Keterangan
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Tanpa Pewarna) adalah kit transkripsi balik cepat yang dikembangkan berdasarkan Hifair™ Kit Sintesis cDNA Untai 1 III (Tanpa Pewarna), cocok untuk amplifikasi PCR dan eksperimen RT-qPCR. Dibandingkan dengan Hifair™ Kit Sintesis cDNA Untai 1 III (Tanpa Pewarna), menawarkan tingkat deteksi yang stabil, spesifisitas, dan jaminan hasil, dengan total waktu transkripsi balik yang berpotensi dikurangi hingga kurang dari 6 menit, sehingga secara signifikan memperpendek durasi eksperimen.
Kit ini mencakup gDNA Digester Mix, yang dapat menghilangkan kontaminasi DNA genomik yang tersisa dalam cetakan RNA, sehingga memastikan hasil selanjutnya yang lebih andal. Kit ini menyediakan dua jenis primer sintesis cDNA: Primer Acak N6 dan Oligo (dT)18Pengguna dapat memilih antara Random Primer N6, Oligo (dT)18, atau Gene Specific Primers sebagai primer transkripsi balik sesuai dengan kebutuhannya. Produk cDNA untai tunggal yang disintesis dapat langsung digunakan untuk reaksi PCR atau qPCR berikutnya.
Spesifikasi
| Nomor Kucing. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Ukuran | 10T/100T |
Komponen
| Komponen No. | Nama | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (Tanpa Pewarna) | 50 mikroliter | 500 μL |
| 11150-B | Campuran Pencerna 5×gDNA | 20 mikroliter | 200 mikroliter |
| 11150-C | Primer Acak (50 μmol/L) | 20 mikroliter | 200 mikroliter |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primer (50 μmol/L) | 20 mikroliter | 200 mikroliter |
| 11150-E | Air Bebas RNase | 200 mikroliter | 2×1ml |
Penyimpanan
Produk ini harus disimpan pada suhu -25~-15℃ selama 1 tahun.
Instruksi
- Jika percobaan memerlukan penghapusan sisa DNA genom
1) Pencernaan gDNA
Dalam tabung sentrifus bebas RNase, siapkan campuran berikut dan pipet perlahan untuk mencampurnya dengan baik. Inkubasi pada suhu 42℃ selama 2 menit.
| Komponen | Volume (μL) |
| Air Bebas RNase | Sampai 10 μL |
| Campuran Pencerna 5× gDNA | 2 mikroliter |
| Jumlah RNA* | 10 pg-5 μg |
| atau mRNA* | 10 halaman-500 malam |
* Disarankan agar jumlah total RNA yang dimasukkan tidak melebihi 2 μg. Jika tingkat ekspresi gen target rendah, jumlah yang dimasukkan dapat ditingkatkan hingga maksimum 5 μg total RNA.
2）Persiapan Sistem Reaksi Transkripsi Terbalik (Sistem 20 μL)
| Komponen | Volume (μL) |
| larutan reaksi dari langkah sebelumnya | 10 mikroliter |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (Tanpa Pewarna) | 5 mikroliter |
| Oligo d(T)18 Primer (50 μmol/L)** | 2 mikroliter |
| atau Primer Acak (* untuk qPCR) (50 μmol/L)** | atau 2 μL |
| Air Bebas RNase | Sampai 20 μL |
* Jumlah primer dapat disesuaikan menurut jumlah masukan templat. Jika produk transkripsi balik digunakan untuk eksperimen qPCR, Primer Acak dapat ditambahkan ke dalam sistem sesuai dengan jumlah yang disarankan.
** Sebaiknya tambahkan terlebih dahulu 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (Tanpa Pewarna), aduk rata, lalu tambahkan primer transkripsi terbalik untuk memastikan bahwa primer tidak terpengaruh oleh gDNA Digester.
3）Pengaturan Prosedur Transkripsi Terbalik
| Suhu. | Waktu |
| 55℃* | 5 menit** |
| 85℃ | 5 detik |
* Untuk templat dengan konten GC tinggi atau templat kompleks, suhu transkripsi balik dapat ditingkatkan hingga 60℃.
** Produk ini dapat mensintesis sekuens cDNA di bawah 14 kb. Jika Anda membutuhkan produk cDNA yang lebih panjang, Anda dapat memperpanjang waktu transkripsi balik dengan tepat.
- Jika percobaan tidak memerlukan penghapusan DNA genom
1）Persiapan Sistem Reaksi Transkripsi Terbalik (Sistem 20 μL)
| Komponen | Volume (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (Tanpa Pewarna) | 5 mikroliter |
| Oligo d(T)18 Primer (50 μmol/L)** | 2 mikroliter |
| atau Primer Acak (* untuk qPCR) (50 μmol/L)** | atau 2 μL |
| Jumlah RNA* | 10 hal -5 μg |
| atau mRNA | 10 halaman - 500 ng |
| Air Bebas RNase | Sampai 20 μL |
* Disarankan agar jumlah total RNA yang dimasukkan tidak melebihi 2 μg. Jika tingkat ekspresi gen target rendah, jumlah yang dimasukkan dapat ditingkatkan hingga maksimum 5 μg total RNA.
** Jumlah primer dapat disesuaikan menurut jumlah masukan templat. Jika produk transkripsi balik digunakan untuk eksperimen qPCR, Primer Acak dapat ditambahkan ke dalam sistem sesuai dengan jumlah yang disarankan.
2）Pengaturan Prosedur Transkripsi Terbalik
| Suhu. | Waktu |
| 55℃* | 5 menit** |
| 85℃ | 5 detik |
* Untuk templat dengan konten GC tinggi atau templat kompleks, suhu transkripsi balik dapat ditingkatkan hingga 60℃.
** Produk ini dapat mensintesis sekuens cDNA di bawah 14 kb. Jika Anda membutuhkan produk cDNA yang lebih panjang, Anda dapat memperpanjang waktu transkripsi balik dengan tepat.
Catatan
- Semua operasi harus dilakukan di atas es dan harus dilakukan dengan cara yang menghindari kontaminasi RNase.
- Produk ini hanya untuk keperluan penelitian.
- Harap bekerja dengan jas lab dan sarung tangan sekali pakai, demi keselamatan Anda.
Dokumen:
Pembayaran & Keamanan
Informasi pembayaran Anda diproses dengan aman. Kami tidak menyimpan detail kartu kredit atau memiliki akses ke informasi kartu kredit Anda.
Pertanyaan
Anda mungkin juga menyukai
FAQ
Produk ini hanya untuk keperluan penelitian dan tidak ditujukan untuk penggunaan terapeutik atau diagnostik pada manusia atau hewan. Produk dan konten dilindungi oleh paten, merek dagang, dan hak cipta milik
Aplikasi tertentu mungkin memerlukan hak kekayaan intelektual pihak ketiga tambahan.