃'de 14 gün, 4℃'de 28 gün stabil kaldı, 50 kez tekrarlanan dondurma ve çözme işlemi uygulandı;

• Yüksek duyarlılık ve iyi özgüllük: duyarlılık 0,25 kopya/μL'yi tespit edebilir ve 48 deliğin özgüllüğü negatif tepe noktasına sahip değildir;
• Hızlı program desteği:hızlı programla uyumlu, 30 dakikada sonuç üretebilir;
• dUP/UDG kirlilik önleme sistemi: Aerosol kirliliğini etkin bir şekilde önlemek için dUTP/UDG kirlilik önleme sistemi devreye alındı;
• Çoklu platform ve çoklu sistem uygulaması: Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong, vb.

Şekil 5: Hepsi bir arada önceden karıştırılmış reaktifin kararlılık çalışmasına dayanarak, 16710ES üç farklı şekilde (4°C, 37°C ve dondurma-çözme döngüleri) işlendi. Deney grupları sırasıyla 4°C ve 37°C'de 7 gün işlendi ve 50 dondurma-çözme döngüsüne tabi tutuldu, kontrol grubu (-20°C'de saklandı) ise dört multipleks amplifikasyon sistemi altında kararlılık açısından değerlendirildi (Grup 1, 2 ve 4 dörtlü amplifikasyon sistemleridir ve Grup 3 üçlü amplifikasyon sistemidir). Sonuçlar, deney ve kontrol grupları arasındaki Ct değerlerinin (ΔCt) sapmasının ±0,5 içinde ve floresan değeri sapmasının %15 içinde olduğunu gösterdi ve Yeasen'in hepsi bir arada önceden karıştırılmış reaktifinin multipleks amplifikasyonda mükemmel kararlılığa sahip olduğunu kanıtladı.

5、Evrensel Yüksek Performanslı RT-qPCR Ana Karışımı

Tek adımlı RT-qPCR reaktifleri, ters transkriptaz ve sıcak başlatma enzimlerinin üstün performansını, optimize edilmiş bir tamponlama sistemiyle birleştirerek tek basamaklı kopya şablonlarının hızlı ve hassas bir şekilde tespit edilmesini sağlar. Solunum yolu hastalığı, hayvan salgını ve araştırma sistemleri dahil olmak üzere çeşitli müşteri pazarları tarafından doğrulanan bu reaktifler, çeşitli uygulama yönlerinin ihtiyaçlarını karşılayabilir.

• iyi çok yönlülük：Patojenik mikroorganizmaların, insan genomlarının, bitkilerin ve diğer türlerin nükleik asitlerinin qPCR amplifikasyonu ve tespiti için uygundur；
• Yüksek hassasiyet：Dikkatlice optimize edilmiş tampon sistemi, düşük konsantrasyonlu şablonların tespit hassasiyetini 250 kopya/mL'ye kadar artırır；
• dUP/UDG kirlilik önleme sistemi：dUTP/ Isıya duyarlı UDG kirlilik önleme sistemi, ürünlerin aerosol kirliliğini etkin bir şekilde azaltmak, yanlış pozitifleri azaltmak ve otantik sonuçları garantilemek için tanıtıldı；
• Hızlı program desteği: hızlı programla uyumlu, 40 dakikada sonuç üretebilir;
• Süper stabilite: 37℃'de 14 gün boyunca stabil tutuldu, 10 kez tekrarlanan dondurma ve çözme işlemi uygulandı.

Tespit hassasiyeti değerlendirmesi

Şekil 6: Yeasen'in RT-qPCR ön karışımını (16630ES) ve Tedarikçi-A'dan benzer bir ürünü kullanarak, dört patojen hedefinin tespiti aynı anda gerçekleştirildi (İnsan Parainfluenza Virüsü HPIV2, İnsan Parainfluenza Virüsü HPIV4, Solunum Sinsitiyal Virüsü HRVA ve Rinovirüs RSVA). Sonuçlar, 16630ES'nin tespit hassasiyetinin Tedarikçi-A'dan daha yüksek olduğunu gösterdi.

Ürün önerisi

产品Fotoğrafçı	产品名称	Cevap
PCR enzim serisi	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polimerazı, 5 U/μL	10726ES
	Hifair® V Ters Transkriptaz (200 U/μL)	11300ES
	Urasil DNA Glikosilazı (UDG/UNG), ısıya duyarlı, 1 U/μL	10303ES
	Fare RNaz İnhibitörü (40 U/µL)	10603ES
	dNTP Karışımı (her biri 25 mM)	10125ES
Ultra düşük konak kalıntısı olan ultra temiz PCR tek enzim serisi	Hieff UCF.ME® Hotstart Hassas Taq DNA Polimerazı (5 U/μL)	14314ES
	Hifair UCF.ME® V Ters Transkriptaz (200 U/μL)	14608ES
	UCF.ME® Urasil DNA Glikosilaz (UDG/UNG), ısıya duyarlı, 1 U/μL	14466ES
	UÇF.ME® Fare RNaz İnhibitörü (40 U/µL)	14672ES
Lyo-Ready PCR monoenzim serisi	Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polimerazı, Gliserol içermez (5U/μL)	14316ES
	Hifair® V Ters Transkriptaz, Gliserol içermez (600 U/μL)	11301ES
	Urasil DNA Glikosilaz (UDG), Isıya Dayanıklı (1 U/μL, Gliserol İçermez)	10707ES
	Fare RNaz İnhibitörü (200 U/µL, Gliserol içermez)	10703ES
RT-qPCR Ana Karışımı	Hifair® C203P1 Multiplex Tek Adımlı RT-qPCR Prob Kiti（UDG Plus）	16630ES
	Hifair® V Multiplex Tek Adımlı RT-qPCR Prob Kiti（UDG Plus）	11899TS
	Hifair® Lyo Multiplex Tek Adımlı RT-qPCR Kiti	11831ES
qPCR Ana Karışımı	Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Karışımı (Bir Tüp)	16710ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Ana Karışımı（UDG plus）	13891ES
	Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG artı）	11827ES
	Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG artı）	11853ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Ana Karışımı（UDG plus）	11893ES