فناوری تشخیص مولکولی به دلیل حساسیت و ویژگی استثنایی خود را از روش های مختلف تشخیص متمایز می کند. با این حال، معرف های تشخیصی مایع معمولی از اشکالاتی مانند هزینه های حمل و نقل بالا و ماندگاری محدود رنج می برند که کاربرد آنها را محدود می کند. در پاسخ به نیازهای در حال تحول بازار و پیشرفت‌های تکنولوژیکی، معرف‌های آزمایش تشخیصی مولکولی لیوفیلیزه پدید آمده‌اند. محصولات یخ زده مزایای متعددی نسبت به معرف های آزمایش مایع سنتی دارند، از جمله:
- در دمای اتاق پایدار است - ساختار سه بعدی ثابت است، که می تواند ثبات آنزیم و سیستم واکنش را در دمای اتاق تضمین کند. بدون نیاز به حمل و نقل و نگهداری با زنجیره سرد در یخچال یا سردخانه که می تواند ماندگاری محصولات را افزایش دهد.
- آسان برای استفاده- عدم نیاز به انجماد و ذوب مکرر، پخش مایع و غیره.
- کاهش هزینه- عدم نیاز به حمل و نقل با زنجیره سرد و ذخیره سازی منجمد، به طور موثر هزینه های حمل و نقل و ذخیره سازی را کاهش می دهد.
- دقت بالا- یک ریز هسته خشک انجمادی در یک واکنش برای کاهش خطای ترکیب در حین آماده سازی معرف، کوتاه شدن زمان عملیات، جلوگیری از از دست دادن فعالیت بیولوژیکی در طول آماده سازی مایع و بهبود اساسی دقت استفاده می شود.
- استفاده انعطاف پذیر- محدود به تعداد نمونه نیست، یک نمونه نیز قابل بارگیری است.
آنزیم‌های مولکولی مرسوم یا پیش مخلوط‌ها اغلب غلظت‌های بالایی از گلیسیرین را به‌عنوان یک عامل محافظ سرما و تثبیت‌کننده ترکیب می‌کنند. با این حال، وجود گلیسیرین در معرف می تواند یکپارچگی ساختاری آب را مختل کند و حذف موثر آب را چالش برانگیز کند. این، به نوبه خود، تأثیر مضری بر ساختار و پایداری محصول یخ زده دارد. بنابراین، هنگام انتخاب روش خشک کردن انجمادی، توصیه می شود که معرف های بدون گلیسرول را انتخاب کنید.
علاوه بر این، در کاربردهایی که به ویژه به ترکیب معرف حساس هستند، مانند PCR دیجیتال، استفاده از آنزیم‌های بدون گلیسیرین با غلظت بالا می‌تواند تأثیر گلیسرول را بر واکنش دیجیتال PCR کاهش دهد. این رویکرد نه تنها تداخل را به حداقل می رساند، بلکه پتانسیل بهینه سازی سیستم معرف تشخیص دیجیتال PCR را نیز گسترش می دهد.
YEASEN بدون گلیسرول محلول آنزیم مولکولی
YEASEN یک پلت فرم تحقیق و توسعه و تولید آنزیم مولکولی غیر گلیسیرین جامع ایجاد کرده است و از طریق انتخاب مواد، کنترل محیطی، بهینه سازی فرآیند و تضمین کیفیت به تولید آنزیم های مولکولی متعدد بدون گلیسرول در مقیاس بزرگ دست یافته است.
- آزمایش فرآیند دیالیز
بهینه سازی فرآیند دیالیز برای حجم ثابتی از آنزیم گلیسیرین:
- غربالگری برای بافر دیالیز بهینه برای آنزیم های مولکولی مختلف.
- غربالگری محلول‌های ذخیره‌سازی پایدار برای آنزیم‌های مولکولی مختلف برای امکان ذخیره‌سازی طولانی‌مدت در دمای 4 یا 20- درجه سانتیگراد.
- تقویت فرآیند فیلتراسیون جریان مماسی
بر اساس غربالگری فرآیند دیالیز، اجزای بافر دیالیز بهینه و محلول های ذخیره سازی بهینه آنها را می توان تعیین کرد. پس از آن، فرآیند فیلتراسیون جریان مماسی (همچنین به عنوان UFDF شناخته می شود) می تواند برای جایگزینی بافر محلول استفاده شود.
عوامل حیاتی در توسعه فرآیند فیلتراسیون جریان مماسی حول انتخاب فرمول محلول ذخیره سازی، فرمول محلول شستشو و فیلتراسیون، و همچنین فشار گذرنده و سرعت جریان اعمال شده در طول فیلتراسیون می چرخد. YEASEN یک رویکرد استاندارد برای فیلتراسیون جریان مماسی ایجاد کرده است، که امکان تعیین سریع حجم شستشو و فیلتراسیون و پارامترهای زمانی را بر اساس محتوای گلیسیرین مورد نظر در آنزیم مولکولی هدف فراهم می‌کند. این رویکرد به صرفه جویی در مصرف مواد و زمان کمک می کند.
- کنترل کیفیت
فرآیندهای مختلف آماده سازی که در بالا ذکر شد برای برآوردن نیازهای متنوع برای حجم ها و انواع مختلف محصول طراحی شده اند. برای ارزیابی پایداری محصول در دسته‌های مختلف و در یک فرآیند، YEASEN یک سیستم مشخصه پارامتر عملکرد جامع ایجاد کرده است. این سیستم امکان ارزیابی کامل تاثیر اقدامات بدون گلیسرول را از دیدگاه های مختلف فراهم می کند. روش‌های مشخص‌سازی شامل کمی‌سازی پروتئین، ارزیابی فعالیت آنزیم (نرخ بازیابی)، تجزیه و تحلیل محتوای گلیسیرین، ارزیابی محتوای عامل محافظ، و ارزیابی عملکرد آنزیم و غیره است.
محصولات آنزیمی مولکولی بدون گلیسرول YEASEN
YEASEN یک روش آماده‌سازی آنزیم مولکولی بدون گلیسرول را برای تولید آنزیم‌هایی بدون محتوای گلیسیرین از آنزیم‌هایی که در ابتدا حاوی گلیسیرین بودند، اتخاذ کرده است. در حال حاضر، ما می توانیم مقادیر قابل توجهی از مواد خام آنزیمی بدون گلیسرول را برای کاربردهای qPCR/RT-qPCR و LAMP/RT-LAMP عرضه کنیم. این مواد خام برای خشک کردن انجمادی در تست های تشخیصی طراحی شده اند، در حالی که سطح کیفیت و عملکرد مشابه مشابه مایع خود را حفظ می کنند.
محصولات آنزیمی مولکولی بدون گلیسرول
پیش مخلوط های qPCR با استفاده از آن تهیه شد YEASEN 14316ES E-Taq DNA پلیمراز و آنزیم های بدون گلیسرول مربوطه به ترتیب و الگوی 105، 104 و 103 کپی در میلی لیتر در همان زمان تقویت شد. نتایج نشان داد که اثر تقویتی 14316ES بدون گلیسرول با اثر حاوی گلیسیرین مطابقت دارد. همتای تست پایداری تسریع شده 14316ES در دمای 37 درجه سانتیگراد انجام شد. نتایج نشان داد که عملکرد انبساط 14316ES با کنترل بدون شتاب پس از 54 روز درمان تسریع شده در دمای 37 درجه سانتیگراد مطابقت دارد. نتایج فوق نشان داد که تفاوتی در عملکرد آنزیم بدون گلیسرول و حاوی گلیسیرین وجود ندارد. همتا، و ثبات خوب بود.
- محصولات انجمادی RT-qPCR: شتاب در دمای 50 درجه سانتیگراد به مدت 25 روز، محصولات یخ زده دارای مورفولوژی و عملکرد پایدار هستند.
Yeasen 14316ES در محلول پیش مخلوط شده RT-qPCR تهیه شد، که در انجماد خشک شد و برای پایداری تسریع شده در دمای 50 درجه سانتیگراد به مدت 25 روز آزمایش شد. در همان زمان، 105، 104 و 103 کپی در میلی لیتر از الگوی شبه ویروس کرونای جدید تقویت شد.نتایج نشان داد که مورفولوژی محصول، مقدار Ct و مقدار فلورسانس قبل و بعد از خشک کردن انجمادی تغییر معنی‌داری نداشتند و محصول انجمادی از پایداری خوبی برخوردار بود.
شکل 4: داده های تست پایداری تسریع شده محصولات خشک شده یخ زده RT-qPCR- محصولات انجمادی خشک شده RT-LAMP: شتاب در دمای 45 درجه سانتیگراد به مدت 30 روز، محصولات یخ زده دارای مورفولوژی و عملکرد پایدار هستند.
پیش مخلوط RT-LAMP با YEASEN تهیه شد 14405ES و 11297ES، و تست عملکرد پس از خشک کردن انجمادی انجام شد. سوراخ واکنش مثبت نارنجی و سوراخ واکنش منفی سرخابی بود که کنتراست بسیار خوبی را نشان داد و نتیجه به وضوح تفسیر شد. علاوه بر این، مورفولوژی محصولات منجمد خشک شده پس از 30 روز شتاب در دمای 45 درجه سانتیگراد تغییر قابل توجهی نداشت. نتایج نشان داد که محصول خشک شده با فریز از نظر شکل و عملکرد پایدار است.
اطلاعات محصول
| طبقه بندی | نآمی | شماره کاتالوگ |
| محصولات آنزیمی بدون گلیسرول برای qPCR/RT-qPCR | کیت Hifair™ Lyo Multiplex One Step RT-qPCR -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| محصولات آنزیمی بدون گلیسرول برای RT-LAMP | Hifair® III Reverse Transcriptase، 600U/μl، بدون گلیسرول | 11297ES |
| 14405ES |