Saat menggunakan enzim tradisional dengan ketepatan tinggi untuk PCR, tidak dapat dihindari untuk menghadapi beberapa masalah pelik. Misalnya, ketepatannya mungkin tidak memadai, yang menyebabkan mutasi atau penghapusan pada basa target bahkan setelah mengurutkan fragmen yang diamplifikasi. Waktu amplifikasi juga relatif lama; terkadang, mengamplifikasi fragmen 5kb dapat memakan waktu hampir 2 jam. Sekarang, XiaoYi memperkenalkan PCR cepat dengan ketepatan tinggi untuk menyelesaikan masalah Anda! -- Hieff Canace™ Campuran Master PCR AdvanceFast (Premix PCR Fidelitas Tinggi Ultra-cepat).
Itu 2× Hieff Canace™ Campuran Master PCR AdvanceFast (Dengan Pewarna) mengandung indikator elektroforesis yang telah ditambahkan sebelumnya, yang memungkinkan produk PCR untuk langsung digunakan untuk elektroforesis. Produk yang diperkuat memiliki ujung yang tumpul. Campuran enzim dengan ketelitian tinggi ini menawarkan keuntungan karena cepat, sederhana, sangat sensitif, sangat spesifik, dan stabil. Dalam sistem reaksi, hanya primer dan templat yang perlu ditambahkan. Selain itu, produk ini juga mengandung pelindung khusus, yang memastikan bahwa premix PCR dengan ketelitian tinggi mempertahankan aktivitas yang stabil bahkan setelah pembekuan dan pencairan berulang kali.
Fitur Produk
- Tinggi Kesetiaan: Rendah ketidakcocokan kecepatan, dengan A basis ketidakcocokan perbandingan dari 231/300.000 di dalam tinggi Bahasa Inggris rentan mutasi urutan;
- Cepat Amplifikasi Kecepatan: Perpanjangan kecepatan sebagai cepat sebagai 5 detik per kb;
- Lebar Penerapan: Mampu dari penutup gen dengan 20-80% Bahasa Inggris isi, menoleransi mouse lisat Dan 20% darah;
- Bagus Stabilitas: Bisa menjadi tersimpan pada 37 derajat celcius untuk 7 hari tanpa mempengaruhi produk pertunjukan;
- Cepat Dan Nyaman: Hanya menambahkan primer Dan templat untuk amplifikasi, datang dengan memuat pewarna untuk langsung elektroforesis.
Demonstrasi Kinerja Produk
Kesetiaan Tinggi, Tingkat Ketidakcocokan Rendah
Dengan menggunakan genom spesies yang berbeda sebagai templat, enam fragmen kaya GC yang sangat rentan terhadap mutasi/kehilangan basa dipilih untuk amplifikasi. Produk PCR masing-masing dikloning ke dalam vektor, dan 100 klon tunggal untuk setiap sekuens dipilih untuk pengurutan guna mengonfirmasi terjadinya ketidakcocokan/mutasi basa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa campuran induk PCR cepat dengan ketelitian tinggi (10164ES) memiliki tingkat ketidakcocokan/mutasi basa yang lebih unggul dibandingkan dengan reagen merek domestik dan internasional.
Waktu perpanjangan bisa mencapai 5 detik/kb
Dengan menggunakan premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) dan Produk T, fragmen dengan panjang berbeda (0,4-10 kb) diamplifikasi dari 100 ng cetakan DNA genom manusia pada laju ekstensi 5 detik/kb, dengan waktu ekstensi yang dibutuhkan 5 detik/kb. Hasil penelitian menunjukkan bahwa premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) dapat mengamplifikasi fragmen dalam 10 kb pada laju ekstensi 5 detik/kb.
Dapat memperkuat fragmen gen dengan kandungan GC yang berbeda
Menggunakan premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) untuk mengamplifikasi fragmen gen dengan kandungan GC 23-76% dari templat DNA genomik manusia, dengan waktu ekstensi ditetapkan pada 5 detik/kb. Hasil penelitian menunjukkan bahwa produk tersebut memiliki spesifisitas amplifikasi yang baik dan mampu mengamplifikasi fragmen dengan kandungan GC yang berbeda.
Mampu mengamplifikasi fragmen gen dengan kandungan GC yang bervariasi
Menggunakan campuran enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) untuk mengamplifikasi fragmen dengan panjang yang bervariasi dari sampel yang berbeda, dengan waktu ekstensi yang ditetapkan pada 5-10 detik per kilobase. Hasilnya menunjukkan bahwa produk ini menunjukkan spesifisitas amplifikasi yang sangat baik dan kompatibel dengan amplifikasi fragmen yang berbeda dari berbagai templat.
Catatan: 1. DNA genomik tikus 1 kb; 2. DNA genomik tikus 2 kb; 3. DNA genomik tikus 6 kb; 4. DNA genomik jagung 1 kb; 5. DNA genomik padi 2 kb-A; 6. DNA genomik padi 2 kb-B; 7. cDNA sel manusia 293 1 kb; 8. cDNA sel manusia 293 2 kb; 9. cDNA sel manusia 293 3 kb; 10. cDNA sel manusia 293 12 kb; 11. Kaldu E. coli 8 kb; 12. Kaldu E. coli 16 kb; 13. DNA genomik padi 10 kb-A; 14. DNA genomik padi 10 kb-B; 15. DNA genomik padi 10 kb-C; 16. DNA genomik padi 20 kb-A; 17. DNA genom padi 20 kb-B; 18. Amplifikasi langsung darah manusia 3 kb.
Tingkat deteksi amplifikasi templat yang tinggi di berbagai spesies
Dengan menggunakan premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES), berbagai fragmen kandungan GC yang berkisar antara 0,5-10 kb pada Arabidopsis, rapeseed, dan kentang diamplifikasi, dengan waktu ekstensi 5 detik/kb. Hasil penelitian menunjukkan bahwa premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) dapat memastikan keberhasilan amplifikasi.
Dengan menggunakan premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES), urutan acak (dipilih secara acak) dari Arabidopsis, rapeseed, lalat buah, Caenorhabditis elegans, dan ikan zebra, dengan ukuran fragmen berkisar antara 0,5-10 kb dan mencakup 20-80% konten GC, diperkuat. Waktu ekstensi ditetapkan pada 5 detik/kb. Hasil penelitian menunjukkan bahwa premix enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) memiliki tingkat deteksi yang tinggi.
Stabilitas yang baik
Menggunakan campuran enzim fidelitas tinggi yang cepat (10164ES) yang telah dipercepat panasnya dan disimpan pada suhu 37℃ selama 3 hari dan 7 hari, untuk mengamplifikasi fragmen DNA 3 kb dan 5 kb dari 100 ng DNA genom manusia, dengan waktu ekstensi yang ditetapkan pada 5 detik/kb. Hasil menunjukkan bahwa produk tersebut memiliki stabilitas yang baik.
Umpan Balik Uji Coba Pelanggan
Hewan DNA-120bp-50%GC
Evaluasi pelanggan: Proses PCR cepat, pita sesuai, dan dapat langsung dimuat ke elektroforesis gel agarosa. Pita merek N bias ke atas, yang mungkin disebabkan oleh pengaruh buffernya sendiri, dan karena tidak ada buffer pemuatan yang ditambahkan, produk ini dapat menggantikan enzim dengan fidelitas tinggi dalam protokol eksperimen saya saat ini.
Tanaman cDNA-729bp-45,13%GC
Evaluasi pelanggan: Dibandingkan dengan merek T, pita kloning lebih jelas dan lebih seragam, dan seluruh proses PCR lebih cepat. Tidak perlu menambahkan pewarna tambahan saat menjalankan gel, yang sangat praktis dan menghemat waktu.
Mikroba DNA-1158, 1953bp-58,8%, 52,9%GC
Evaluasi pelanggan: Dibandingkan dengan merek V, efeknya sebanding, tetapi secara pribadi, saya merasa lebih baik.
Tanaman cDNA-2000bp-40%GC
Evaluasi pelanggan: Efeknya sangat bagus, dan stripnya bening.
Panduan Pemilihan PCR Fidelitas Tinggi
| Penempatan Produk | Nama Produk | Kucing# |
| 5s/kb, memastikan kesetiaan dan kecepatan (Dengan Pewarna) | 2× Hieff Canace™ Campuran Master PCR AdvanceFast (Dengan Pewarna) | 10164ES |
| 5s/kb, memastikan kesetiaan dan kecepatan (Tanpa Pewarna) | 2× Hieff Canace™ Campuran Master PCR AdvanceFast | 10163ES |
| 83×Taq, tingkat deteksi tinggi (Dengan Pewarna) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (Dengan Pewarna) | 10154ES |
| 83×Taq enzim tunggal + Buffer terpisah | 10153ES |