Glikoproteomik ve antikor ilaç araştırmalarının hızla gelişmesiyle birlikte, glikozilasyon modifikasyonu da büyük ilgi görmüştür. Hücreler ve hücreler arasındaki ve hücreler ve patojenler arasındaki temas esas olarak şekerler ve proteinlerin etkileşimi yoluyla tamamlanır ve glikozilasyon glikokonjugatların yapışma özelliklerini belirler. IgG'de, Fc bölgesindeki Asn297'deki korunan N-bağlı glikozilasyon da aktivitesi için önemlidir. Ek olarak, bazı antikorlar ayrıca, Fc bölgesindeki Asn297'deki korunan bölgeyle birlikte antikorun tanınmasını, yarı ömrünü ve bağışıklık tepkisini etkileyen ek N-glikanlara sahiptir.
Protein glikozilasyonu, proteinler üzerindeki belirli bölgelerde glikan zincirlerinin bağlanmasını içeren karmaşık bir translasyon sonrası modifikasyondur. Glikan zincirinin türüne bağlı olarak glikoproteinler N-bağlı glikoproteinler, O-bağlı glikoproteinler vb. olarak ayrılır; ayrıca, protein glikozilasyonu konak hücre tipi ve fermantasyon koşullarından (kültür ortamı, pH değeri, sıcaklık vb. gibi) da etkilenir. Bu nedenle, glikoproteinler genellikle glikozilasyon bölgeleri, glikozilasyon seviyeleri ve glikan zincirlerinin özgül yapısı dahil olmak üzere glikozilasyon desenlerinde heterojenliğe sahiptir ve bu da glikan zinciri analizini ve yapısal karakterizasyon işini son derece zorlu hale getirir. Maksimum miktarda glikan zinciri yapısal bilgisi elde etmek için, glikan zinciri analizinin ana stratejisi önce glikan zincirlerini proteinlerden serbest bırakmak ve ardından ayrıntılı analiz ve karakterizasyon yapmaktır. Bu stratejide, verimli, doğru ve kararlı bir deglikozilasyon yöntemi çok önemlidir.
Deglikozilasyonda günümüzde enzimatik yöntemler yaygın olarak kullanılmaktadır. N-bağlı glikanlar için yaygın olarak kullanılan enzimler arasında PNGase F, Endo H ve Endo S bulunur.
Ürün Tanıtımı
PNGaz F N-bağlı bakterilerin neredeyse tamamının uzaklaştırılmasında en etkili enzimatik yöntemdir glikoproteinlerdeki oligosakkaritler, asparaginle bağlı yüksek mannozlu, hibrit ve kompleks oligosakkarit glikoproteinlerini parçalayabilir ve özellikle N-bağlı glikanları çıkarabilir. Parçalama yeri: en içteki N-asetilglukozamin (GlcNAc) ile asparagin kalıntısı arasındaki amid bağıdır, enzimatik hidrolizden sonra protein üzerindeki asparaginin aspartik aside dönüştürülmesi.
α1-6 fukoz GlcNAc çekirdeğinde yer aldığında PNGase F de kesebilir; ancak α1-3 fukoz GlcNAc çekirdeğinde yer aldığında (bitki ve böcek glikoproteinlerinde yaygındır) PNGase F kesemez.
Firmamız şunları sunmaktadır: geleneksel PNGase F (Kat#20407ES)，Ancak, geleneksel PNGase F enzimatik reaksiyonu antikor N-glikanlarını serbest bırakmak için birkaç saat gerektirir ve glikan salınımına yönelik tercih nedeniyle, eksik deglikozilasyon önyargılı sonuçlara yol açabilir ve elde edilen glikan dağılımı terapötik antikorların doğru bileşimini temsil etmeyebilir. Bu nedenle, antikorların ve antikor füzyon proteinlerinin ve diğer biyoterapötik ajanların üretim süreci sırasında glikozilasyon izleme için mümkün olduğunca çabuk doğru bir N-glikan profili elde etmek çok önemlidir.
Hızlı PNGase F (Kedi #20406ES) antikorları, immünoglobulinleri, füzyon proteinlerini ve diğer glikoproteinleri birkaç dakika içinde hızla ve tamamen deglikosile edebilen optimize edilmiş bir rekombinant reaktiftir. Bu enzim, tüm N-glikanları hızlı ve tercihsiz bir şekilde giderebilir ve doğrudan akış aşağı kromatografisi veya kütle spektrometrisi analizi için kullanılabilir.
Ürün Özellikleri:
Hızlı: Birkaç dakika içerisinde tam ve hızlı deglikozilasyon.
Yüksek Saflık: Proteaz, glikozidaz kontaminasyonu yok, saflık ≥%95.
Seçici olmayan: Hızlı ve tercihsiz bir şekilde tüm N-glikanları uzaklaştırın.
İyi Uyumluluk: Doğrudan akış aşağı kromatografisi veya kütle spektrometrisi analizlerinde kullanılır.
Endo H N-glikoproteinlerdeki yüksek mannoz ve bazı hibrit tip oligosakkaritlerin kitobiyoz çekirdek yapısını parçalayarak glikoproteinlerden N-bağlı yüksek mannozu uzaklaştıran rekombinant bir glikozidazdır.
Firmamız şu anda maya rekombinant ekspresyonlu Endo H(Cat#20414ES) sunmaktadır.
Endo S, vahşi tip IgG ağır zincirlerinin kitobiyoz çekirdek yapıları arasındaki N-bağlı şekerleri parçalayabilen oldukça spesifik bir glikozidazdır. Glikozidaz S'nin aktivitesi kesinlikle peptide bağlı değildir, bu nedenle X bir protein, peptit, asparagin veya serbest oligosakkarit olabilir. Glikozidaz S, substrat üzerinde çekirdek alfa1-6 fükoz veya ikiye bölen N-asetilglukozaminin varlığından bağımsız olarak aktiftir. Ancak, üç veya dört antenli siyalillenmiş ve desiyalillenmiş oligosakkaritlere karşı etkisizdir.
Firmamız şu anda E.coli rekombinant ekspresyonlu Endo S(Cat#20413ES) sunmaktadır.
Satınalma Rehberi
| Ürün kodu | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Ürün Adı | ||||
| Kaynak | Maya rekombinant ekspresyonu | Maya rekombinant ekspresyonu | Maya rekombinant ekspresyonu | E.koli basili rekombinant ifade |
| Belirli Aktivite | Uygulanamaz | 100000U/mL | 1000000U/mL | 8000 U/mg |
| Bölünme Yeri | Neredeyse tüm N-bağlı glikanların | Neredeyse tüm N-bağlı glikanların | N-bağlı yüksek mannoz glikanlar | IgG ağır zincirinin çekirdek disakkarit yapısı içinde parçalanır |
| Sindirim Zamanı | 10 dk | 1-3 saat | 1-3 saat | 1 saat |
| Glikozilasyon | Uygun | Uygun | Uygun | Uygun |
| Protein Yapısı | Uygun | Uygun | Uygun | Uygun |
Test Verileri
1.Hızlı PNGase F Test
1: Protein MarkerCat#20350ES) 2: Rakip + substrat veya antikor 3: Rakip + substrat veya antikor
4: Yeasen Fast PNGase F + substrat veya antikor 5: Yeasen Fast PNGase F + substrat veya antikor 6: Substrat veya antikor 7: Yeasen Fast PNGase F 8: Rakip
2.Endo H Testi
Şekil 2. Endo H enzimatik parçalama etkisi (alt tabaka)
3.Endo S Testi
Ürün Bilgileri
| Ürün Adı | Ürün Numarası | Şartname |
| 20406ES20/50 | 20T/50T | |
| 20407ES01/02 | 15000 TL /75000 TL | |
| 20414ES92/97 | 10000 TL /50000 TL | |
| 20413ES80/90 | 1000U/5 x 1000U |