Etiket Antikorları Giriş
Etiket antikorları, hedef proteinlerin ifade seviyelerini ve işlevlerini analiz etmek ve belirlemek için çeşitli ticari ifade vektörlerindeki etiket dizilerinin tespiti ve saflaştırılması için kullanılır. Kullanımlarının ardındaki prensip, bu etiket antikorlarının karşılık gelen etiket kaynaşmış proteinlere spesifik olarak bağlanabildiği antijen-antikor reaksiyonudur. İşte etiket antikorlarıyla birlikte kullanılmaya uygun bazı yaygın protein etiketlerinin kısa bir listesi:
Tablo 1. Farklı Protein Etiketlerine Giriş
| Etiket | Sekans | Özellikler | Uygulanabilir Senaryolar |
| Bayrak | DYKDDDDK | 1. Küçük molekül ağırlığına sahip, füzyon proteininin fonksiyonunu değiştirmez, benzer etiketlere göre daha hidrofiliktir; 2. Hedef proteinin N-terminusuna kaynaştırıldığında etiket çıkarılması için uygun olan enterokinaz tanıma bölgesini (DDDDK) içerir. | Ökaryotik ekspresyon sistemlerinde düşük ekspresyon seviyeli füzyon proteinlerinin saflaştırılması ve tespiti için uygundur. |
| HA | YPYDVPDYA | İnfluenza virüsünün hemaglutinin yüzey antijeni determinantından türetilmiştir; apoptotik hücrelerle ilgili deneylerde kullanmaktan kaçınılmalıdır. | Protein saflaştırma ve tespiti için uygundur. |
| Benimki | Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu | İnsan proto-onkogen Myc'den türetilmiştir; insan hücreleriyle ilgili deneylerde kullanmaktan kaçının. | Genellikle protein saflaştırmada kullanılmaz, tespit için uygundur. |
Yeasen etiketli antikor afinitesi saflaştırma ürünleri, hammadde olarak yüksek kaliteli fare IgG monoklonal antikorlarından yapılır. "Kovalent kuplaj" adı verilen bir işlemle, bu antikorlar agaroz matrislerine veya nano-manyetik boncukların yüzeylerine yönlü ve etkili bir şekilde bağlanır. Bu, yalnızca spesifik olmayan protein bağlanmasını azaltmakla kalmaz, aynı zamanda ortamda daha yüksek bir antikor yükü elde edilmesini sağlar. Ek olarak, farklı etiketli antikor saflaştırma reçineleri ve immünomanyetik boncuklar dahil olmak üzere çeşitli saflaştırma gereksinimleri için uygun etiketli antikor saflaştırma ürünleri sağlar ve etiketli proteinlerin saflaştırılmasını ve manuel veya otomatik yöntemler kullanılarak immünoçöktürme deneylerini kolaylaştırır.
Yeasen Tag Antikor Saflaştırma Ürünü Seçim Kılavuzu
| Ürün Serisi | Arıtma Reçine Serisi | İmmünoMagnetik Boncuk Serisi | |||||
| Ürün Numarası | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| Ürün Adı | Anti-HA MagBead'ler | Anti-MycMagBeads | |||||
| Ligandlar | Yüksek kaliteli fare IgG monoklonal antikorları | Yüksek kaliteli fare anti-GFP/Flag/HA/Myc monoklonal antikorları | |||||
| Protein Bağlama Kapasitesi | ≥1,1 mg Bayrak etiketli füzyon proteini/mL jel ≥1,5 mg HA etiketli füzyon proteini/mL jel ≥0,9 mg Myc etiketli füzyon proteini/mL jel | ≥0,8 mg GFP etiketli füzyon proteini/mg boncuklar ≥0,6 mg Bayrak etiketli füzyon proteini/mg boncuklar ≥0,4 mg HA etiketli füzyon proteini/mg boncuk ≥0,5 mg Myc etiketli füzyon proteini/mg boncuklar
| |||||
| Matris | %4 çapraz bağlı agaroz jel | Silika bazlı manyetik boncuklar | |||||
| Parçacık Boyutu | 45-165 µm | 200 mil | |||||
| Avantajları | Düşük spesifik olmayan bağlanma, yüksek kapasite | Yüksek saflık, yüksek kapasite, yüksek özgüllük, manyetik raf ile rahat kullanım | |||||
| Önerilen Uygulamalar | Herhangi bir ölçekte etiketli füzyon proteinlerinin afinite saflaştırılması, immünoçöktürme (IP) | İmmünopresipitasyon (IP), Eş-immünopresipitasyon (COIP) | |||||
Test Verileri
1.Yeasen Anti-Flag Afinite Jeli (20584ES) ile Brand S* Saflaştırma Karşılaştırma Testi.
Şekil 1. Yeasen (a) ve Brand S* (b) Anti-Flag Jel Karşılaştırma Testi Jel Görüntüsü
M: Protein Marker; 1: Flag-N, M, C proteinlerinin kolon öncesi lizatı; 2: Flag-N, M, C proteinlerinin kolon sonrası permeatı; 3: Elüsyon (pH 2.7 elüsyon); 4: Elüsyon (pH 12 elüsyon)
2. Aşağıdaki şekildeki oklar hedef etiketli proteinleri göstermektedir ve manyetik boncuklar doğrudan kaynatıldıktan sonra yukarıdan aşağıya doğru üç bant BSA, antikorun ağır zinciri ve antikorun hafif zinciridir.
Figür 2. Bayrak Etiketli Proteinlerin Anti-Flag MagBeads Saflaştırılması
1: Flag-etiketli protein içeren E. coli lizatı 10 μL; 2: Flag-etiketli protein içeren E. coli lizatının manyetik boncuklarla inkübasyonundan sonra üst sıvı 10 μL; 3: Flag-etiketli proteinin Anti-Flag MagBeads 10 μL ile doğrudan kaynatılması; 4: Anti-Flag MagBeads'in doğrudan kaynatılması; 5: İşaretleyici
3.
Figür 3. GFP Etiketli Proteinlerin Anti-GFP MagBeads Saflaştırılması
1: GFP etiketli protein içeren E. coli lizatı 10 μL; 2: GFP etiketli protein içeren E. coli lizatının manyetik boncuklarla inkübasyonundan sonra üst sıvı 10 μL; 3: GFP etiketli proteinin Anti-GFP MagBeads 10 μL ile doğrudan kaynatılması; 4: Anti-GFP MagBeads'in doğrudan kaynatılması; 5: İşaretleyici
Ürün Bilgileri
| Ürün Adı | Ürün Numarası | Şartname |
| 20584ES03/08/25 | 1 mL/5 mL/25 mL | |
| 20586ES03/08/25 | 1 mL/5 mL/25 mL | |
| 20587ES03/08/25 | 1 mL/5 mL/25 mL | |
| 20565ES03/08 | 1 mL/5 ml | |
| Anti-HA MagBead'ler | 20566ES03/08 | 1 mL/5 ml |
| Anti-Myc MagBead'ler | 20567ES03/08 | 1 mL/5 ml |
| 20564ES03/08 | 1 mL/5 ml |