Transkripsi balik adalah proses mengubah RNA menjadi DNA komplementer (cDNA), yang dimediasi oleh enzim reverse transcriptase. Dengan adanya primer annealing, reverse transcriptase pertama-tama mengikat ke cetakan RNA. Aktivitas DNA polimerase yang bergantung pada RNA dari reverse transcriptase mensintesis cDNA dengan menggabungkan dNTP dari campuran reaksi. Proses ini menghasilkan pembentukan untai hibrida cDNA:RNA, yang dikenal sebagai sintesis cDNA untai pertama.
Reverse transcriptase Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) merupakan salah satu reverse transcriptase yang umum digunakan dalam prosedur laboratorium biologi molekuler. Untuk mencapai efisiensi reverse transcriptase yang lebih tinggi, stabilitas termal yang lebih baik, dan peningkatan laju sintesis cDNA, reverse transcriptase asli sering kali direkayasa secara genetik. Saat ini, reagen reverse transcriptase yang tersedia di pasaran biasanya memerlukan waktu reaksi berkisar antara 15 hingga 30 menit, yang tergolong lama. Jika jumlah sampel reaksi besar, waktu yang dihabiskan secara keseluruhan dapat meningkat drastis. Produk seri reverse transcription 5 menit YESSEN yang ada dapat menyelesaikan proses reverse transcription hanya dalam waktu 5 menit, sehingga menghemat waktu dan sangat efisien.
| Pproduk Pposisi | Nama Produk | Kucing# |
| Premix Transkripsi Balik Cepat, Efisien, dan Berhasil Tinggi | Hifair™ Sintesis cDNA untai pertama AdvanceFast SuperMix untuk qPCR | 11156ES |
| Premix Transkripsi Balik Cepat, Efisien, dan Berhasil Tinggi (dengan Penghapusan gDNA) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix untuk qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| Penyelesaian Cepat Satu Langkah Penghapusan gDNA dan Premix Transkripsi Balik | Hifair™ AdvanceFast Pencernaan RT-gDNA Satu Langkah SuperMix untuk qPCR | 11151ES |
| Kit Transkripsi Balik Cepat Pemilihan Primer Fleksibel (dengan Penghapusan gDNA) | Hifair™ Kit Sintesis cDNA Untai Pertama AdvanceFast (Tanpa Pewarna) | 11150ES |
| Kit Transkripsi Balik Cepat Pemilihan Primer Fleksibel (dengan Penghilangan gDNA dan Pewarna Pelacak) | Hifair™ Kit Sintesis cDNA Untai Pertama AdvanceFast | 11149ES |
Rekomendasi Butik Satu
Premix Transkripsi Balik Cepat, Efisien, dan Berhasil Tinggi (dengan Penghapusan gDNA) (Kat #11155ES)
Hasil transkripsi balik yang tinggi dari berbagai templat
| Mencicipi | 293T Sel | Arabidopsis thaliana | Mouse | Hati Ikan |
| 11155ES | 23.4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | Nomor telepon 21.1↓ |
| Merek A | 24.9 | 21.3 | 27.5 | 21.3 |
| Merek B | 26.1 | 20.5 | 27.1 | 23.1 |
| Merek C | 25.7 | 19.8 | 27.3 | 21.9 |
| Merek D | 24.3 | 21.3 | 28.1 | 24.5 |
Gambar. Transkripsi balik dilakukan menggunakan templat RNA dari sel 293T manusia, Arabidopsis thaliana, hati tikus, dan hati ikan. Merek A, B, C, dan D semuanya merupakan reagen transkripsi balik pencernaan dua langkah dengan waktu transkripsi balik bervariasi dari 15 hingga 20 menit. Hasil pengujian menunjukkan bahwa kit transkripsi balik 5 menit Hifair 11155ES unggul dengan hasil yang lebih tinggi dibandingkan dengan merek lain, dan nilai Ct lebih rendah.
Rekomendasi Butik Dua
Premix Pencernaan Satu Langkah & Transkripsi Terbalik dalam Waktu 5 Menit (Kategori #11151ES)
Hasil transkripsi balik yang tinggi
Gambar. Menggunakan RNA sel 293T manusia sebagai templat, tiga gen diuji secara berurutan. Merek A, B, dan C semuanya merupakan reagen penghilangan gDNA dan transkripsi balik satu langkah. Hasil pengujian menunjukkan bahwa dengan masukan 1 μg dan 10 ng Total RNA, hasil transkripsi balik dengan kit 11151ES lebih unggul daripada merek lain, dengan nilai Ct yang lebih kecil.
Gambar. Menggunakan RNA Arabidopsis thaliana sebagai cetakan, Merek A, B, dan C semuanya merupakan reagen penghilangan gDNA dan transkripsi balik satu langkah. Hasil pengujian menunjukkan bahwa dengan masukan 1 μg dan 10 ng Total RNA, hasil transkripsi balik dengan kit 11151ES lebih unggul daripada merek lain, dengan nilai Ct yang lebih kecil.
Sensitivitas yang sangat baik
Gambar. Menggunakan RNA sel 293T manusia sebagai cetakan, gen dengan kandungan 30% GC, 50% GC, 60% GC, dan 70% GC diperkuat. Total masukan RNA sebesar 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng, dan 1 μg digunakan untuk transkripsi balik yang diikuti oleh deteksi kuantitatif fluoresensi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 11151ES dapat mengakomodasi transkripsi balik untuk masukan RNA mulai dari 100 pg hingga 1 μg.
Rekomendasi Butik Ttiga
Kit Transkripsi Balik Cepat 5 Menit (Kucing #11149/11150ES)
Sensitivitas tinggi, dengan batas deteksi minimum hingga 10 pg
Gambar. Menggunakan total RNA dari sel 293T sebagai cetakan, transkripsi balik dilakukan dengan 11149ES, dan cDNA yang dihasilkan dikenai analisis kuantitatif qPCR. Hasilnya menunjukkan bahwa 11149ES dapat berhasil melakukan transkripsi balik masukan RNA mulai dari 10 pg hingga 1 μg, memastikan hasil kuantitatif yang akurat.
Kinerja amplifikasi yang baik, dengan amplifikasi terpanjang dari fragmen 14 kb
Angka.Dengan menggunakan total RNA dari sel 293T sebagai cetakan, transkripsi balik dilakukan dengan 11149ES, dan cDNA yang dihasilkan dideteksi dengan PCR. Hasilnya menunjukkan bahwa 11149ES mampu mensintesis fragmen cDNA yang panjangnya berkisar antara 1 kb hingga 14 kb, dengan PCR berikutnya memiliki beberapa skenario yang dapat diterapkan. Jika transkripsi balik langsung dari fragmen yang lebih dari 10 kb diperlukan, disarankan untuk memperpanjang waktu transkripsi balik menjadi 20-30 menit untuk memastikan perolehan fragmen akhir.
Perbandingan efisiensi transkripsi terbalik
| Jumlah Input RNA | Nilai Ct | |
| 11149ES | Merek A | |
| 1 mikrogram | 15.2 | 15.5 |
| 100 gram | 18.0 | 18.5 |
| 10 hari | 21 | 21.7 |
| 1 malam | 24.5 | 25.1 |
| 100 halaman | 29.1 | 29.7 |
| 10 halaman | 32.7 | 34.3 |
Gambar. Menggunakan total RNA dari sel 293T sebagai cetakan, transkripsi balik dilakukan dengan 11149ES dan Merek A, dengan 11149ES tidak menjalani langkah penghilangan gDNA. cDNA yang dihasilkan dikenakan analisis kuantitatif qPCR. Hasilnya menunjukkan bahwa waktu transkripsi balik untuk Merek A adalah 13 menit, sedangkan untuk 11149ES adalah 5 menit. Analisis kuantitatif dari berbagai produk mengungkapkan bahwa nilai Ct untuk 11149ES lebih kecil atau serupa dengan merek pesaing, yang menunjukkan bahwa efisiensi transkripsi balik 5 menit dari 11149ES lebih unggul atau kira-kira setara dengan Merek A.
| Jumlah Input RNA | Nilai Ct | |
| 11149ES | Merek B | |
| 1 mikrogram | 16.2 | 17.4 |
| 100 gram | 19.0 | 20.5 |
| 10 hari | 22 | 23.8 |
| 1 malam | 26 | 27.9 |
| 100 halaman | 31.4 | 33.2 |
| 10 halaman | 32.9 | 35.6 |
Angka.Dengan menggunakan total RNA dari sel 293T sebagai cetakan, transkripsi balik dilakukan dengan 11149ES dan Brand B, dengan 11149ES tidak menjalani langkah penghilangan gDNA. cDNA yang dihasilkan dikenakan analisis kuantitatif qPCR. Hasilnya menunjukkan bahwa waktu transkripsi balik untuk Brand B adalah 20 menit, sedangkan untuk 11149ES adalah 5 menit. Analisis kuantitatif dari berbagai kuantitas substrat mengungkapkan bahwa nilai Ct untuk 11149ES lebih kecil atau mirip dengan Brand B, yang menunjukkan bahwa efisiensi transkripsi balik 5 menit dari 11149ES lebih unggul atau kira-kira setara dengan Brand B.
Produk terkait yang direkomendasikan
| Metode | Pproduk Pposisi | Nama Produk | Kucing# |
| qPCR berbasis pewarna | Premix kuantitatif universal dengan spesifisitas tinggi (Berbasis pewarna) | Hieff UNICON™ qPCR SYBR Master Mix tingkat lanjut | 11185ES |
| Premix kuantitatif universal dengan sensitivitas tinggi (Berbasis pewarna) | 11184ES | ||
| Transkripsi Terbalik | Pencernaan satu langkah dan premix transkripsi balik selama 5 menit (untuk qPCR) | Hifair™ AdvanceFast Pencernaan RT-gDNA Satu Langkah SuperMix untuk qPCR | 11151ES |
| Transkripsi balik cepat 5 menit, mampu melakukan sintesis cDNA hingga 14 kb, dengan penghapusan gDNA (untuk PCR/qPCR) - Versi pelacak | Hifair™ Kit Sintesis cDNA Untai Pertama AdvanceFast | 11149ES | |
| Transkripsi balik cepat 5 menit, mampu melakukan sintesis cDNA hingga 14 kb, dengan penghapusan gDNA (untuk PCR/qPCR) | Hifair™ Kit Sintesis cDNA Untai Pertama AdvanceFast (Tanpa Pewarna) | 11150ES | |
| Premix sintesis cDNA untai pertama berkualitas tinggi, dengan penghilangan gDNA (untuk qPCR) | Hifair™ III Sintesis cDNA Untai 1 SuperMix untuk qPCR (pencerna gDNA plus) | 11141ES |