الکتروفورز پروتئین یک تکنیک آنالیز پروتئین است. پروتئین ها در یک بافر بار منفی یا مثبت دارند و در میدان الکتریکی به نام الکتروفورز به سمت آند حرکت می کنند. مولکول های مختلف پروتئین دارای تحرک الکتروفورتیک متفاوتی هستند. بخش بسیار مهم الکتروفورز پروتئین، تهیه ژل است. تهیه ژل معمولی اغلب چندین ساعت طول می کشد و مشکلاتی مانند نشت مایع، ژل ناهموار و حباب های هوا نیز وجود دارد. معرف های مواد اولیه علاوه بر دردسر آماده سازی، دارای سمیت خاصی نیز خواهند بود که به بدنه دستگاه چسب آسیب می رساند و ظاهر چسب پیش ساخته می تواند این مشکلات را برطرف کند. بنابراین اصل اساسی الکتروفورز پروتئین چیست و عملکرد و اصل ژل پیش ساخته چیست؟

1. اصل اساسی الکتروفورز پروتئین چیست؟
2. عملکرد و اصل چسب پیش ساخته چیست؟
3. معرفی چسب پیش ساخته ارائه شده توسط Yeasen
4. سوالات متداول
5. جزئیات محصول

1. اصل اساسی الکتروفورز پروتئین چیست؟

اکثر ماکرومولکول های بیولوژیکی مانند پروتئین ها و اسیدهای نوکلئیک دارای گروه های کاتیونی و آنیونی هستند که به آنها زویتریون می گویند. روش الکتروفورز ناحیه ای که در آن ذرات در محلول پراکنده می شوند و ژل نشاسته، ژل آگار یا آگارز، ژل پلی آکریل آمید و غیره به عنوان محیط نگهدارنده، الکتروفورز ژل نامیده می شود. الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید یک روش الکتروفورز است که در آن ساپورت ژل پلی آکریل آمید است. اعتقاد بر این است که اندازه منافذ ژل پلی آکریل آمید برای پلیمریزه شدن کنترل می شود و پروتئین ها با عمل یک غربال مولکولی مشابه جدا می شوند.

الکتروفورز پروتئین شامل دو شکل است، الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید بومی (Native-PAGE) و الکتروفورز ژل سدیم دودسیل سولفات-پلی آکریل آمید (SDS-PAGE). Native-PAGE پروتئین ها را در طول الکتروفورز دست نخورده نگه می دارد و آنها را در یک گرادیان بر اساس وزن مولکولی، شکل و بار همراه آنها جدا می کند. از سوی دیگر، SDS-PAGE پروتئین ها را با توجه به وزن مولکولی زیر واحدهای آنها جدا می کند. SDS یک شوینده آنیونی است. به عنوان یک عامل دناتوره کننده و حل کننده، می تواند پیوندهای هیدروژنی درون مولکولی و بین مولکولی را بشکند، مولکول ها را تا کند و ساختارهای ثانویه و سوم مولکول های پروتئین را از بین ببرد. مرکاپتواتانول، دی تیوتریتول به عنوان یک عامل کاهنده قوی، می تواند پیوندهای دی سولفیدی بین باقی مانده های سیستئین را بشکند. پس از افزودن عامل کاهنده و SDS به نمونه و ژل، مولکول ها به زنجیره های پلی پپتیدی دپلیمریزه می شوند و زنجیره های جانبی اسید آمینه دپلیمریزه شده و SDS به میسل های پروتئین-SDS ترکیب می شوند. بار منفی میسل های پروتئین-SDS از بار اصلی پروتئین بیشتر است و اختلاف بار و تفاوت ساختاری بین مولکول های مختلف را حذف می کند. تحرک پروتئین فقط به جرم مولکولی پروتئین بستگی دارد و جرم مولکولی پروتئین را می توان با مقایسه آن با یک استاندارد جرم مولکولی شناخته شده تعیین کرد.

2. عملکرد و اصل چسب پیش ساخته چیست؟

در مقایسه با ژل های دستی سنتی، ژل های پروتئینی پیش ساخته می تواند از تماس با تعداد زیادی از معرف های سمی جلوگیری کند، در زمان زیادی صرفه جویی کند و به طور موثر مشکل تفاوت های زیاد در ژل های دستی را حل کند.

این ژل از دو لایه ژل مختلف تشکیل شده است که لایه بالایی یک ژل انباشته و لایه پایینی یک ژل جداکننده است. ژل انباشته به ژل انباشته نیز معروف است.غلظت ژل نسبتاً کوچک و اندازه منافذ نسبتاً بزرگ است. نمونه به ژل انباشته اضافه می شود و از طریق مهاجرت ژل با اندازه منافذ بزرگ در یک منطقه باریک متمرکز می شود. ژل جداکننده که به نام ژل الکتروفورز نیز شناخته می شود، معمولاً دارای منافذ کوچکی است و انتخاب غلظت ژل مناسب می تواند اجزای نمونه را به خوبی از هم جدا کند.

ژل های جداکننده را می توان به ژل های ثابت و ژل های گرادیان تقسیم کرد. غلظت پلی آکریل آمید 8٪، 10٪، 12٪، 15٪، 4٪ تا 12٪ و 4٪ تا 20٪ است. چهار مورد اول ژل های پیش ساخته با غلظت ثابت و دو مورد آخر ژل های گرادیان هستند. غلظت ها محدوده وزن مولکولی پروتئین جدا شده را نشان می دهد. شیب ژل توسط میکسرهای گرادیان تشکیل می شود. یک محلول آکریل آمید با غلظت بالا به صفحه شیشه ای اضافه می شود و سپس غلظت محلول در یک گرادیان کاهش می یابد و اندازه منافذ ژل در بالا بزرگتر و در پایین کوچکتر می شود. ژل ثابت کننده فقط می تواند پروتئین ها را در محدوده جداسازی خود جدا کند، نه خیلی بزرگ و نه خیلی کوچک. ژل های گرادیان این محدودیت را ندارند، جایی که مولکول های بزرگ در بالا و مولکول های کوچک در پایین جدا می شوند. از آنجایی که اندازه منافذ ژل گرادیان به تدریج کوچکتر می شود، تأثیر متمرکز بر پروتئین نزدیک به اندازه منافذ دارد که پروتئین نمی تواند به آن نفوذ کند، بنابراین پس از الکتروفورز ناحیه بسیار باریکی تشکیل می شود. پروتئین هایی با تفاوت های کوچک در وزن مولکولی اغلب نمی توانند روی ژل های ثابت جدا شوند اما روی ژل های گرادیان قابل حل هستند.

3. معرفی چسب پیش ساخته ارائه شده توسط Yeasen

YEASEN ژل Precast Protein Plus شامل غلظت گرادیان و غلظت ثابت، انواع غلظت های مختلف می تواند نیازهای الکتروفورز پروتئین های مختلف را برآورده کند. این توسط یک فرآیند آماده سازی ژل منحصر به فرد تهیه می شود و اثر الکتروفورتیک عالی دارد. با انواع مخازن الکتروفورز موجود در بازار (Bio-RAD، Tanon، Life و ...) سازگاری دارد و دارای مزایای سازگاری گسترده، وضوح بالا، پایداری بالا، باندهای شفاف و یکنواخت و ... می باشد.

3.1 YEASEN ژل Precast Protein Plus ارتقاء به تخته پلاستیکی، کیفیت بهتر!

آسان برای استفاده: آماده برای استفاده. نوار چسب را از پایین تخته پلاستیکی جدا کنید

طیف وسیعی از کاربردها: سازگار با پروتئین دناتوره شده و پروتئین طبیعی

باند پاک کردن: درمان ویژه صفحات پلاستیکی تا حد زیادی جذب پروتئین را کاهش می دهد

صرفه جویی در زمان: آزمایش را می توان در حداکثر 18 دقیقه کامل کرد

تضمین کیفیت: تضمین پایداری بین دسته ای دقیق

ماندگاری طولانی: قابل نگهداری در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت 12 ماه

3.2 پارامترهای زیر می توانند به شما در انتخاب سری ژل مناسب کمک کنند

سیستم بافر الکتروفورز: بافر جاری پروتئین دناتوره یا بافر جاری پروتئین طبیعی

تعداد چاه و بارگیری نمونه: 10 یا 15 چاه، حداکثر حجم نمونه به ترتیب 70 میکرولیتر و 40 میکرولیتر بود.

غلظت ژل: 8٪، 10٪، 12٪، 15٪، 4٪ - 12٪، 4٪ - 20٪

جدول 1.غلظت ژل و محدوده جداسازی خطی

3.3 نمایش داده ها

شکل 1. داده ها را نشان می دهد

شکل 2. داده ها را نشان می دهد

4. سوالات متداول

Q1: باید از پیش ساخته شود ژل در 4 ℃ قرار می گیرد؟ آیا برای مدتی آن را در دمای اتاق بگذارید؟

الف: توصیه شده 4 ℃، می تواند برای 12 ماه ذخیره شود. در دمای زیر 0 درجه سانتیگراد نگهداری نشود، می توان آن را در دمای اتاق (25 درجه سانتیگراد) به مدت 30 روز نگهداری کرد.

Q2: چگونه بین غلظت گرادیان و غلظت ثابت انتخاب کنیم؟ حداقل وزن مولکولی پروتئین جدا شده توسط پیش ساخته چقدر است؟ ژل؟

A: اندازه جداسازی پروتئین توسط پیش ساخته ژل مربوط به غلظت آن است و محدوده جداسازی مربوطه در شکل بالا نشان داده شده است.

غلظت ثابت پیش ساخته ژل وضوح بهتری دارد پیش ساخته غلظت گرادیان ژل دارای محدوده تفکیک گسترده تر و طیف وسیع تری از کاربردها. مشتریان باید غلظت مناسب را با توجه به نیازهای خود انتخاب کنند.

پیش ساخته شیب 4 تا 20 درصد ما ژل (Cat#36250، Cat#36256) دارای محدوده جداسازی گسترده ای برای پروتئین های کم 3.5 کیلو دالتون است.

شکل 3. پیش ساخته گرادیان داده های ژل

Q3: پیش ساخته را انجام می دهد ژل باید به بافر مخصوص خود مجهز شوید؟ آیا می توانید بافر خود را بسازید؟

A: بافر ویژه YEASEN (Cat#36236، Cat#36237) و پیش ساخته قابلیت کاربرد ژل بهتر است. با بافرهای دیگر مخلوط نکنید. بافر را می توان با خرید معرف اما مشتریان تهیه کرد باید از فرمول ما استفاده کنیم که در پیش ساخته مربوطه یافت می شود دستورالعمل ژل

Q4: چگونه بین ژل جداکننده تمایز قائل شویم و ژل غلیظ؟ آیا برای الکتروفورز ولتاژ مقطعی لازم است؟

ج: دو جزء یکسان است، اما غلظت یکسان نیست، چشم غیر مسلح نمی تواند تشخیص دهد. ارتفاع چسب غلیظ 1.5 سانتی متر است.

خیر، الکتروفورز در ولتاژ 150 ولت توصیه می شود و 30-40 دقیقه برای تکمیل آزمایش لازم است.

Q5: پیش ساخته شما است ژل مناسب برای انواع مخازن الکتروفورز در بازار؟

A: بله، پیش ساخته ما ژل مناسب برای انواع مخازن الکتروفورز موجود در بازار،

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra System) و Tanon VE180 (به مونتاژ معکوس نوار آب بندی توجه کنید).

Life Technology Novex Mini-cell (مورد استفاده با بافل مخصوص).

سایر عرض صفحه ژل در مخزن الکتروفورز 10 سانتی متری.

5. جزئیات محصول

محصولات ارائه شده توسط Yeasen به شرح زیر است:

جدول 2.جزئیات محصول