روش های آنزیمی در حال حاضر به طور گسترده برای دی گلیکوزیلاسیون استفاده می شود. برای گلیکان های متصل به N، آنزیم های رایج مورد استفاده شامل PNGase F، Endo H و Endo S هستند.

معرفی محصول

1. PNGase F

PNGase F موثرترین روش آنزیمی برای از بین بردن تقریباً تمام N-linked است الیگوساکاریدهای موجود در گلیکوپروتئین ها، که می توانند گلیکوپروتئین های الیگوساکاریدی با مانوز بالا، هیبرید و پیچیده را که توسط آسپاراژین متصل شده اند، جدا کنند و به طور خاص گلیکان های مرتبط با N را حذف کنند. محل برش عبارت است از: پیوند آمیدی بین داخلی ترین N-استیل گلوکوزامین (GlcNAc) و باقیمانده آسپاراژین، در حالی که آسپاراژین روی پروتئین پس از هیدرولیز آنزیمی به اسید آسپارتیک تبدیل می شود.

هنگامی که α1-6 فوکوز در هسته GlcNAc قرار دارد، PNGase F نیز می تواند برش دهد. تنها زمانی که α1-3 فوکوز در هسته GlcNAc (که در گلیکوپروتئین های گیاهی و حشرات رایج است) قرار دارد، PNGase F نمی تواند برش دهد.

شرکت ما ارائه می دهد متعارف PNGase F (Cat#20407ES)با این حال، واکنش آنزیمی معمولی PNGase F به چندین ساعت برای آزادسازی آنتی بادی N-گلیکان نیاز دارد و به دلیل ترجیح برای آزادسازی گلیکان، گلیکوزیلاسیون ناقص ممکن است منجر به نتایج مغرضانه شود و توزیع گلیکان به دست آمده ممکن است ترکیب صحیح آنتی بادی های درمانی را نشان ندهد. بنابراین، به دست آوردن یک پروفایل N-گلیکان دقیق در سریع ترین زمان ممکن برای نظارت بر گلیکوزیلاسیون در طول فرآیند تولید آنتی بادی ها و پروتئین های همجوشی آنتی بادی و سایر عوامل بیوتراپی بسیار مهم است.

سریع PNGase F (Cat#20406ES) یک معرف نوترکیب بهینه است که می تواند به سرعت و به طور کامل آنتی بادی ها، ایمونوگلوبولین ها، پروتئین های همجوشی و سایر گلیکوپروتئین ها را در چند دقیقه دیگلیکوزیله کند. این آنزیم می تواند به سرعت و بدون اولویت تمام N-گلیکان ها را حذف کند و می تواند مستقیماً برای کروماتوگرافی پایین دست یا تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی استفاده شود.

ویژگی های محصول:

سریع: گلیکوزیلاسیون کامل و سریع در چند دقیقه.

خلوص بالا: بدون پروتئاز، آلودگی گلیکوزیداز، خلوص ≥95٪.

غیر انتخابی: به سرعت و بدون اولویت تمام N-گلیکان ها را حذف کنید.

سازگاری خوب: به طور مستقیم برای کروماتوگرافی پایین دست یا تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی استفاده می شود.

2. اندو اچ

اندو اچ یک گلیکوزیداز نوترکیب است که می تواند ساختار هسته کیتوبیوز مانوز بالا و برخی از الیگوساکاریدهای نوع هیبریدی در N-گلیکوپروتئین ها را بشکند و مانوز بالا مرتبط با N را از گلیکوپروتئین ها حذف کند.

شرکت ما در حال حاضر مخمر نوترکیب Endo H (Cat#20414ES) را ارائه می دهد.

3. اندو اس

Endo S یک گلیکوزیداز بسیار اختصاصی است که می تواند قندهای مرتبط با N را بین ساختارهای هسته کیتوبیوز زنجیره های سنگین IgG نوع وحشی بشکند. فعالیت گلیکوزیداز S به شدت به پپتید وابسته نیست، بنابراین X می تواند یک پروتئین، پپتید، آسپاراژین یا اولیگوساکارید آزاد باشد. گلیکوزیداز S بدون در نظر گرفتن وجود فوکوز هسته آلفا1-6 یا N-استیل گلوکزامین بر روی سوبسترا فعال است. با این حال، در برابر الیگوساکاریدهایی که سیالیله سه یا چهار آنتنی و دسیالیله هستند غیر فعال است.

شرکت ما در حال حاضر E.coli نوترکیب Endo S (Cat#20413ES) را ارائه می دهد.

راهنمای خرید

تعداد محصول	20406ES	20407ES	20414ES	20413ES
نام محصول	سریع PNGase F	PNGase F	اندو اچ	اندو اس
منبع	بیان نوترکیب مخمر	بیان نوترکیب مخمر	بیان نوترکیب مخمر	E.coli بیان نوترکیب
فعالیت خاص	قابل اجرا نیست	100000 واحد در میلی لیتر	1000000 واحد در میلی لیتر	8000 U/mg
سایت رخ	تقریبا تمام گلیکان های مرتبط با N	تقریبا تمام گلیکان های مرتبط با N	گلیکان مانوز بالا مرتبط با N	شکاف در ساختار دی ساکارید هسته زنجیره سنگین IgG
زمان هضم	10 دقیقه	1-3 ساعت	1-3 ساعت	1 ساعت
گلیکوزیلاسیون	مناسب است	مناسب است	مناسب است	مناسب است
ساختار پروتئین	مناسب است	مناسب است	مناسب است	مناسب است

داده های تست

1. PNGase سریع F تست کنید

1: Protein MarkerCat#20350ES) 2: رقیب + بستر یا آنتی بادی 3: رقیب + بستر یا آنتی بادی

4: Yeasen Fast PNGase F + بستر یا آنتی بادی 5: Yeasen Fast PNGase F + بستر یا آنتی بادی 6: سوبسترا یا آنتی بادی 7: Yeasen Fast PNGase F 8: رقیب

2.Endo H تست

شکل 2. اندو اچ اثر برش آنزیمی (بستر)

3.Endo S Test

اطلاعات محصول

نام محصول	شماره محصول	مشخصات
سریع PNGase F (بدون گلیسرول)	20406ES20/50	20 T/50 T
PNGase F	20407ES01/02	15000 U / 75000 U
اندو اچ	20414ES92/97	10000 U / 50000 U
اندو اس	20413ES80/90	1000 U/5 x 1000 U