Artritis Reumatoid (RA) adalah penyakit radang sendi kronis yang ditandai dengan sinovitis persisten, peradangan sistemik, dan erosi tulang dan tulang rawan, yang pada akhirnya dapat menyebabkan ankilosis dan deformitas sendi. Model hewan RA banyak digunakan untuk mempelajari patogenesis dan metode terapi. Berbagai model hewan telah dibuat untuk mempelajari etiologi RA, patogenesis, faktor-faktor yang memengaruhi, dan penelitian target terapi baru serta evaluasi terapi baru.

Model hewan RA secara garis besar dapat dibagi menjadi dua kategori: model yang diinduksi dan model transgenik. Model yang diinduksi secara umum meliputi Artritis yang Diinduksi Kolagen (CIA) dan Artritis yang Diinduksi Adjuvan (AA), sedangkan model tikus transgenik meliputi model transgenik TNF-α manusia, dll.

Adjuvan Freund, yang ditemukan oleh Jules Freund pada tahun 1940-an, adalah emulsi antigen minyak dalam air yang dibuat dengan mencampur larutan antigen berair dengan agen minyak dan menambahkan pengemulsi. Adjuvan ini adalah adjuvan yang paling umum digunakan dalam percobaan hewan.

Adjuvan Freund dibagi menjadi Adjuvan Freund Lengkap (CFA) yang mengandung Mycobacterium tuberculosis dan Adjuvan Freund Tidak Lengkap (IFA) tanpa Mycobacterium tuberculosis. Keduanya terutama digunakan untuk menginduksi model Artritis yang Diinduksi Kolagen (CIA) dan Artritis yang Diinduksi Adjuvan (AA) pada tikus.

Gambar 1. Artritis reumatoid pada manusia

Gambar 2. Artritis reumatoid pada tikus

1 Artritis yang Diinduksi Kolagen (CIA) (hanya untuk referensi)

1.1 Model Tikus

Model CIA merupakan salah satu model tikus RA yang paling banyak digunakan. Imunisasi hewan dengan kolagen tipe II heterolog dapat memicu respons autoimun terhadap kolagen tipe II pada tulang rawan sendi, dengan manifestasi klinis artritis perifer poliartikular.

Metode Konstruksi Model: Kolagen tipe II sapi (CII) dilarutkan dalam asam asetat glasial pada suhu 4°C semalaman. Kemudian, Mycobacterium tuberculosis (BCG) yang telah dimatikan dengan panas ditempatkan dalam parafin cair untuk menyiapkan Complete Freund's Adjuvant (CFA). Keduanya dicampur dan diemulsi untuk menyiapkan emulsi kolagen tipe II. Emulsi ini disuntikkan secara subkutan di pangkal ekor tikus sebanyak 0,1-0,2 mL untuk menginduksi peradangan. Pada hari ke-21 setelah imunisasi awal, suntikan penguat 0,1-0,2 mL emulsi kolagen tipe II diberikan secara intraperitoneal. Setelah imunisasi pertama, tikus akan mengalami reaksi peradangan lokal yang sembuh dalam waktu sekitar seminggu; setelah adjuvant, tikus akan mengalami pembengkakan sendi mulai dari hari ke-24, berlanjut dari kaki belakang ke kaki depan dan kemudian ke ekor.

1.2 Model Tikus

Metode Pembuatan Model: Kolagen tipe II sapi (CII) dicampur dengan Incomplete Freund's Adjuvant (IFA) dalam volume yang sama dan diemulsi. Pada hari pertama, tikus disuntik secara intradermal di beberapa tempat, dan seminggu kemudian, mereka menerima suntikan intraperitoneal. Model diperoleh dalam waktu 3-7 hari setelah imunisasi kedua. Tujuh hari setelah sensitisasi, sendi pergelangan kaki akan sedikit bengkak dan merah, dan gejalanya akan memburuk setelah 3 minggu, dengan kemungkinan ulserasi kulit; setelah 5-6 minggu, perubahan patologis semakin memburuk, dengan tulang rawan sendi dan tulang subkondral terkikis dan hancur oleh pannus.

2 Artritis yang Diinduksi Adjuvan (AA) (hanya untuk referensi)

Model AA merupakan model RA tikus yang paling banyak digunakan, dengan dua jenis: Incomplete Freund's Adjuvant (IFA) dan Complete Freund's Adjuvant (CFA).

Metode Konstruksi Model: Tikus disuntik secara intradermal untuk menginduksi peradangan.Model tersebut umumnya menunjukkan gejala peradangan berkelanjutan 10-20 hari setelah induksi, dan mencapai puncaknya sekitar 20 hari. Peradangan terutama terjadi pada sendi pergelangan kaki, yang dapat memengaruhi telapak kaki dan seluruh telapak kaki. Gejala pembengkakan sendi serupa dengan gejala pasien RA klinis, tetapi fenomena disfungsi imun dapat terjadi.

3 Langkah Pemodelan Artritis yang Diinduksi Kolagen (CIA) (hanya untuk referensi)

• Kolagen tipe II sapi (CII) dilarutkan dalam larutan asam asetat glasial pada konsentrasi 2 mg/mL dan disimpan semalam pada suhu 4°C.
• Adjuvan Freund yang Tidak Lengkap dilengkapi dengan Mycobacterium tuberculosis yang dimatikan dengan panas hingga konsentrasi 2-5 mg/mL. Konsentrasi Mycobacterium tuberculosis dalam Adjuvan Freund Lengkap 60718ES yang disediakan oleh Yisheng Biology kurang dari 10 mg/mL.
• Larutan asam asetat kolagen tipe II sapi dicampur dengan Complete Freund's Adjuvant dalam volume yang sama dan diemulsi.
• Setiap tikus percobaan diberikan 4-6 suntikan subkutan di punggung, totalnya 0,1-0,2 mL.
• Tiga minggu kemudian, Incomplete Freund's Adjuvant dicampur dengan larutan asam asetat kolagen tipe II sapi dalam volume yang sama dan diemulsi, dan setiap tikus diberikan 3-5 suntikan subkutan di pangkal ekor, totalnya 0,1-0,2 mL.

4 Langkah Pemodelan Artritis yang Diinduksi Adjuvan (AA) (hanya untuk referensi)

• Siapkan reagen yang relevan, perhatikan pengaturan kelompok eksperimen dan kontrol.
• Pengamatan dan pencatatan: Umumnya, lebih dari 80% tikus menunjukkan gejala radang sendi 7-12 hari setelah imunisasi kedua. Gejala klinis dinilai berdasarkan kemerahan dan aktivitas sendi tikus, dan pengamatan dicatat sebelum percobaan dan pada hari ke-3, ke-5, ke-7, dan ke-12 setelah percobaan, dengan kriteria penilaian sebagai berikut:

Tabel 1 Kriteria Penilaian

Sinti	Sgejala
angka 0	Aktivitasnya normal, tidak ada tanda-tanda eritema dan pembengkakan.
1	Aktivitasnya normal, hanya kulit kemerahan dan tidak ada pembengkakan berarti.
2	Aktivitas sedikit terpengaruh, cakar, bantalan kaki atau sendi lutut memerah.
3	Aktivitas terpengaruh, jari-jari kaki dan persendian sedikit berubah bentuk dan bengkak.
4	Pergerakan terhambat, jari-jari kaki dan persendian menjadi merah dan bengkak, kaku atau berubah bentuk.

• Pengukuran tikus: Gunakan pengukur volume telapak kaki tikus untuk mengukur volume sendi tungkai belakang tikus sebelum dan sesudah percobaan. Ukur volume sekitar 5 mm di bawah sendi lutut setiap kaki belakang tikus sebanyak tiga kali, catat nilai rata-ratanya, dan volumenya sebanding dengan tingkat kemerahan dan pembengkakan sendi. Deteksi dilakukan setiap tiga hari.
• Pemeriksaan patologis: Ambil tikus dari kelompok eksperimen dan kontrol, buang kulitnya, fiksasi dengan formaldehida 4% selama lebih dari 48 jam, dekalsifikasi dengan asam nitrat 5% selama 2 jam, rendam dalam xilena, dan tanam dalam parafin. Buat irisan setebal 6 mm, warnai dengan HE, dan amati dengan mikroskop optik konvensional untuk menetapkan standar penilaian diagnosis patologis.

5 Gambar kasus eksperimental (dikutip dari literatur)