برای ارائه گزینه های درمانی بیشتر برای بیماران دیابتی، برخی از داروهای دیابت جدید در اوایل قرن بیست و یکم ظاهر شدند، مانند آنالوگ های پپتید-1 شبه گلوکاگون (GLP-1). سماگلوتاید، به عنوان یکی از داروهای نماینده آنالوگ های GLP-1، در مطالعات کارآزمایی بالینی متعدد ثابت شده است که به طور موثر قند خون را هنگامی که با داروهای مختلف کاهنده قند خون ترکیب می شود، کنترل می کند و می تواند به کاهش وزن، کاهش فشار سیستولیک و بهبود عملکرد سلول های β پانکراس کمک کند. فروش سه فرمول آن (تزریق هیپوگلیسمی Ozempic، داروی خوراکی کاهنده قند خون Rybelsus، و تزریق کاهش وزن Wegovy) در سال 2023 از 20 میلیارد دلار فراتر رفت. به دلیل عملکرد فوق العاده آن در کاهش قند خون و کاهش وزن، صنعت انتظار دارد Semaglutide برای مدتی شتاب فروش قوی خود را حفظ کند و شرکت های زیادی را برای رقابت برای چیدمان جذب کند!

ساختار زنجیره اصلی سماگلوتاید یک پلی پپتید متوسط ​​29 اسید آمینه Arg34GLP-1 (9-37) یا یک پلی پپتید متوسط ​​27 اسید آمینه Arg34GLP-1 (11-37) است. تولید و ساخت این پلی پپتید میانی عمدتاً شامل روش‌های سنتز شیمیایی و آماده‌سازی زیستی است. در مقایسه با سنتز شیمیایی، آماده‌سازی زیستی از گلوگاه ظرفیت عبور کرده و برای تولید مداوم در مقیاس بزرگ مناسب‌تر است، که می‌تواند هزینه‌های تولید را بیشتر کاهش دهد و مزایای اقتصادی قابل توجهی به همراه داشته باشد.

جدول 1. نمونه هایی از روش های آماده سازی زیستی برای پلی پپتیدهای واسطه سماگلوتید

	روش آماده سازی زیستی (مثال 1)	روش آماده سازی زیستی (مثال 2)
سنتز ژن	سنتز یک توالی پروتئین فیوژن، از جمله یک پپتید همجوشی، محل برش انتروکیناز، و توالی مولکول اصلی هدف	سنتز یک توالی بیان پشت سر هم با توالی ژن GLP-1 (9-37)
ساخت و ساز باکتری های مهندسی	برای ساخت باکتری های مهندسی شده نوترکیب به باکتری E. coli وارد شود	برای ساخت باکتری های مهندسی شده نوترکیب به E. coli وارد شود
بیان پروتئین فیوژن	با بهینه سازی توالی پپتیدی فیوژن، تغییر نقطه ایزوالکتریک و آب دوستی پروتئین و غیره، بیان پروتئین فیوژن به طور موثر افزایش می یابد.	پس از القای تخمیر با چگالی بالا، یک پروتئین بدن شامل بیان پشت سر هم که GLP-1 (9-37) را بیان می‌کند، به دست می‌آید و تا کردن مجدد یک پروتئین محلول ایجاد می‌کند.
کسب پپتید متوسط	پس از اینکه پروتئین فیوژن تحت برش انتروکیناز، خالص سازی و مراحل دیگر قرار گرفت، می توان پلی پپتید میانی سماگلوتید Arg34GLP-1 (9-37) را به دست آورد.	پروتئین محلول را می توان پس از انجام برش آنزیمی دو مرحله ای با آنزیم Kex2 و کربوکسی پپتیداز B و مراحل خالص سازی برای به دست آوردن پلی پپتید میانی سماگلوتید GLP-1 (9-37) به دست آورد.

انتروکیناز یا آنزیم Kex2 همراه با کربوکسی پپتیداز B یک آنزیم کلیدی برای زنجیره پپتیدی اصلی سماگلوتاید (روش تهیه زیستی) است و اثر برش آنزیم و هزینه آن برای تولید بسیار مهم است.Yisheng Biology متعهد به ارائه مواد خام آنزیمی پایدار برای شرکت‌های دارویی، ارائه آنزیم‌های با کیفیت بالا و استانداردهای کنترل کیفیت کامل برای کمک به مشتریان در بهبود ظرفیت تولید و ثبات دسته‌ای، کاهش هزینه‌ها و ورود سریع است. بازار

Yeasen محلول کلی سماگلوتاید

1.انتروکیناز نوترکیب

انتروکیناز نوترکیب (rEK) یک زیرواحد زنجیره سبک انتروکیناز روده گاوی با خلوص بالا است، که دارای همان فعالیت آنزیم برشی خاص به عنوان انتروکینازی استخراج شده طبیعی است، با یک محل برش Asp-Asp-Asp-Asp-Lys، قادر به حذف پروتئین فیوژن واقع در انتهای N- انتهایی برای حذف پروتئین های غیرضروری انتخاب شده و پروتئین ترم غیرضروری است. همجوشی سطح پایینی از برش نامنظم بر روی باقی مانده ها دارد.

Yisheng در حال حاضر انتروکینازهای نوترکیب را از منابع مختلف، درجات مختلف، و چه با برچسب های خود یا نه برای مشتریان ارائه می دهد.

نوترکیب Yeasen گاو انتروکیناز، هیس، بیان شده در مخمر، یک انتروکیناز گاوی با خلوص بالا، فعالیت بالا و بسیار خاص است که توسط ترشح Pichia pastoris بیان می شود. این می تواند به طور موثر پروتئین های همجوشی را در محدوده pH وسیع (4.5-9.5) و محدوده دمایی وسیعی از بین ببرد و همچنان تحت مواد شوینده و دناتورانت های مختلف فعالیت جزئی دارد. این محصول دارای تگ His می باشد که به راحتی از طریق Ni حذف می شود²⁺ ستون میل ترکیبی پس از واکنش برش، فرآیند تصفیه بعدی را تا حد زیادی ساده می کند.

ویژگی ها

ویژگی بالا: یک پروتئاز خاص که انتهای کربوکسیل لیزین حاوی چهار اسید آسپارتیک را برش می دهد: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys.

خلوص بالا: بدون پروتئازهای دیگر، بدون برش غیر اختصاصی.

بدون منشا حیوانی: تولید نوترکیب، عدم آلودگی ویروسی برون زا، عدم استفاده از مواد اولیه حیوانی در فرآیند تولید؛

کیفیت پایدار: تولید دسته ای می تواند تولید دسته ای پایدار و مستمر را تضمین کند. بدون تفاوت دسته به دسته، کیفیت پایدار؛

ظرفیت کافی: تخمیر 500 لیتری می تواند 50 MU انتروکیناز به دست آورد، Yeasen دارای 5L-1500L تخمیرهای سیستمی مختلف برای برآوردن نیازهای مختلف مشتری در مراحل مختلف برای نیازهای دسته ای محصول است.

عرضه محصول درجه متفاوت: درجه R&D (20395ES)، درجه GMP (20396ES)، محصولات درجه GMP با سیستم مدیریت کیفیت ISO 13485 مطابقت دارند.

داده های تست

تست فعالیت انتروکیناز:

شکل 1. اثر برش آنزیم Yeasen انتروکیناز (20395ES) سازگار است با رقیب N

نکته: سوبسترای مثبت (20391ES) یک پروتئین ترکیبی متشکل از دو توالی پروتئینی خاص است که توسط DDDDK (محل تشخیص و برش انتروکیناز)، با وزن مولکولی کلی حدود 64.6 کیلو دالتون به هم متصل شده اند، که می تواند به طور خاص توسط انتروکیناز به دو قطعه پروتئین مستقل، با وزن مولکولی k.27D و وزن مولکولی k.6.6.6 تقسیم شود. به ترتیب. این محصول به عنوان یک سوبسترای انتروکیناز، می تواند برای تشخیص فعالیت آنزیمی نیمه کمی یا کیفی انتروکیناز نوترکیب یا طبیعی استفاده شود.

تست خلوص انتروکیناز:

توجه: مقدار نظری انتروکیناز 22.7 کیلو دالتون می باشد. با توجه به اثر گلیکوزیلاسیون پس از بیان در Pichia pastoris، SDS-PAGE نشان می دهد که وزن مولکولی پروتئین هدف حدود 40 کیلو دالتون است. به طور کلی، نوارهای گلیکوزیله دارای یک نوار کمی پراکنده به سمت بالا خواهند بود (همانطور که در شکل سمت راست نشان داده شده است). شرکت ما همچنین می‌تواند آنزیم دی‌گلیکوزیلاسیون Endo H (Cat#20414) را برای مشتریان فراهم کند تا آنها را گلیکوزیله کرده و ژل را برای اندازه‌گیری خلوص اجرا کنند (همانطور که در شکل سمت چپ نشان داده شده است).

تست ویژگی برش انتروکیناز:

شکل 3. Yeasen انتروکیناز (20395ES) برش غیر اختصاصی کمتری نسبت به رقیب وارداتی N دارد

توجه: در شرایط مشابه، Yeasen انتروکیناز (20395ES) و انتروکیناز رقیب وارداتی N برای آزمایش برش آنزیم استفاده شد. نتایج نشان می دهد که پس از خالص سازی، ناخالصی های برش غیر اختصاصی تولید شده توسط Yeasen انتروکیناز (20395ES) به طور قابل توجهی کمتر از رقیب وارداتی N است.

تست انجماد-ذوب مکرر انتروکیناز، تست پایداری تسریع شده:

شکل 4. Yeasen انتروکیناز (20395ES) انجماد-ذوب مکرر، تست پایداری تسریع شده نشان می دهد که فعالیت آنزیم به طور قابل توجهی تغییر نکرده است.

توجه: Yeasen enterokinase (20395ES) به طور تصادفی 2 دسته را انتخاب کرد، 10 بار انجماد و ذوب تکرار شد، 20 بار، فعالیت آنزیم به طور قابل توجهی نسبت به فعالیت اولیه آنزیم تغییر نکرد.

نگهداری در دمای 25 درجه سانتی گراد به مدت 7، 16، 32 روز، 37 درجه سانتی گراد به مدت 7، 14 روز، فعالیت آنزیم به طور قابل توجهی نسبت به فعالیت اولیه آنزیم تغییر نکرد.

2. آنزیم Kex2 نوترکیب، کربوکسی پپتیداز B

جدول 2. راهنمای انتخاب محصول آنزیم نوترکیب Yeasen Kex2، کربوکسی پپتیداز B

شماره محصول	20418ES	20417ES
محصول نام	پروتئاز Kex2 نوترکیب، بیان شده در مخمر	CPB نوترکیب، بیان شده در E.coli
درجه محصول	درجه GMP	درجه GMP
منبع	بیان نوترکیب از Pichia pastoris	بیان نوترکیب از E. coli
فعالیت	≥10.0 واحد در میلی گرم حرفه ای	≥170 واحد USP/mg pro
سایت رخ	به طور خاص پیوندهای پپتیدی را در انتهای اسید کربوکسیلیک اسیدهای آمینه دوبازیک مانند Arg-Arg، Lys-Arg می شناسد و می شکافد.	به طور خاص پروتئین ها را در سمت آمینو ترمینال اسیدهای آمینه پایه (لیزین، آرژنین، هیستیدین) در انتهای C هیدرولیز می کند.
برنامه کاربردی محصول	1. فرآیند برش آنزیمی در تولید داروی پپتیدی 2. هضم آنزیمی پروتئین ها و نقشه برداری پپتیدی، توالی یابی و غیره.	1. تولید انسولین نوترکیب و آنالوگ های آن. 2.تعیین اسیدهای آمینه در انتهای C پروتئین ها. 3. حذف برچسب های هیستیدین در انتهای C پروتئین ها. 4. تولید سایر مواد پپتیدی نوترکیب. 5. سنتز آنزیمی برخی از ترکیبات خاص.

آنزیم Kex2 همراه با کربوکسی پپتیداز B: الزامات فرآیند بیان پشت سر هم، بازده بالا واسطه سماگلوتید پس از برش آنزیم

Yسهولت پایه تولید آنزیم درجه GMP

پایگاه تولید آنزیم مولکولی بسیار تمیز ISO - UCF.MEمجهز به تجهیزات تصفیه صنعتی و تجزیه و تحلیل فیزیکوشیمیایی AKTA، واحدهای تخمیر با چگالی بالا صد لیتری، کارگاه های تمیز استاندارد ده هزار درجه، و خطوط تولید خودکار. دارای سیستم های تخمیر و تصفیه با مشخصات مختلف، از جمله 5L، 10L، 30L، 100L، 500L، و 1500L، با قابلیت افزایش تولید از 5L به 1500L در زمینه صنعتی سازی آنزیم های مولکولی، به طور کامل پاسخگوی نیازهای اصلی مواد اولیه در مراحل مختلف توسعه آنزیم ها و نیازهای اولیه آنزیم های پایین است. مقیاس و تولید در مقیاس بزرگ.

Yeasen دارای یک تیم تحقیق و توسعه قوی و پایه تولید آنزیم پیشرفته است که به طور مداوم کیفیت و ظرفیت آنزیم‌های کلیدی را برای تولید سماگلوتید (انتروکیناز نوترکیب) از طریق نوآوری و بهینه‌سازی مداوم تکنولوژیکی بهبود می‌بخشد و قیمت‌گذاری گرادیان را برای مشخصات مختلف برای پاسخگویی به نیازهای مختلف مشتریان در مراحل مختلف تولید ارائه می‌دهد.

اطلاعات محصول تبلیغاتی

نام محصول	شماره محصول	مشخصات	لیست قیمت ($)	تبلیغاتی قیمت ($)
انتروکیناز گاوی نوترکیب، His، بیان شده در مخمر	20395ES60/76/90/ 92/94	100 U/500 U/ 5000 U/ 100 KU/ 1 MU (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ 19600

اطلاعات مربوط به محصول

نام محصول	شماره محصول	مشخصات
پروتئین کنترل برش (انتروکیناز)	20391ES03/11	1 میلی گرم / 4 میلی گرم
پروتئاز Kex2 نوترکیب، بیان شده در مخمر	20418ES60	100 میکروگرم
CPB نوترکیب، بیان شده در E.coli	20417ES03/10	1 میلی گرم / 10 میلی گرم
اندو اچ	20414ES92/97	10000 U/50000 U