Perkenalan
Kit Uji Gen Pelapor Luciferase, sebagai alat inti yang sangat diperlukan dalam pengembangan obat, memainkan peran penting dalam proses utama seperti penyaringan berthroughput tinggi, evaluasi efikasi, dan validasi target karena kemampuannya untuk memantau ekspresi gen dan transduksi sinyal secara real-time. Penerapan teknologi ini telah meningkatkan efisiensi penyaringan dan evaluasi obat secara signifikan, sehingga mempercepat penemuan dan pengembangan obat baru.
Prinsip Deteksi Gen Reporter Luciferase
Teknologi deteksi gen pelapor luciferase memungkinkan analisis kuantitatif aktivitas luciferase kunang-kunang dengan mengkatalisis oksidasi luciferin menjadi oksilusiferin dan menghasilkan bioluminesensi. Teknologi ini memiliki nilai aplikasi yang signifikan dalam bidang validasi gen target miRNA dan regulasi aktivitas transkripsi promotor. Dengan memasukkan elemen pengatur gen target di hulu dan hilir gen luciferase untuk membangun plasmid pelapor luciferase, sel dapat ditransfeksi dan mengalami stimulasi atau pengobatan yang sesuai. Selanjutnya, dengan melisiskan sel dan mengukur aktivitas luciferase, perubahan aktivitas elemen pengatur dalam kondisi stimulasi yang berbeda dapat dinilai, sehingga memperoleh pemahaman yang lebih dalam tentang mekanisme pengaturan gen. ekspresi.
Perbedaan antara aplikasi deteksi luciferase tunggal dan ganda
Pengujian gen reporter terutama dibagi menjadi pengujian gen reporter luciferase tunggal dan pengujian gen reporter luciferase ganda. Dalam aplikasi tertentu, bagaimana Anda dapat menentukan apakah eksperimen menggunakan sistem deteksi luciferase tunggal atau luciferase ganda? Mari kita lihat perbedaannya.
Sistem Uji Reporter Luciferase Tunggal
Jumlah Gen Reporter: Satu gen pelapor luciferase kunang-kunang;
Jenis Transfeksi: Plasmid gen reporter tunggal, setelah transfeksi, pemilihan obat digunakan untuk membangun garis sel gen reporter stabil yang mengekspresikan luciferase;
Proses Deteksi: Hanya sinyal luciferase kunang-kunang yang perlu dideteksi, operasi sederhana, periode deteksi singkat, cocok untuk penyaringan obat throughput tinggi;
Analisis Skenario Aplikasi: Biasanya melalui konstruksi garis sel monoklonal yang mengekspresikan secara berlebihan dan stabil, karena tingkat ekspresi garis sel ini relatif stabil dan seragam, tanpa pengaruh variasi eksperimental akibat efisiensi transfeksi dan viabilitas sel. Pengoperasiannya sederhana, dan karena hanya sinyal firefly luciferase yang terdeteksi, analisis data menjadi lebih mudah. Ditambah dengan keunggulan waktu deteksi yang singkat, metode ini sangat cocok untuk skrining obat dengan hasil tinggi dan memenuhi kebutuhan deteksi sampel skala besar.
Sistem Deteksi Gen Reporter Luciferase Ganda
Jumlah Gen yang Dilaporkan: Gen reporter ganda luciferase kunang-kunang dan luciferase Renilla;
Jenis Transfeksi: Ko-transfeksi dua plasmid gen reporter, terutama melalui transfeksi sementara;
Proses Deteksi: Pertama-tama perlu dideteksi sinyal kunang-kunang dan kemudian sinyal Renilla, dan rasio keduanya (Kunang-kunang/Renilla) digunakan untuk kalkulasi data akhir;
Analisis Skenario Aplikasi: Umumnya melalui transfeksi sementara, dengan ko-transfeksi plasmid yang mengandung gen Renilla luciferase sebagai referensi internal, yang menyediakan tolok ukur untuk eksperimen, sehingga mengurangi gangguan faktor eksternal seperti viabilitas sel dan efisiensi transfeksi. Melalui perhitungan rasio, dimungkinkan untuk mengoreksi variasi dalam jumlah sel, efisiensi transfeksi, dan aktivitas sel, sehingga meningkatkan akurasi hasil eksperimen. Ini merupakan alat penting dalam bidang regulasi ekspresi gen, jalur transduksi sinyal, dan skrining obat.
seri produk
| nama Produk | Bio-Satu Langkah | Tetap-Satu Langkah | Cerah-Satu Langkah |
| Kode Produk | |||
| Skenario Aplikasi dan Karakteristik | Kit ini menghasilkan keseimbangan relatif antara intensitas dan stabilitas sinyal. Kit ini mempertahankan intensitas sinyal yang relatif tinggi sekaligus menjaga intensitas sinyal relatif stabil selama periode waktu tertentu. | Waktu paruhnya dapat bertahan lebih dari 5 jam. Terutama dalam 2 jam pertama, perubahan nilai luminesensinya minimal. Cocok untuk pengujian pelat ultra-high throughput atau 384-well. | Sensitivitas tinggi dan intensitas sinyal tinggi. Cocok untuk eksperimen yang memerlukan sensitivitas tinggi. |
| Waktu Paruh Sinyal | 60 menit | 5 jam | 30 menit |
| Karakteristik Operasional | Satu Langkah | Satu Langkah | Satu Langkah |
Keunggulan Produk
Waktu paruh sinyal panjang: Waktu paruh sinyal dapat mencapai hingga 5 jam, memenuhi kebutuhan eksperimen berthroughput tinggi dan menghindari perbedaan sinyal yang disebabkan oleh perbedaan waktu antara sumur pertama dan terakhir akibat banyaknya sampel, sehingga memastikan hasil yang lebih stabil dan andal.
Sinyal fluoresensi kuat: Nilai sinyal dapat mencapai 8 kali lipat, menyediakan jendela deteksi yang besar dan dukungan data yang kuat untuk penyaringan obat dini dan evaluasi kemanjuran.
Pengoperasian yang mudah: Operasi satu langkah menghindari prosedur eksperimen yang rumit. Cukup tambahkan reagen deteksi dan tunggu selama 5 menit sebelum menyalakan mesin untuk deteksi.
Beberapa pilihan: Menurut skenario aplikasi yang berbeda, ada 3 produk berbeda yang tersedia, yang dapat dipilih berdasarkan persyaratan eksperimental untuk nilai sinyal dan stabilitas sinyal.
Data Produk
01 Perbandingan Kinerja untuk
Verifikasi tiga jenis Kit Pengujian dilakukan pada lini sel yang mengekspresikan firefly luciferase secara stabil, dan hasilnya menunjukkan bahwa produk Bright-One Step memiliki nilai sinyal yang lebih tinggi; produk Steady-One Step memiliki waktu paruh sinyal yang lebih panjang dan sinyal yang lebih stabil; produk Bio-One Step tidak hanya memiliki nilai sinyal yang tinggi tetapi juga mempertahankan waktu paruh sinyal yang lebih lama.
Gambar 1. Perbandingan Kinerja untuk Berbagai Jenis
tanggal 02
Saat menggunakan
Gambar 2. Perbandingan
tanggal 03
Gambar 3.Uji Beku-Cair Berulang
Prosedur Operasional
01 Transfeksi Sel
Tambahkan reagen langsung ke suspensi sel, lalu pipet ke atas dan ke bawah 5 kali untuk memastikan pencampuran menyeluruh, tunggu selama 5 menit agar sel mengalami lisis lengkap.
02 Pemuatan Sampel
Pipet 100 μL campuran (reagen deteksi + media kultur sel) ke dalam setiap sumur pelat deteksi.
03 Deteksi Fluoresensi
Atur parameter pada pembaca plat. Letakkan plat deteksi ke dalam pembaca plat, getarkan selama beberapa detik, lalu lanjutkan dengan deteksi.
Daftar Produk
| Kategori Produk
| Nama Produk | Kode Produk | Spesifikasi Produk |
| Kit Uji Gen Reporter Luciferase | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Kit Uji Gen Reporter Luciferase Ganda
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |