نکات توجه

1. روش نگهداری: نگهداری پایدار در دمای اتاق به مدت 3 تا 6 ماه. برای مدت طولانی در دمای 4 درجه سانتیگراد یا 20- درجه سانتیگراد نگهداری شود.
2. نشانگر DNA برای آنالیز نوارهای DNA در الکتروفورز ژل آگارز مناسب است و برای استفاده در الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید توصیه نمی شود.
3. انتخاب غلظت ژل و محلول بافر:

غلظت آگاروز	محدوده جداسازی موثر (bp)	بافر توصیه شده
0.5٪	2000-50000	1×TAE
0.8٪	800-10000	1×TAE
1.0٪	400-8000	1×TAE
1.2٪	300-7000	1×TAE
1.5٪	200-3000	1×TAE/0.5×TBE
2.0٪	100-2000	1×TAE/0.5×TBE
3.0٪	25-1000	0.5×TBE

【توجه】: برای قطعات بزرگ، یک ژل با غلظت کم انتخاب کنید و از یک سیستم بافر TAE برای الکتروفورز استفاده کنید. برای قطعات کوچک، یک ژل با غلظت بالا انتخاب کنید و از یک سیستم بافر TBE برای الکتروفورز استفاده کنید.

4. انتخاب لکه های اسید نوکلئیک:

EB (Ethidium Bromide) یک رنگ فلورسنت بسیار حساس با حداکثر طول موج تحریک 302 نانومتر است که می تواند برای مشاهده اسیدهای نوکلئیک در ژل های آگارز و پلی آکریل آمید استفاده شود. EB با بازهای موجود در اسیدهای نوکلئیک ترکیب می شود و به عنوان سمی شناخته شده است.

YeaRed (Cat#10202ES76) و YeaGreen (Cat#10204ES76) رنگ‌های اسید نوکلئیک غیرسمی جدید با ساختار مولکولی روغنی منحصربه‌فرد هستند که نمی‌توانند به غشای سلولی نفوذ کنند و وارد سلول‌ها شوند، به راحتی فرار یا تصعید نیستند و در نتیجه توسط انسان‌های آزمایش‌کننده استنشاق نمی‌شوند.نتایج آزمایش ایمز همچنین نشان می‌دهد که YeaRed و YeaGreen هیچ جهش‌زایی در غلظت‌های رنگ‌آمیزی ژل ندارند، و آنها را جایگزین ایمن و غیرسمی برای EB بسیار سرطان‌زا می‌کند. علاوه بر این، YeaRed دارای ویژگی های طیفی مشابه با EB است، بنابراین می تواند بدون تغییر سیستم تصویربرداری موجود، کاملا جایگزین EB شود.

پرسش و پاسخ

Q1: چرا نوارهای با وزن مولکولی بالا نشانگر DNA کشیده می شوند و به خوبی از هم جدا نمی شوند؟

A1: رنگ اسید نوکلئیک به اندازه کافی با نشانگر DNA متصل نمی شود. از آنجایی که نوارهای با وزن مولکولی بالا به رنگ اسید نوکلئیک بیشتری نیاز دارند، اگر رنگ اشباع نباشد، نوارهای با وزن مولکولی بالا بیشتر مستعد اثرات مهاجرت هستند که منجر به کشیدن و جداسازی ضعیف می‌شود. توصیه می شود مقدار استفاده از DNA نشانگر را کاهش دهید (می توان آن را 5 بار با آب رقیق کرد و سپس 8-10 میکرولیتر بارگذاری کرد) یا غلظت رنگ اسید نوکلئیک را افزایش داد.

Q2: چرا هیچ باند یا باند ضعیفی برای DNA وجود ندارد؟

A2:

1. بارگذاری ناکافی DNA، مقدار بارگذاری شده را افزایش دهید.
2. ژل نوار DNA تمام شده است.
3. نوار DNA توسط رنگ ردیاب پوشیده شده است.
4. رنگ اسید نوکلئیک به ژل اضافه نشد.
5. ژل آگارز برای مدت طولانی باقی مانده است، توصیه می شود بلافاصله آن را تهیه و استفاده کنید.

Q3: چرا نوارهای نشانگر DNA منتشر می شوند؟

A3:

1. تخریب جزئی DNA، بررسی کنید که آیا شرایط نگهداری خیلی گرم است یا خیر.
2. ولتاژ در طول الکتروفورز بسیار کم است و باعث پخش شدن نوارهای DNA می شود. توصیه می شود ژل را با ولتاژ 110-130 اجرا کنید V بیش از 45 دقیقه؛
3. غلظت ژل آگارز مناسب نیست، مطابق با غلظت ژل توصیه شده در دفترچه راهنما تهیه کنید.
4. کیفیت ژل آگارز ضعیف است، توصیه می شود ژل جدید تهیه کنید.

Q4: چرا باندهای نمونه در مقایسه با باندهای نشانگر DNA اندازه های متفاوتی دارند؟

A4:

1. مهاجرت DNA نه تنها به اندازه واقعی مربوط می شود، بلکه به ترکیب آن با پروتئین ها، حالت یونی، ساختار DNA، ژل و سایر عوامل نیز مرتبط است. نرخ مهاجرت الکتروفورتیک اسیدهای نوکلئیک به نسبت DNA/رنگ مرتبط است و زمانی که مقدار رنگ اسید نوکلئیک کافی نباشد، می تواند منجر به خطاهای نرخ مهاجرت بزرگتر شود.
2. اگر نمونه حاوی غلظت بالایی از یون های نمک باشد، همچنین می تواند باعث خطاهای مهاجرت قابل توجهی شود.
3. اگر مقدار نمونه بارگذاری شده به طور قابل توجهی با مقدار نوارهای نشانگر DNA متفاوت باشد یا اگر حجم ها به طور قابل توجهی متفاوت باشد، همچنین می تواند باعث خطاهای مهاجرت بزرگتر شود.

اطلاعات سفارش

جهت گیری محصول	نام محصول	شماره محصول	مشخصات
نشانگر DNA	نشانگر DNA GoldBand DL2000	10501ES60/80	100 T/10×100 T
	نشانگر DNA GoldBand DL5000	10504ES60/80	100 T/10×100 T
	GoldBand 100bp DNA Ladder	10507ES60/80	100 T/10×100 T
	GoldBand 1 kb DNA Ladder	10510ES60/80	100 T/10×100 T