Protein elektroforezi bir protein analiz tekniğidir. Proteinler bir tamponda negatif veya pozitif olarak yüklenir ve elektroforez adı verilen bir elektrik alanında anoda doğru hareket eder. Farklı protein moleküllerinin farklı elektroforetik hareketlilikleri vardır. Protein elektroforezinin çok önemli bir kısmı jel hazırlamadır. Geleneksel jel hazırlama genellikle birkaç saat sürer ve ayrıca sıvı sızıntısı, düzensiz jel ve hava kabarcıkları gibi sorunlar da vardır. Hazırlamanın sıkıntısına ek olarak, ham madde reaktifleri de tutkal dağıtıcısının gövdesine zarar verecek belirli bir toksisiteye sahip olacaktır ve önceden hazırlanmış tutkalın görünümü bu sorunları çözebilir. Peki protein elektroforezinin temel prensibi nedir ve önceden dökülmüş jelin işlevi ve prensibi nedir?

1. Protein elektroforezinin temel prensibi nedir?
2. Prefabrik yapıştırıcının işlevi ve prensibi nedir?
3. Yeasen tarafından sağlanan prefabrik tutkalın tanıtımı
4. SSS
5. Ürün detayları

1. Protein elektroforezinin temel prensibi nedir?

Proteinler ve nükleik asitler gibi çoğu biyolojik makromolekül, zwitterion adı verilen katyonik ve anyonik gruplara sahiptir. Parçacıkların çözeltide dağıtıldığı ve destekleyici ortam olarak nişasta jeli, agar veya agaroz jeli, poliakrilamid jel vb. kullanılan bölge elektroforezi yöntemine jel elektroforezi denir. Poliakrilamid jel elektroforezi, desteğin poliakrilamid jel olduğu bir elektroforez yöntemidir. Poliakrilamid jelin gözenek boyutunun polimerize olacak şekilde kontrol edildiği ve proteinlerin benzer bir moleküler eleğin etkisiyle ayrıldığı düşünülmektedir.

Protein elektroforezi iki form içerir, doğal poliakrilamid jel elektroforezi (Native-PAGE) ve sodyum dodeasil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE). Doğal-PAGE, elektroforez sırasında proteinleri sağlam tutar ve bunları moleküler ağırlıklarına, şekillerine ve eşlik eden yüklerine göre bir gradyanla ayırır. Öte yandan, SDS-PAGE proteinleri alt birimlerinin moleküler ağırlığına göre ayırır. SDS anyonik bir deterjandır. Bir denatüre edici ve bir çözücü madde olarak, molekül içi ve moleküller arası hidrojen bağlarını kırabilir, molekülleri katlayabilir ve protein moleküllerinin ikincil ve üçüncül yapılarını yok edebilir. Güçlü bir indirgeyici madde olan merkaptoetanol, ditiyotreitol, sistein kalıntıları arasındaki disülfür bağlarını kırabilir. Numuneye ve jele indirgeyici madde ve SDS eklendikten sonra, moleküller polipeptit zincirlerine depolimerize edilir ve depolimerize edilmiş amino asit yan zincirleri ve SDS protein-SDS misellerine birleştirilir. Protein-SDS misellerinin negatif yükü, proteinin orijinal yükünü aşarak farklı moleküller arasındaki yük farkını ve yapısal farkı ortadan kaldırır. Proteinin hareketliliği yalnızca proteinin moleküler kütlesine bağlıdır ve proteinin moleküler kütlesi, bilinen bir moleküler kütle standardı ile karşılaştırılarak belirlenebilir.

2. Prefabrik yapıştırıcının işlevi ve prensibi nedir?

Geleneksel elle döküm jellerle karşılaştırıldığında, önceden dökülmüş protein jelleri Çok sayıda toksik reaktifle temas önlenebilir, çok fazla zaman kazandırılabilir ve el döküm jellerindeki büyük farklılıklar sorunu etkili bir şekilde çözülebilir.

Jel, iki farklı jel katmanından oluşur, üst katman bir istifleme jeli ve alt katman bir ayırma jelidir. İstifleme jeli, istifleme jeli olarak da bilinir.Jel konsantrasyonu nispeten küçüktür ve gözenek boyutu nispeten büyüktür. Numune, istifleme jeline eklenir ve büyük gözenek boyutlu jelin göçü yoluyla dar bir bölgede yoğunlaştırılır. Elektroforez jeli olarak da bilinen ayırma jeli genellikle küçük bir gözenek boyutuna sahiptir ve uygun jel konsantrasyonunun seçilmesi numune bileşenlerinin iyi ayrılmasını sağlayabilir.

Ayırıcı jeller sabit jeller ve gradyan jeller olarak ikiye ayrılabilir. Poliakrilamid konsantrasyonu %8, %10, %12, %15, %4 ila %12 ve %4 ila %20'dir. İlk dördü sabit konsantrasyonlu önceden dökülmüş jellerdir ve son ikisi gradyan jellerdir. Konsantrasyonlar izole edilmiş protein moleküler ağırlıklarının aralığını temsil eder. Jel gradyanları gradyan karıştırıcılar tarafından oluşturulur. Cam levhaya yüksek konsantrasyonlu bir akrilamid çözeltisi eklenir ve daha sonra çözeltinin konsantrasyonu bir gradyanla azalır ve jelin gözenek boyutu üstte daha büyük, altta daha küçüktür. Sabitleyici jel yalnızca ayırma aralığındaki proteinleri ayırabilir, ne çok büyük ne de çok küçük. Gradyan jellerde bu sınırlama yoktur, burada büyük moleküller üstten, küçük moleküller ise alttan ayrılır. Gradyan jelin gözenek boyutu giderek küçüldüğünden, proteinin nüfuz edemeyeceği gözenek boyutuna yakın protein üzerinde yoğunlaştırıcı bir etkiye sahiptir, bu nedenle elektroforezden sonra çok dar bir bölge oluşacaktır. Moleküler ağırlıkta küçük farklara sahip proteinler genellikle sabit jellerde ayrılamaz ancak gradyan jellerde çözülebilir.

3. Yeasen tarafından sağlanan prefabrik tutkalın tanıtımı

EVET Prekast Protein Plus Jel içerir Gradyan konsantrasyonu ve sabit konsantrasyon, çeşitli farklı konsantrasyonlar farklı protein elektroforezinin ihtiyaçlarını karşılayabilir. Benzersiz bir jel hazırlama işlemiyle hazırlanır ve mükemmel bir elektroforetik etkiye sahiptir. Piyasadaki her türlü elektroforez tankıyla uyumludur (Bio-RAD, Tanon, Life, vb.) ve geniş uyarlanabilirlik, yüksek çözünürlük, yüksek kararlılık, net ve düzgün bantlar vb. avantajlarına sahiptir.

3.1 EVET Prekast Protein Plus Jel plastik bir tahtaya geçin, daha kaliteli!

Kullanımı kolay: kullanıma hazır; Plastik levhanın altındaki yapışkan bandı yırtın

Geniş uygulama yelpazesi: denatüre protein ve doğal proteinle uyumludur

Net bant: plastik tabakların özel işlenmesi protein adsorpsiyonunu büyük ölçüde azaltır

Zaman kazandıran: deney en hızlı şekilde 18 dakikada tamamlanabilir

Kalite güvencesi: sıkı parti içi kararlılık güvencesi

Uzun raf ömrü: 4℃'de saklanabilir 12 ay boyunca

3.2 Aşağıdaki parametreler uygun jel serisini seçmenize yardımcı olabilir

Elektroforez tampon sistemi: denatüre protein çalışma tamponu veya doğal protein çalışma tamponu

Kuyu sayısı ve örnek yükleme: 10 veya 15 kuyu, maksimum örnek boyutu sırasıyla 70 μL ve 40 μL idi

jel konsantrasyonu: %8, %10, %12, %15, %4-%12, %4-%20

Tablo 1.Jel konsantrasyonu ve doğrusal ayırma aralığı

3.3 Veri gösterimi

Şekil 1. Veriler şunu gösteriyor

Şekil 2. Veriler şunu gösteriyor

4. SSS

S1: Prefabrike yapı olmalı mı? jel 4℃'ye mi yerleştirilmeli? Bir süre oda sıcaklığında bırakmanız sorun olur mu?

A: Tavsiye edilen 4℃, 12 ay saklanabilir. 0℃'nin altında saklamayın, oda sıcaklığında (25℃) 30 gün saklanabilir.

S2: Gradyan konsantrasyonu ile sabit konsantrasyon arasında nasıl seçim yapılır? Prekast ile ayrılmış proteinin minimum moleküler ağırlığı nedir? jel?

A: Prekast ile protein ayrımının boyutu jel konsantrasyonu ile ilgilidir ve karşılık gelen ayırma aralığı yukarıdaki şekilde gösterilmiştir.

Sabit konsantrasyonlu prekast jel daha iyi çözünürlüğe sahiptir. Gradient concentration prekast jel daha geniş bir ayırma aralığına ve daha geniş bir uygulama yelpazesine sahiptir; Müşteriler Kendi ihtiyaçlarına göre uygun konsantrasyonu seçmelidirler.

%4-%20 eğim prekastımız jel (Cat#36250, Cat#36256) 3,5 kDa kadar düşük proteinler için geniş bir ayırma aralığına sahiptir.

Şekil 3. Gradyan prekast jel verisi

S3: Prekast mı? jel özel tamponunuzla donatılmanız mı gerekiyor? Tamponunuzu kendiniz yapabilir misiniz?

A: YEASEN özel tampon (Cat#36236, Cat#36237) ve önceden dökülmüş jel uygulanabilirliği daha iyidir. Diğer tamponlarla karıştırmayın. Tampon, reaktifler satın alınarak hazırlanabilir, ancak müşteriler İlgili prekastta bulunabilen formülümüzü kullanmamız gerekiyor jel talimatları.

S4: Ayırma jeli ile ayırma jeli arasındaki fark nasıl anlaşılır? ve konsantre jel? Kesitsel voltaj elektroforezi için gerekli midir?

A: İki bileşen aynı, ancak konsantrasyonları aynı değil, çıplak gözle ayırt edilemez; konsantre tutkalın yüksekliği 1,5 cm'dir.

Hayır, 150 V'da elektroforez yapılması önerilir ve deneyin tamamlanması için 30-40 dakikaya ihtiyaç vardır.

S5: Prekastınız mı? Piyasadaki her türlü elektroforez tankına uygun jel nedir?

A: Evet, prekastımız jel Piyasadaki her türlü elektroforez tankına uygundur,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra Sistemi) ve Tanon VE180 (Sızdırmazlık şeridinin ters montajına dikkat edin);

Life Technology Novex Mini-cell (özel bölme ile kullanılır);

10 cm elektroforez tankında diğer jel plaka genişliği.

5. Ürün detayları

Yeasen'in sağladığı ürünler şunlardır:

Tablo 2.Ürün detayları