1- ماده آنزیمی هسته - Taq DNA Polymerase

با گسترش زمینه های آزمایش کاربرد و افزایش تقاضای بازار، نوع وحشی Taq DNA پلیمراز دیگر نمی تواند به طور کامل نیازها را برآورده کند. پلت فرم اصلاح آنزیم ZymeEditor ™ Yeasen به طور جامع و جهت دار Taq DNA پلیمراز را برای رفع نیازهای کاربردی مختلف تغییر داده است و مجموعه ای از Taq DNA پلیمرازهای شروع داغ را برای کاربردهای پیش مخلوط، مقاوم در برابر بازدارنده، فوق تمیز و سایر کاربردها راه اندازی کرده است.

• پایداری برتر: فرموله شده به صورت محلول پیش مخلوط کامل حاوی پرایمرها و پروب ها، پس از تیمار در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 7 روز، هیچ تغییری در تشخیص غلظت کم ایجاد نمی شود.

شکل 1: با استفاده از اسید نوکلئیک HBV به عنوان یک الگو، یک محلول کامل premix qPCR با 10726ES تهیه شد و تمام اجزا به جز الگو برای پایداری تسریع شده در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 7 روز آزمایش شدند. نتایج نشان داد که هیچ تغییر معنی‌داری در مقادیر Ct و مقادیر فلورسانس در غلظت‌های بالا، متوسط ​​و پایین وجود ندارد که نشان می‌دهد محلول پیش مخلوط تهیه‌شده با 10726ES عملکرد پایداری دارد.

• باقیمانده gDNA میزبان کم: DNA ژنومی باقیمانده E. coli کمتر از 0.5 کپی در 100 U است.

شکل 2: محدوده خطی DNA ژنومی E. coli: 30 fg/μL تا 300 pg/μL، با ضریب همبستگی R2 0.9999. (ب) DNA ژنومی باقیمانده E. coli در سه دسته Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polymerase کمتر از 0.5 کپی در 100 واحد است.

2، ماده آنزیمی هسته- ترانس کریپتاز معکوس

به عنوان یکی از اجزای کلیدی واکنش RT-qPCR، رونویسی معکوس باید دارای سرعت رونویسی معکوس سریع‌تر، بازده سنتز بالاتر و مقاومت حرارتی بهتر باشد. برای بدست آوردن ترانس کریپتاز معکوس مناسب تر برای RT-qPCR، Yeasen Biotech سری Hifair® از رونوشت های معکوس را بر اساس M-MLV از طریق اصلاح ژنتیکی توسعه داده است.این آنزیم ها دارای فعالیت کمتر RNaseH، پایداری حرارتی بالاتر و قابلیت سنتز مداوم قوی تر هستند.

• این می تواند دمای واکنش 58 درجه را تحمل کند و برای رونویسی معکوس الگوهای پیچیده RNA مناسب است.

شکل 3: Hifair® V Reverse Transcriptase و مارک وارداتی T* reverse transcriptase در دمای 55 درجه سانتیگراد و 58 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند تا فعالیت آنزیم باقیمانده شناسایی شود. نتایج نشان می دهد که Hifair® V Reverse Transcriptase پس از انکوباسیون در دمای 58 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه، 70 درصد فعالیت را حفظ می کند، که به طور قابل توجهی از برند وارداتی فراتر می رود.

• نرخ تشخیص برتر در RT-qPCR در مقایسه با مارک های دیگر، با محدوده تشخیص 1 pg تا 1 μg

شکل 4: با استفاده از RNA کل سلول 293T در غلظت های مختلف از 1 pg تا 1 میکروگرم (7 گرادیان) به عنوان یک الگو، رونویسی معکوس با استفاده از Hifair® V یک مرحله ای RT-gDNA digestion SuperMix برای qPCR (Cat#11142)، V* و T* انجام شد. سپس cDNA حاصل برای تجزیه و تحلیل کمی تحت qPCR قرار گرفت. نتایج نشان می‌دهد که حساسیت 11142ES می‌تواند به 1 pg برسد، با نرخ تشخیص برتر از محصولات رقیب.

3، سایر آنزیم ها و مهارکننده های آنزیم: مهارکننده RNase، آنزیم UDG

Yeasen Biotech انواع مختلفی از آنزیم‌ها و مهارکننده‌های آنزیمی را ارائه می‌کند که برای کاربردهای صنعتی IVD تأیید شده‌اند، از جمله مهارکننده‌های RNase و آنزیم‌های UDG، که مجموعه‌ای غنی از محلول‌های مواد خام با کیفیت بالا را برای توسعه و تولید طیف وسیعی از محصولات تشخیصی آزمایشگاهی ارائه می‌دهد. این محصولات مرتبط با آنزیم به طور گسترده در حفاظت از محصولات هدف شناسایی مولکولی استفاده می شود.

RNase بازدارنده：Yeasen بازدارنده های نوترکیب RNase موش/ خوک را به شکل محلول در E. coli بیان و خالص می کند، که می تواند به طور گسترده انواع مختلف RNase ها (RNase A, B, C) را بدون سرکوب فعالیت پلیمرازها مهار کند. این بازدارنده‌ها برای استفاده گسترده در کاربردهای متعدد مانند RT-PCR/qPCR، RNA-seq، شبیه‌سازی cDNA و ساخت کتابخانه تایید شده‌اند. علاوه بر مهارکننده‌های معمولی RNase، Yeasen همچنین بازدارنده‌های RNase پردازش شده با فناوری UCF.ME® با باقیمانده فوق‌العاده کم را توسعه داده است که دارای باقیمانده میزبان کمتری هستند و برای کاربردهایی با الزامات سخت‌تر برای باکتری‌های پس‌زمینه مناسب هستند، به حل تداخل باکتری‌های پس‌زمینه در تشخیص پاتوژن و افزایش دقت تشخیص کمک می‌کنند.

Uracil DNA Glycosylase (آنزیم UDG/UNG):اوراسیل-DNA گلیکوزیلاز (آنزیم UDG)، هنگامی که همراه با dUTP استفاده می شود، می تواند یک سیستم پیشگیری از آلودگی PCR ایجاد کند. آنزیم ناپایدار گرما و UDG کم Yisheng می تواند از فعالیت باقیمانده آنزیم های UDG معمولی پس از غیرفعال شدن جلوگیری کند، که ممکن است باعث تخریب محصولات تقویت کننده حاوی dU در دمای اتاق شود. همچنین از مثبت کاذب نتایج PCR ناشی از باکتری های پس زمینه موجود در آنزیم های مولکولی جلوگیری می کند. این برای شناسایی دقیق پاتوژن های عفونی و کمک به تشخیص بالینی عفونت ها و بیماری های عفونی بسیار مهم است.

آنتی بادی Taq DNA Polymerase:تقویت غیر اختصاصی یکی از مسائل مهمی است که به طور قابل توجهی بر عملکرد PCR تأثیر می گذارد و فناوری شروع گرم می تواند به طور موثر تقویت غیر اختصاصی را کاهش دهد. آنزیم شروع گرم اصلاح شده با آنتی بادی ها دارای راندمان آب بندی بالا و عملکرد عالی است و در دمای اتاق با سرعت آزادسازی سریع فعالیت آنزیم پایدار است.آنزیم دو پادتن شروع داغ Taq توسعه یافته توسط Yisheng Biotech نه تنها فعالیت پلیمراز 5'→3' آنزیم Taq را مهر و موم می کند بلکه به طور همزمان فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' را نیز مهر و موم می کند. این رویکرد دوگانه به طور موثر از تقویت غیر اختصاصی ناشی از جفت نادرست یا دایمرهای پرایمر جلوگیری می کند و همچنین از تولید سیگنال های غیر اختصاصی به دلیل تخریب پروب ها یا پرایمرها جلوگیری می کند و در نتیجه پایداری معرف ها را دوچندان می کند.

4. ترکیب اصلی qPCR تک لوله ای با کارایی بالا

Yeasen Biotech معرف های qPCR با کیفیت بالا را ارائه می دهد که دارای Taq polymerase شروع داغ با کارایی بالا و یک سیستم بافر بهینه شده است. این شرکت طیف وسیعی از محصولات را ارائه می دهد، از جمله میکس های اصلی جهانی، میکس های اصلی همه در یک، میکس های اصلی ژنوتیپ و میکس های اصلی خشک شده یخ زده. این معرف ها با سهولت استفاده، حساسیت بالا و پایداری قوی مشخص می شوند که توسعه محصولات تشخیص مولکولی شما را سرعت می بخشد.

• تطبیق پذیری خوب：برای انواع مختلف پرایمرها و پروب های متعدد مناسب است (بیش از 40 نوع هدف مختلف تایید شده است) و عملکرد تقویت عالی دارد.
• ل پایداری فوق العاده کامل پیش مخلوط: در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 14 روز، 4 درجه سانتیگراد به مدت 28 روز، انجماد و ذوب مکرر 50 بار.

• حساسیت بالا و ویژگی خوب: حساسیت می تواند 0.25 کپی / میکرولیتر را تشخیص دهد و ویژگی 48 سوراخ هیچ اوج منفی ندارد.
• پشتیبانی از برنامه سریع:سازگار با برنامه سریع، 30 دقیقه می تواند نتایج ایجاد کند.
• سیستم ضد آلودگی dUP/UDG: سیستم ضد آلودگی dUTP/UDG برای جلوگیری از آلودگی هوا به طور موثر معرفی شده است.
• برنامه چند پلتفرمی و چند سیستمی: Bio-Rad CFX96، ABI Q5، 7500، Slan، Tianlong و غیره.

شکل 5: بر اساس مطالعه پایداری معرف از پیش مخلوط شده همه در یک، 16710ES به سه روش مختلف (4 درجه سانتی گراد، 37 درجه سانتی گراد و چرخه های انجماد- ذوب) تیمار شد. گروه های آزمایشی به ترتیب در دمای 4 درجه سانتی گراد و 37 درجه سانتی گراد به مدت 7 روز تحت درمان قرار گرفتند و تحت 50 چرخه انجماد- ذوب قرار گرفتند، در حالی که گروه کنترل (ذخیره شده در دمای 20- درجه سانتیگراد) از نظر پایداری تحت چهار سیستم تقویت چندگانه (گروه های 1، 2 و 4 سیستم های تقویت چهارگانه سه سیستم تقویت کننده و گروه یک سیستم تقویت سهگانه هستند) ارزیابی شدند. نتایج نشان داد که انحراف مقادیر Ct (ΔCt) بین گروه تجربی و کنترل در محدوده 0.5± بود و انحراف مقدار فلورسانس در محدوده 15٪ بود و ثابت کرد که معرف پیش مخلوط Yeasen دارای ثبات عالی در تقویت چندگانه است.

5، میکس اصلی RT-qPCR با کارایی بالا

معرف‌های RT-qPCR یک مرحله‌ای عملکرد برتر رونوشت معکوس و آنزیم‌های شروع داغ را با یک سیستم بافر بهینه تکمیل می‌کنند و امکان تشخیص سریع و حساس الگوهای کپی تک رقمی را فراهم می‌کنند. این معرف‌ها که توسط بازارهای مختلف مشتریان از جمله بیماری‌های تنفسی، اپیدمی حیوانات و سیستم‌های تحقیقاتی تأیید شده‌اند، می‌توانند نیازهای جهت‌های کاربردی مختلف را برآورده کنند.

• تطبیق پذیری خوب: برای تقویت qPCR و تشخیص اسیدهای نوکلئیک میکروارگانیسم های بیماری زا، ژنوم انسان، گیاهان و سایر گونه ها مناسب است.
• حساسیت بالا：سیستم بافر با دقت بهینه سازی شده حساسیت تشخیص الگوهای با غلظت کم را تا 250 کپی در میلی لیتر بهبود می بخشد.
• سیستم ضد آلودگی dUP/UDG：dUTP/ سیستم ضد آلودگی UDG حساس به گرما برای کاهش آلودگی آئروسل محصولات به طور موثر، کاهش مثبت کاذب و اطمینان از نتایج معتبر معرفی شده است.
• پشتیبانی از برنامه سریع: سازگار با برنامه سریع، 40 دقیقه می تواند نتایج ایجاد کند.
• پایداری فوق العاده: به مدت 14 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد ثابت کنید، 10 بار انجماد و ذوب را تکرار کنید.

ارزیابی حساسیت تشخیص

شکل 6: با استفاده از پیش میکس Yeasen's RT-qPCR (16630ES) و یک محصول قابل مقایسه از تامین کننده-A، شناسایی چهار هدف پاتوژن به طور همزمان انجام شد (Human Parainfluenza Virus HPIV2، Human Parainfluenza Virus HPIV4، Respiratory Syncyt VirusHIVRS، VirushiRVA). نتایج نشان داد که حساسیت تشخیص 16630ES بالاتر از Supplier-A است.

توصیه محصول

产品类型	产品名称	货号
سری آنزیمی PCR	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase، 5 U/μL	10726ES
	Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11300ES
	اوراسیل DNA گلیکوزیلاز (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL	10303ES
	مهارکننده RNase موش (40 U/µL)	10603ES
	dNTP Mix (هر کدام 25 میلی‌مولار)	10125ES
سری تک آنزیمی PCR بسیار تمیز با باقیمانده میزبان بسیار کم	Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	14314ES
	Hifair UCF.ME® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	14608ES
	UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL	14466ES
	UCF.مهارکننده RNase موش ME® (40 U/µL)	14672ES
سری مونوآنزیم Lyo-Ready PCR	Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase، بدون گلیسرول (5U/μL)	14316ES
	Hifair® V Reverse Transcriptase، بدون گلیسرول (600 U/μL)	11301ES
	اوراسیل DNA گلیکوزیلاز (UDG)، حساس به حرارت (1 U/μL، بدون گلیسرول)	10707ES
	مهارکننده RNase موش (200 U/µL، بدون گلیسرول)	10703ES
RT-qPCR Master Mix	کیت پروب Hifair® C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus)	16630ES
	کیت پروب Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus)	11899ES
	کیت Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR	11831ES
qPCR Master Mix	Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix (One Tube)	16710ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)	13891 ES
	Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix（UDG plus）	11827ES
	Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11853ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)	11893ES