--- حذف تداخل باکتریایی پس زمینه و آلودگی RNase
در تشخیص پاتوژن در یک ضربه!
مهارکننده RNase (بازدارنده RNase، به اختصار RNasin) قادر است به طور خاص به RNase از طریق فعل و انفعالات غیر کووالانسی متصل شود تا یک کمپلکس تشکیل دهد، در نتیجه RNase را غیرفعال کرده و یکپارچگی RNA را حفظ کند. به طور گسترده ای در روش های تشخیص پاتوژن مانند RT-qPCR، mNGS و tNGS استفاده می شود. در طول تشخیص پاتوژن ها، کنترل دقیق آلودگی باکتریایی پس زمینه آنزیم های مولکولی بسیار مهم است. اگر آنزیم‌های مولکولی توسط باکتری‌های پس‌زمینه تداخل پیدا کنند، ممکن است اسیدهای نوکلئیک هدف با فراوانی کم را تحت الشعاع قرار دهند یا همراه با آنها شناسایی شوند و در نتیجه بر تفسیر نتایج تأثیر بگذارند.
بازدارنده RNase باقیمانده بسیار کم Yeasen
Yeasen UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES/14673ES/14674ES) یک مهارکننده RNase نوترکیب مشتق شده از موش است که به شکل محلول از E. coli خالص سازی شده است. این محصول توانایی مهار گسترده انواع مختلف RNaseها از جمله RNase A، B و C را دارد. این محصول با RT-PCR و RT-qPCR آزمایش شده است و مشخص شده است که با ترانس کریپتازهای معکوس معمولی و انواع DNA پلیمرازها سازگار است. در مقایسه با مهارکننده های RNase مشتق شده از انسان، Yeasen UCF.ME® Murine RNase Inhibitor فاقد دو باقی مانده سیستئین است که به اکسیداسیون در پروتئین های انسانی بسیار حساس هستند، بنابراین فعالیت آنتی اکسیدانی بالاتری ارائه می دهد. این به ویژه برای آزمایش های حساس به غلظت های بالای DTT، مانند qPCR مناسب است.
علاوه بر این، در مقایسه با مهارکننده‌های RNase معمولی (Cat#10603ES/10610ES/14671ES)، بازدارنده Yeasen UCF.ME® Murine RNase سطوح باقیمانده کمتری از DNA ژنومی میزبان را نشان می‌دهد که به تداخل باکتری‌های پس‌زمینه در تشخیص پاتوژن کمک می‌کند و تشخیص بیماری‌زا را افزایش می‌دهد.
ویژگی های محصول
- باقیمانده بسیار کم: سطح باقیمانده DNA E. coli < 0.1 کپی/100 U، مناسب برای کاربردهایی با نیازهای باکتریایی پس زمینه سخت گیرانه تر.
- فعالیت بازدارنده RNase با طیف گسترده: قادر به مهار RNaseها از جمله RNase A، RNase B، RNase C و غیره است.
- سازگار با طیف گسترده ای از شرایط واکنش: فعال در شرایط pH از 5.0 تا 9.0 و دما از 25 درجه سانتی گراد تا 60 درجه سانتی گراد، مناسب برای ترانس کریپتازهای معکوس ترموفیل.
- سازگار با طیف وسیعی از آزمایش‌های پایین دستی: تأثیری بر فعالیت آنزیمی پلیمرازهای RNA SP6، T7، یا T3، رونوشت‌های معکوس AMV، M-MLV و Taq DNA پلیمرازها ندارد.
- پایداری دسته به دسته: پلت فرم تولید آنزیم مولکولی فوق تمیز UCF.ME®، با کنترل کیفیت دقیق، یکنواختی، پایداری و عرضه به موقع محصول را تضمین می کند.
عملکرد محصول
1) بدون اگزونوکلئاز، آنزیم برش و RNase باقی مانده
شکل 1. تشخیص نوکلئاز، آنزیم nicking و باقیمانده RNase در UCF.ME® Murine RNase Inhibitor.
نکته: N نشان دهنده کنترل منفی است. 1، 2، 3 نشان دهنده سه مجموعه آزمایش موازی است.
باقیمانده DNA ژنومی کولی کمتر از 0.1 کپی در 100 U است که به طور قابل توجهی کمتر از نسخه معمولی است.
با انجام تشخیص باقیمانده DNA ژنومی میزبان (E.coli) بر روی دسته‌های مختلف مهارکننده RNase موش UCF.ME® و مقایسه آن با سطوح باقیمانده میزبان مهارکننده‌های مرسوم RNase موش، نتایج نشان می‌دهد که باقیمانده DNA ژنومی میزبان UCF.ME® موش RNase به میزان قابل‌توجهی کمتر از UCF.ME®RNase/10bi است. که از نسخه معمولی.
شکل 2: مقایسه نتایج تشخیص باقیمانده ژنومی E. coli بین UCF.ME® MRI و MRI معمولی.
3) قابلیت بازدارندگی RNase به طور قابل توجهی نسبت به مارک های وارداتی برتر است.
با استفاده از RNA توتال به عنوان یک الگو، واکنش RT-qPCR با استفاده از کیت پروب RT-qPCR Hifair® V Multiplex One Step (UDG Plus) (Cat#13650ES) برای تأیید قابلیت هضم RNaseA UCF.ME® Murine RNase Inhibitor انجام شد. نتایج نشان داد که اثر بازدارندگی Yeasen UCF.ME® MRI بر روی RNaseA به طور قابل توجهی نسبت به محصولات رقابتی بین المللی مشابه برتری دارد.
شکل 3: اعتبار سنجی قابلیت مهار RNase در MRI UCF.ME®
توجه: Yeasen UCF MRI: 8 UCF.ME® MRI + 80 نانوگرم RNaseA. Yeasen MRI: 8 U MRI + 80 ng RNaseA. رقیب N*: 8 واحد از یک محصول رقابتی مشابه + 80 نانوگرم RNaseA. کنترل: بدون MRI و RNaseA.
توصیه محصول
| تایپ کنید | نام | گربه |
| سری تک آنزیمی PCR بسیار تمیز با باقیمانده میزبان بسیار کم | Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 14314ES |
| Hifair UCF.ME® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 14608ES | |
| UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL | 14466ES | |
| UCF.ME® مهارکننده RNase موش (40 U/µL) | 14672ES | |
| سری مونوآنزیم PCR با کارایی بالا | Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase، 5 U/μL | 10726ES |
| Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 11300ES | |
| اوراسیل DNA گلیکوزیلاز (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL | 10303ES | |
| مهارکننده RNase موش (40 U/µL) | 10603ES | |
| dNTP Mix (هر کدام 25 میلی‌مولار) | 10125ES | |
| لیو آماده سری مونوآنزیم PCR | Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase، بدون گلیسرول (5U/μL) | 14316ES |
| Hifair® V Reverse Transcriptase، بدون گلیسرول (600 U/μL) | 11301ES | |
| اوراسیل DNA گلیکوزیلاز (UDG)، حساس به حرارت (1 U/μL، بدون گلیسرول) | 10707ES | |
| مهارکننده RNase موش (200 U/µL، بدون گلیسرول) | 10703ES |