——Lebih Banyak Genotyping, Lebih Sedikit Waktu dan Lebih Sedikit Reagen
Genotyping berbasis PCR dan eksperimen lainnya sering kali memerlukan pemurnian DNA genomik dari sampel. Jika ada banyak sampel yang akan diuji, proses pemurnian DNA genomik memakan waktu, berulang, dan mahal.
PCR Cerdas: PCR Langsung
Gambar 1 Alur Kerja Amplifikasi PCR Langsung
A.Metode Langsung: Ambil sejumlah kecil sampel dan langsung tambahkan ke PCR Master Mix untuk identifikasi PCR.Keunggulan Teknis
Langsung: Tidak perlu pemurnian DNA yang memakan waktu dan mahal.
Cepat: Persiapan templat selesai dalam 10 menit, dan reaksi PCR selesai hanya dalam 30 menit.
Sederhananya: Sampel dapat dilisiskan tanpa perlu dipotong atau digiling, dan PCR Mix berada dalam bentuk yang sudah dicampur sebelumnya, sehingga mengurangi jumlah langkah pemipetan.
Penghematan: Jumlah bahan yang digunakan sedikit.
Throughput tinggi: Reaksi lisis dapat diselesaikan dalam pelat 96 sumur.
Tahan terhadap hambatan: Toleran terhadap berbagai sampel hewan dan tumbuhan.
Proses Eksperimen Kit PCR Langsung
Rangkaian produk ini menggunakan sistem lisis protease yang unik untuk melisiskan sampel. Larutan lisis dapat langsung digunakan sebagai templat dan dipasangkan dengan PCR Master Mix yang disediakan dalam kit untuk amplifikasi gen.
Gambar 2. Proses percobaan PCR langsung pada jaringan tikus
Ara.3 Proses percobaan PCR langsung pada jaringan tanaman
Tabel Pemilihan Produk PCR Langsung
| Seri Produk | Mouse Direct PCR Generasi Kedua | |||
| Nomor Produk | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Spesifikasi | 20T/50T/200T/500T | 50T/200T | 20T/50T/200T/500T | 50T/200T |
| Fitur | ||||
| Panjang Amplikon | ≤5kb | ≤1kb | ≤8kb | ≤1kb |
| Waktu Perpanjangan (s/kb) | 3-20 detik | 30 detik | ≤2 kb: 3-5 detik ≤8 kb: 10 detik | 60 detik |
| Organisme yang Berlaku | Tikus, Tikus | Tikus, Tikus | Manusia, Tikus, Kambing, Ayam, Babi, dll. | Beras, Jagung, Tembakau, Rapeseed, Gandum, Kedelai, dll. |
| Jenis Bahan/Jaringan yang Berlaku | Ekor tikus, Telinga tikus, Jari kaki (dengan otot), dan organ lainnya | Ekor tikus, Telinga tikus, Jari kaki (dengan otot), dan organ lainnya | Darah segar yang mengandung antikoagulan umum seperti EDTA, heparin, sitrat, darah yang didinginkan (beku), dan bercak darah kering komersial seperti Whatman903® dan FTA® | Daun muda, Daun tua, Bibit, Batang muda |
| Contoh Penggunaan | Jaringan: 5 mg Ekor tikus: 1-5 mm | Jaringan: 5-10 mg Ekor tikus: 1-5 mm | Darah lengkap: 0.5% - 20% Kertas Whatman® bercak darah kering: 1 mm2 | Daun: 1-10 mm Biji: 1-3 mm |
| Waktu Rilis Genom | 5-10 menit | 15 menit | 0-3 menit | 0-10 menit |
| Struktur Akhir Produk | Ujung tumpul | Ujung tumpul | Ujung tumpul | Ujung tumpul |
| Suhu Anil | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| Rentang Kliping GC | 29-70% | 30-70% | 30-75% | 40-65% |
| Aktivitas Eksonuklease 5'-3' | Ya | Ya | Ya | Ya |
| Aplikasi | ||||
| Genotipe | Ya | Ya | Ya | Ya |
| PCR Multipleks | Hingga 5x |
| Hingga 3-4x |
|
| Amplifikasi Sampel Langsung | Ya | Ya | Ya | Ya |
| Fitur Lainnya | ||||
| Indikator Elektroforesis | Tanpa warna | Biru | Tanpa warna | Biru |
| Mulai Panas | Ya | Ya | Ya | Ya |
| Campuran siap pakai/Kit | Kit (dengan Campuran) | Kit (dengan Campuran) | Kit (dengan campuran + buffer) | Kit (dengan Campuran) |
Keunggulan Produk
Taq DNA Polimerase yang dimodifikasi adalah jaminan PCR Langsung: Ia memiliki toleransi super terhadap inhibitor.
Bila sampel yang tidak dimurnikan digunakan sebagai templat, banyak komponen yang menghambat reaksi PCR yang dimasukkan. Sulit untuk mencapai hasil yang ideal, atau bahkan mustahil untuk melakukan amplifikasi PCR, dengan sistem reaksi PCR biasa dan polimerase DNA Taq. Campuran PCR dalam rangkaian kit ini adalah campuran awal yang dioptimalkan menurut formula, menggunakan Polimerase DNA Taq yang dimodifikasi, yang meningkatkan kemampuan pengikatan ke DNA templat dan memiliki toleransi yang lebih tinggi terhadap inhibitor PCR umum, sehingga memiliki kemampuan adaptasi templat yang lebih luas.
Gbr.4 Campuran PCR dalam Kit PCR Langsung mempunyai toleransi yang lebih tinggi terhadap pengotor. Jumlah templat yang sama digunakan untuk PCR dengan berbagai Campuran PCR, dan berbagai konsentrasi penghambat reaksi PCR ditambahkan ke sistem. Jumlah produk PCR dalam berbagai kondisi dibandingkan.
kamuMUDAH telah mengembangkan serangkaian produk untuk sampel yang berbeda:
- I. Jenis khusus hewan pengerat: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)
Sampel yang berlaku: Jaringan tikus (seperti ekor tikus, telinga tikus, jari kaki tikus, dll.)
- Efisiensi amplifikasi tinggi (panjang, kecepatan, kompatibilitas GC)
Gambar 5 Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus mengamplifikasi lisat dari jaringan yang berbeda. 1: Plasmid; 2: Telinga Tikus; 3: Ekor Tikus; 4: Hati. Kondisi lisis: lisis 70°C selama 10 menit, inaktivasi 95°C selama 5 menit. Fragmen target adalah 1 kb, 2 kb, 3 kb, dan 6 kb, dengan waktu ekstensi ditetapkan masing-masing 3, 5, 10, dan 20 detik/kb. M: 10510ES60 (
- Kompatibilitas templat yang luas (10189ES)
Gambar 6 Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus digunakan untuk melisiskan secara langsung (70°C selama 10 menit) dan mengamplifikasi sel manusia 293 (1), air liur (2), dan jaringan kulit kepala (3). Semua sampel menunjukkan pita target yang jelas, M: 10510ES60 (
- II. Darah Multi-spesies Tipe Universal: Kit PCR Langsung Canggih Darah (10188ES)
- Panjang amplifikasi hingga 8 kb
Gbr.7 Fragmen DNA dengan panjang yang bervariasi diamplifikasi langsung dari darah utuh manusia menggunakan Blood Advanced Direct PCR Kit. Sampel darah disimpan pada suhu -20℃ dengan EDTA sebagai antikoagulan. Konsentrasi templat darah adalah 10%, dan waktu ekstensi ditetapkan pada 10 detik/kb. M: 10510ES60 (
- Toleransi Tinggi
Gbr. 8 A: Kit PCR Langsung Canggih Darah digunakan untuk mengamplifikasi fragmen DNA 2 kb dengan kandungan GC 71% secara langsung dari darah utuh manusia yang diberi antikoagulan EDTA. Konsentrasi templat darah diatur secara gradien dari 0,5-50%, dan waktu ekstensi diatur ke 10 detik/kb. B: Kit PCR Langsung Lanjutan Darah digunakan untuk mengamplifikasi fragmen DNA 2,2 kb dengan kandungan GC 67% secara langsung dari darah utuh tikus yang diberi antikoagulan EDTA. Konsentrasi templat darah ditetapkan dari 0,5-50%, dan waktu perpanjangan adalah 10 detik/kb. M: 10510ES60 (
- III. Jenis khusus tanaman: Kit PCR Langsung Jaringan Tanaman (10187ES)
- Diverifikasi dengan berbagai jenis sampel tanaman
Gbr.9 Hasil amplifikasi langsung dari jaringan daun berbagai jenis tanaman. M: 100 bp DNA ladder. C: DNA genom murni dari tanaman terkait sebagai cetakan. 1-2: Lisat jaringan daun sebagai cetakan. Jumlah siklus: 30 siklus.
Kasus Pelanggan
- I. Identifikasi Genotipe Tikus
Sebuah perusahaan biologi di Guangzhou:
Gbr. 10 Amplifikasi ekor tikus menggunakan Mouse Direct PCR Kit (10189ES). Gen target: 500 bp; Waktu lisis: 10 menit; Sistem reaksi PCR: 25 μL, waktu ekstensi: 5 detik/kb.
- II. Amplifikasi Langsung Gen Padi
Bahasa Indonesia: XX Universitas
Gbr.11 Kit PCR Plant Direct (10187ES) digunakan untuk mengamplifikasi gen yang terkait dengan padi.
Rgembira Pproduk
| Penempatan Produk | Nama Produk | Nomor Produk | Spesifikasi Produk |
| Agarosa berkualitas tinggi | Nomor 10208ES60/76 | 100 gram/500 gram | |
| Pewarnaan Asam Nukleat (Di Bawah Sinar UV) | nomor telepon 10202ES76 | 500 mikroliter | |
| Peningkatan PCR cepat, dapat berupa PCR koloni dan cocok untuk amplifikasi templat kompleks | 2×HieffWaktu Standar Campuran Master PCR HotStart Ultra-Cepat II | Nomor telepon 10167ES03/08 | 1ml/5×1ml |