در سال های اخیر، با توسعه سریع تکنیک های زیست شناسی مولکولی، روش های تشخیصی مبتنی بر اسید نوکلئیک به طور گسترده ایجاد شده و به طور گسترده در آزمایش های آزمایشگاهی بیماری های انسانی استفاده می شود. در مقایسه با سایر تکنیک های تقویت اسید نوکلئیک، تقویت همدما مزایای سریع، کارآمد و خاص بودن را ارائه می دهد و به تجهیزات تخصصی نیاز ندارد. بنابراین، از زمان پیدایش، توسط بسیاری از محققان به عنوان یک روش تشخیص که به طور بالقوه می تواند رقیب PCR باشد، مورد توجه قرار گرفته است.

در نتیجه، اعتقاد بر این است که توسعه و کاربرد ابزارها و کیت‌های تشخیصی مبتنی بر فناوری تقویت همدما، مسیر جدیدی را برای تست نقطه مراقبت (POCT) در تشخیص مولکولی نشان می‌دهد.

مقدمه ای بر اصول فن آوری های اصلی تقویت همدما

1، تقویت همدما با واسطه حلقه

فناوری (LAMP).

اصل：تقویت همدما با واسطه حلقه (LAMP) از Bst DNA پلیمراز استفاده می کند که دارای فعالیت جابجایی رشته است. این چهار نوع پرایمر خاص را طراحی می کند که شش ناحیه از ژن هدف را هدف قرار می دهد، که امکان تقویت موثر، سریع و اختصاصی توالی هدف را در شرایط همدما فراهم می کند. تقویت را می توان در دمای ثابت 60-65 درجه سانتی گراد و در عرض 15-60 دقیقه، تقویت اسید نوکلئیک 10 انجام داد.⁹ به 10¹⁰ زمان می توان به دست آورد.

مزایا و کاربردها:با توجه به واکنش سریع، ویژگی بالا، تجهیزات ساده و کارکرد آسان و نتایجی که تفسیر آنها آسان استتقویت همدما در تشخیص استفاده شده است باکتری های بیماری زا، انگل ها، ویروس ها، بیماری ها و محصولات اصلاح شده ژنتیکی. همچنین انتظار می رود که به طور گسترده در تشخیص بیماری های عفونی بالینی، نظارت بر محیط زیست، ایمنی مواد غذایی و سایر زمینه ها استفاده شود. این روش به یک روش ایده آل مناسب برای تست نقطه مراقبت مولکولی تبدیل شده است (POCT) سکوها

طبقه بندی：روش‌های تشخیص LAMP به چند نوع طبقه‌بندی می‌شوند، از جمله کدورت‌سنجی، روش‌های نشان‌دهنده pH، روش‌های رنگرزی فلورسنت (مانند NHB، calcein، SYBR Green، Syto و غیره) و روش‌های پروب فلورسنت.

2، فناوری تقویت پلیمراز Recombinase (RPA).

اصل：آنزیم recombinase، هنگامی که به پرایمرها متصل می شود، یک کمپلکس پروتئین-DNA را تشکیل می دهد که می تواند توالی های همولوگ را در DNA دو رشته ای جستجو کند. هنگامی که پرایمرها توالی های همولوگ را پیدا کردند، یک واکنش تبادل رشته رخ می دهد، که منجر به تشکیل و شروع سنتز DNA می شود، که به طور نمایی ناحیه هدف را روی الگو تقویت می کند. رشته DNA جابجا شده به پروتئین تک رشته ای (SSB) متصل می شود تا از جابجایی بیشتر جلوگیری کند. در این سیستم، یک رویداد سنتز توسط دو آغازگر متضاد آغاز می‌شود که عمدتاً بر فعالیت‌های ریکبیناز، آنزیم Bsu و پروتئین SSB تکیه دارند. این فناوری می تواند در دمای بین 37 تا 42 درجه سانتی گراد، هدف مورد نظر را در عرض 10 تا 30 دقیقه به سرعت شناسایی کند.

مزایا و کاربردها:RPA به خود می بالد حساسیت بالا، ویژگی قوی، وابستگی کم به تجهیزات تخصصیو قابلیت ادغام فرمت های مختلف تشخیص. این به ویژه برای تست نقطه مراقبت در سطح پایه و در محیط های میدانی مناسب است. RPA را می توان به طور گسترده در تشخیص آزمایشگاهی، بیماری های حیوانات، ایمنی مواد غذایی، ایمنی زیستی، کشاورزی و سایر زمینه ها به کار برد.

طبقه بندی：روش‌های تشخیص RPA به چندین نوع دسته‌بندی می‌شوند، از جمله الکتروفورز ژل، روش پروب EXO، روش پروب Fpg، نوار جریان جانبی (LF-RPA)، و تجزیه و تحلیل لخته‌سازی و غیره.

ویترین عملکرد محصول

01 pH حساس رنگ RT-LAMP معرف

رنگ حساس به pH RT-LAMP از یک رنگ بصری به عنوان یک شاخص حساس در شرایط همدما 60-65 درجه سانتیگراد برای تکمیل تکثیر اسید نوکلئیک RNA یک مرحله ای با استفاده از حمام آب با دمای ثابت یا دستگاه PCR استاندارد استفاده می کند. تنها در 30 دقیقه، از تغییر رنگ پس از واکنش می توان برای تعیین اینکه آیا عفونت پاتوژن وجود دارد یا خیر، با نتایج بصری تر (مثبت زرد نارنجی، منفی سرخابی است) استفاده کرد. این روش برای آزمایش سریع جمعیت های بزرگ مناسب است.

محصولات پیشنهادی：

کیت رنگ حساس به pH RT-LAMP (13906ES)
کیت خشک کن انجمادی نسخه کروموژنیک حساس به رنگ RT-LAMP به pH (13920ES)

نمایشگاه عملکرد：

1.راهنمای انتخاب ترکیب RT-LAMP/RPA

طبقه بندی محصول	مخلوط RT-LAMP			ترکیب RPA
نام محصول	کیت سنجش رنگ RT-LAMP (UDG plus)	کیت رنگ حساس به pH RT-LAMP	کیت خشک کن انجمادی RT-LAMP رنگ حساس به رنگ کروموژنیک	تقویت کننده فیوز سریع
شماره کالای محصول	13762ES	13906ES	سال 13920	16702ES
دسته بندی محصولات	رنگ فلورسنت	رنگ حساس به pH	رنگ حساس به pH	کاوشگر
اجزای محصول	2 جزء بافر، مخلوط آنزیمی	3 جزء بافر، آنزیم RT، آنزیم Bst	4 جزء بافر، آنزیم RT، آنزیم Bst، لیوپروتکتانت	4 جزء بافر، مخلوط آنزیمی، استات منیزیم
یخ خشک کردن پشتیبانی می شود	خیر	بله، بدون لیوپروتکتانت	بله، حاوی لیوپروتکتانت	خیر

2.راهنمای انتخاب آنزیم LAMP/RT-LAMP

طبقه بندی محصول	آنزیم Bst		ترانس کریپتاز معکوس		آنزیم UDG
نام محصول	Bst Plus	لیوفیلیزه Bst Plus	Ⅲ ترانس کریپتاز معکوس	III ترانس کریپتاز معکوس، بدون گلیسرول	UDG	UDG، بدون گلیسرول
شماره کالای محصول	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
فعالیت آنزیمی	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
اجزای محصول	3 جزء	2 جزء	2 جزء	تک جزئی	تک- جزء	تک جزئی
یخ خشک کردن پشتیبانی می شود	خیر	بله	خیر	بله	خیر	بله

3، راهنمای انتخاب آنزیم RPA

طبقه بندی محصول	Bsu	T4 X	T4 Y	SSB	CK	EXO
نام محصول	Bsu	T4 UvsX	T4 UvsY	gp 32	کراتین کیناز	اگزونوکلئاز III
شماره کالای محصول	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
فعالیت آنزیمی	5 U/μL	2 میکروگرم در میکرولیتر	2 میکروگرم در میکرولیتر	5 میکروگرم در میکرولیتر	2 میکروگرم در میکرولیتر	100 U/μL
اجزای محصول	تک جزئی	تک جزئی	تک جزئی	تک جزئی	تک جزئی	2 جزء
یخ خشک کردن پشتیبانی می شود	خیر	خیر	خیر	خیر	خیر	خیر