- غشای لکه خود را در نوک انگشتان خود روشن کنید!
معرف های ECL، که به عنوان بسترهای نورتابی شیمیایی برای پراکسیداز ترب کوهی (HRP) شناخته می شوند، در حال حاضر حساس ترین معرف های مورد استفاده در تشخیص وسترن بلات هستند. مشکلات رایج معرف های ECL موجود در بازار شامل خاموش شدن، پس زمینه بالا، ناپایداری و مشکل در تشخیص پروتئین های کم فراوانی است که می تواند نتایج آزمایشی نهایی را تحت تاثیر قرار دهد.
Yeasen Biotech محققان علمی برجسته ای را در زمینه تشخیص ایمنی جمع آوری کرده است. با کنترل دقیق کیفیت مواد خام لومینول و بهبود مستمر فرمول تقویت کننده ها و تثبیت کننده ها، ما چهار نوع معرف ECL را برای پاسخگویی به نیازهای آزمایشات مختلف توسعه داده ایم. این محصولات شامل محصولات پیشرفته، فوق حساس، بادوام و با حساسیت فوق العاده بالا می باشد. آنها نه تنها الزامات تشخیص پروتئین های هدف را از فراوانی کم تا زیاد برآورده می کنند، بلکه شدت لومینسانس را بدون تأثیر بر آزمایش افزایش می دهند و در نتیجه تصاویر واضح تری ایجاد می کنند.
ویژگی های محصول
- حساسیت فوق العاده - تشخیص آنتی ژن از پیکوگرام تا سطوح پایین فمتوگرام.
- نسبت سیگنال به نویز بالاتر - بسترهای شب تاب دقیق نویز پس زمینه را کاهش می دهند.
- آنتی بادی کارآمدتر - سیستم های بستر بهینه شده برای میل اتصال بالاتر آنتی بادی.
- نسبت هزینه به عملکرد بالا - عملکرد بالاتر با قیمت پایین تر.
- پایداری عالی - اکسیدان های جدید نگهداری پایدار در دمای 4 درجه سانتیگراد را تا یک سال تضمین می کنند.
اصل محصول
اصل اصلی تشخیص معرف ECL، لومینسانس ناشی از واکنش های اکسیداسیون است: لومینول، جزء اصلی سوبسترای شب تاب، توسط H2O2 تحت شرایط قلیایی از طریق کاتالیز پراکسیداز ترب کوهی (HRP) اکسید می شود و یک حد واسط حالت برانگیخته از اسید آمینه 3 آمینو فتالیک را تشکیل می دهد. هنگامی که به حالت پایه باز می گردد، فوتون ها با حداکثر طول موج گسیل 425 نانومتر ساطع می شوند. این سیگنال های فوتون را می توان با فیلم اشعه ایکس یا دستگاه های تصویربرداری CCD گرفت.
راهنمای انتخاب
Yeasen در حال حاضر چهار نوع محصول ECL را ارائه می دهد که هر کدام دارای ویژگی های منحصر به فرد خود هستند تا به طور کامل نیازهای برنامه های immunoblotting کاربران را برآورده کنند.
بنابراین، کدام محصول را باید برای آزمایش خود انتخاب کنید؟
جدول 1.راهنمای انتخاب معرف ECL
| Yeasen | ECL تقویت شده نوع پیشرفته | Super ECL نوع فوق العاده حساس | سوپردورا نوع بادوام | MaxiSignal نوع حساسیت فوق العاده بالا |
| نمونه های کاربردی | با فراوانی بالا و نمونه های معمول پروتئین هدف قرار دهید | هدف با فراوانی کم، نمونه های محدود | هدف با فراوانی کم، نمونه های محدود | هدف با فراوانی بسیار کم، نمونه های گرانبها |
| حساسیت تشخیص | سطح پیکوگرام متوسط | سطح پیکوگرام پایین | سطح فمتوگرام متوسط | سطح فمتوگرام پایین |
| مدت زمان سیگنال | < 2 ساعت | < 12 ساعت | < 24 ساعت | < 8 ساعت |
| سیستم تشخیص قابل اجرا | همه معرف ها برای فیلم های اشعه ایکس، دستگاه های تصویربرداری CCD مناسب هستند | |||
| غلظت رقت آنتی بادی اولیه | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10000 | 1:1000-1:50000 | 1:5000-1:100000 |
| غلظت رقت آنتی بادی ثانویه | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10000
| 1:50000-1:250000 | 1:100000-1:500000 |
| غشای توصیه شده | غشای NC | غشاء NC یا غشاء PVDF | غشاء NC یا غشاء PVDF | غشاء NC یا غشاء PVDF |
| پایداری ذخیره سازی | دمای اتاق به مدت 1 سال | 4 درجه سانتی گراد برای 1 سال، دمای اتاق برای نیم سال | ||
| مزایا | قوی ترین سیگنال در بین همان سطح حساسیت | بالاترین نسبت هزینه به عملکرد، مناسب برای اکثر آزمایشات WB | طولانی ترین مدت سیگنال، بسیار مناسب برای نوردهی های متعدد | حساسیت عالی، بسیار مناسب برای تشخیص ردیابی پروتئین |
توجه: غلظت توصیه شده رقت آنتی بادی بر اساس غلظت ذخیره آنتی بادی 1 میلی گرم در میلی لیتر است.
برنامه کاربردی محصول
معرف های Yeasen ECL در مقایسه با محصولات برندهای دیگر در همان سطح، اثرات استفاده بهتری دارند.
شکل 1. مقایسه اثرات تشخیص بین Yeasen ECL Ultra-Sensitive Substrate Super و زیرلایه معادل برند T's Pico.
شکل 2. مقایسه اثرات تشخیص بین Yeasen ECL Ultra-High Sensitivity Substrate MaxiSignal و زیرلایه معادل West Femto سایر برندها.
شکل 3.مقایسه اثرات تشخیص بین Yeasen ECL Durable Substrate SuperDura و زیرلایه معادل West Dura سایر برندها.
ادبیات منتشر شده
[1] وانگ زی، لو زی، لین اس، و همکاران. سلول‌های B بیان‌کننده لوسین-tRNA-سنتاز-2 به فرار ایمنی سرطان کولورکتال کمک می‌کنند. مصونیت. 2022؛ 55 (6): 1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] وو زی، لیو دی، پان دی، و همکاران
[3] یائو جی، وو دی، ژانگ سی، و همکاران. ماکروفاژ IRX3 باعث چاقی ناشی از رژیم غذایی و التهاب متابولیک می شود. نات ایمونول. 2021؛ 22 (10): 1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF: 25.606)
[4] He X، Li J، Zhou G، و همکاران. دروازه‌سازی ریتم‌های هیپوکامپ و حافظه توسط پلاستیسیته سیناپسی در نورون‌های بازدارنده نورون. 2021؛ 109 (6): 1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
مزیت قیمت
شکل 7.مقایسه قیمت محصولات Yeasen ECL با محصولات سایر برندها در همین سطح
سوالات متداول
| مسائل پیش آمده | تجزیه و تحلیل علت | راه حل های پیشنهادی |
| فیلم دارای تصاویر معکوس است | فیلم دارای تصاویر معکوس است | فیلم دارای تصاویر معکوس است |
| فیلم دارای نوارهای قهوه ای یا زرد است | ||
| خاموش کننده فلورسانس | زمان عملیات بسیار طولانی است، غشاء به تدریج خشک می شود | از خشک شدن غشا جلوگیری کنید |
| آلودگی پوشش پلاستیکی، توسعه دهنده یا ثابت کننده | عادات تجربی خوب را در خود ایجاد کنید | |
| HRP ناکافی در سیستم واکنش | مواد دارای برچسب HRP را افزایش دهید | |
| بدون باند یا سیگنال ضعیف روی فیلم | راندمان انتقال پایین | راندمان انتقال را بهبود بخشید، از نشانگر از پیش رنگ آمیزی شده برای قضاوت استفاده کنید |
| آنتی ژن/آنتی بادی ناکافی یا ناسازگار | مقدار آنتی ژن/آنتی بادی را افزایش دهید یا آنتی ژن/آنتی بادی مناسب را انتخاب کنید | |
| مسائل مربوط به فیلم اشعه ایکس | اگر فیلم اشعه ایکس پس از قرار گرفتن در معرض کاملاً سیاه (شفاف نیست) باشد، نشان می دهد که فیلم کاملاً در معرض قرار گرفته است. از یک فیلم اشعه ایکس جدید استفاده کنید | |
| مشکلات توسعه دهنده/رفع کننده | پیش نمایش یک فیلم برای بررسی؛ اگر مشکلی وجود دارد، با توسعه دهنده/تعیین کننده جدید جایگزین کنید | |
| HRP بیش از حد در سیستم واکنش | مواد دارای برچسب HRP را رقیق کنید | |
| پس زمینه بالا | غلظت آنتی بادی اولیه و ثانویه خیلی زیاد است | غلظت آنتی بادی را کاهش دهید، زمان مسدود شدن را افزایش دهید |
| آنتی بادی ها به طور کامل تمیز نشده اند | تعداد شستشوها را افزایش دهید | |
| مسدودسازی ناقص | بهینه سازی شرایط مسدود کردن | |
| از عامل مسدود کننده اشتباه استفاده شده است | از یک عامل مسدود کننده متفاوت استفاده کنید | |
| قرارگیری بیش از حد در معرض بیماری | زمان قرار گرفتن در معرض را کاهش دهید | |
| اختصاصیت آنتی بادی ضعیف | با آنتی بادی های با کیفیت بالا جایگزین کنید | |
| HRP بیش از حد در سیستم واکنش | مواد دارای برچسب HRP را رقیق کنید | |
| گروه هایی با نقاط خالی | غلظت بالای آنتی ژن و آنتی بادی ثانویه | نمونه را رقیق کرده و ژل را دوباره اجرا کنید، یا محلول کروموژنیک مخلوط را سرد کنید و آن را روی غشا بمالید تا سریع رشد کند. |
| شکل نوار نامنظم | حباب های هوا در حین انتقال یا هیدراتاسیون ناهموار با متانول (برای غشاهای PVDF) | بهینه سازی شرایط انتقال |
| لکه های فیلم | مصالحی از مواد دارای برچسب HRP | مواد دارای برچسب HRP را با غشای 0.2μm فیلتر کنید |
| باندهای غیر اختصاصی | HRP بیش از حد در سیستم واکنش | مواد دارای برچسب HRP را رقیق کنید |
| SDS باعث اتصال غیر اختصاصی پروتئین می شود | در روش آزمایشی از SDS استفاده نکنید | |
| ویژگی آنتی بادی ضعیف | با آنتی بادی های با کیفیت بالا جایگزین کنید | |
| مسدود کردن ناکافی | زمان مسدود شدن را افزایش دهید یا از یک عامل مسدود کننده دیگر استفاده کنید |
اطلاعات سفارش
| نام محصول | شماره محصول | مشخصات |
| معرف تشخیص Super ECL | 36208ES60/76 | 100 میلی لیتر / 50 میلی لیتر |
| کیت بستر شیمی‌تابنده پیشرفته ECL | 36222ES60/76 | 100 میلی لیتر / 500 میلی لیتر |
| بستر طولانی مدت SuperSignal SuperDura | 36223ES10/60/70/76 | 10 میلی لیتر / 100 میلی لیتر / 200 میلی لیتر / 500 میلی لیتر |
| سوبسترا با حداکثر حساسیت MaxiSignal SuperSignal | 36224ES10/60/70/76 | 10 میلی لیتر / 100 میلی لیتر / 200 میلی لیتر / 500 میلی لیتر |