Deskripsi Latar Belakang

Pemurnian protein adalah proses mengisolasi protein target dari total protein dalam sampel eksperimen sambil tetap mempertahankan aktivitas biologis dan integritas kimia protein target. Selama konstruksi vektor, selain beberapa elemen ekspresi yang diperlukan, perlu juga mempertimbangkan optimasi kodon dan pilihan tag. Memilih tag yang tepat tidak hanya bermanfaat untuk pemurnian protein dan meningkatkan kelarutan protein, tetapi juga tidak akan memengaruhi struktur dan fungsi protein serta aplikasi hilir. Bagian ini berfokus pada pengenalan tag His dan GST.

Tabel 1. Pengantar Tag GST dan miliknya

Menandai	Ukuran kDa	Urutan	Kemurnian	Kelarutan	Penghapusan Tag	Enzim Pembelah Tag
Miliknya	~0.84	HHHHHH	+	+	Tidak Diperlukan	Protease TEV
PPN	26	Terdiri dari 211 asam amino	Bahasa Indonesia: ++	Bahasa Indonesia: ++	Diperlukan	3C Protease/PSP

Tag Protein Afinitas Pemurniannya

Resin Agarose HisSep Ni-NTA didasarkan pada gel agarose yang sangat terikat silang sebagai matriks, secara kimia digabungkan dengan asam nitrilotriacetic (NTA) terkoordinasi tetra sebagai ligan, dan setelah mengkelat ion nikel (Ni²⁺), ia membentuk struktur oktahedral yang sangat stabil dengan ion nikel di pusat oktahedron. Struktur ini dapat melindungi ion nikel dari serangan molekul kecil. Dibandingkan dengan resin Ni-IDA, ia lebih stabil dan dapat menahan konsentrasi tertentu dari agen pereduksi, agen denaturasi, atau agen penggandeng dalam kondisi yang keras. Dibandingkan dengan resin Ni-TED, ia memiliki kapasitas penyerapan yang lebih besar untuk protein target. Ia telah menjadi salah satu resin yang sangat diperlukan untuk memurnikan protein berlabel His di laboratorium.

Gambar 1. Diagram prinsip produk resin His.

Tabel 2. Yeasen Panduan Pemilihan Produk Pemurniannya

Nomor Produk	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Nama Produk	Resin Agarosa HisSep Ni-NTA	Resin Agarosa HisSep Ni-NTA 6FF	Kolom Kromatografi HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL / 1 mL	HisSep Ni-NTA MagBeads
Matriks	Gel Agarosa 6% yang Terikat Silang	Gel Agarose 6% yang sangat terikat silang	Gel Agarose 6% yang sangat terikat silang	Mikrosfer Agarosa Magnetik
Tahan Tekanan	0.1 MPa, 1 batang	0.3 MPa, 3 batang	0.3 MPa, 3 batang	Tidak tersedia
Kapasitas	>40 mg 6×protein berlabel His/mL matriks	>40 mg 6×protein berlabel His/mL matriks		> 40 mg 6×protein berlabel His/mL manik magnetik
Saran Pemurnian	Matriks dengan ketahanan tekanan rata-rata, cocok untuk metode inkubasi, pemurnian skala kecil kolom gravitasi	Matriks dengan ketahanan tekanan tinggi, dapat digunakan untuk pemurnian protein skala besar industri dengan instrumen pemurnian protein		Pemurnian protein yang cepat dan nyaman melalui pemisahan magnetik
Toleransi	8 M urea, 6 M asam klorida, 0,5-1 mM DTT, 1 mM EDTA, dll.
Aplikasi	Pemurnian protein berlabel His adalah pilihan pertama, beban tinggi, toleransi rata-rata, terutama cocok untuk sistem pemurnian ekspresi prokariotik

Lampiran: Fitur Produk HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES)

1. Dibandingkan dengan kolom dan resin pra-kemasan tradisional, tidak diperlukan beberapa sentrifugasi sampel dan kontrol laju aliran sampel, sehingga sangat mengurangi waktu pemurnian.
2. Pemurnian satu langkah dapat mencapai kemurnian lebih dari 95% protein target.
3. Target hasil protein tinggi: hasilnya dapat mencapai 70-80%.
4. Dapat digunakan kembali hingga 5 kali.
5. Mudah untuk menyesuaikan konsentrasi dan volume protein target.
6. Kehilangan protein kecil, dan tidak ada risiko denaturasi atau presipitasi protein.

Media Pemurnian Afinitas Protein Tag GST

Kromatografi afinitas protein tag GST menggunakan afinitas kovalen antara protein fusi GST dan glutathione tetap (GSH) melalui ikatan sulfur, dan memurnikan berdasarkan prinsip elusi pertukaran GSH. Dalam pemurnian ini, glutathione digabungkan dengan lengan gel melalui ikatan sulfur, dan kemudian gaya aksi spesifik antara glutathione dan glutathione S-transferase (yaitu, tag GST) digunakan untuk membuat protein fusi berlabel GST bergabung dengan lengan glutathione pada gel, sehingga memisahkan protein berlabel dari protein lain. Glutathione biasanya memiliki bentuk teroksidasi GSSG dan bentuk tereduksi GSH. Ketika kita menggunakan elusi GSH, GSH akan bersaing dengan glutathione gel untuk bergabung dengan protein fusi, sehingga mengelusi protein target.

Resin Agarosa Glutathione GSTSep merupakan resin pemurnian protein tag GST, yang secara struktural dibuat dengan menggabungkan glutathione tereduksi dengan gel agarosa 6% secara kovalen secara kimia sebagai matriks melalui lengan 12 atom. Desain ini telah meningkatkan efisiensi pemurnian resin secara signifikan, sehingga memungkinkannya membawa lebih dari 20 mg protein fusi GST per mililiter media. Produk ini memiliki spesifisitas dan kinerja biaya yang baik, dan dapat digunakan untuk memurnikan berbagai glutathione S-transferase, protein yang bergantung pada glutathione, dan turunan rekombinan glutathione dalam satu langkah.

Tabel 3. Yeasen Panduan Pemilihan Produk Pemurnian GST

Nomor Produk	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Nama Produk	Resin Glutathione Agarosa GST Sep	Resin Agarosa Glutathione GSTSep 4FF	Kolom Kromatografi Glutathione 4FF GSTSep, 1 mL / 5 mL	GSTSep Glutathione Manik-manik Mag
Matriks	Gel Agarosa 6% yang Terikat Silang	Gel Agarose 4% yang sangat terikat silang	Gel Agarose 4% yang sangat terikat silang	Mikrosfer Agarosa Magnetik
Tahan Tekanan	0.1 MPa, 1 batang	0.3 MPa, 3 batang	0.3 MPa, 3 batang	Tidak tersedia
Kapasitas	>20 mg protein GST (40 kDa)/mL matriks	>10 mg protein GST (40 kDa)/mL matriks		5-10 mg protein fusi tag GST/mL manik magnetik
Aplikasi	Beban tinggi, Matriks dengan ketahanan tekanan rata-rata, cocok untuk metode inkubasi, pemurnian skala kecil kolom gravitasi, direkomendasikan untuk pelanggan skala laboratorium	Aplikasi Beban rendah, ketahanan tekanan matriks tinggi, dapat digunakan untuk pemurnian protein skala besar industri dengan instrumen pemurnian protein, lebih mudah untuk ditingkatkan		Beban terendah, pemurnian protein cepat dan nyaman melalui pemisahan magnetik

Lampiran: GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES) Fitur Produk

1. Memurnikan langsung protein target dengan kemurnian tinggi dari sampel biologis melalui pemisahan magnetik dalam satu langkah, sangat menyederhanakan proses pemurnian dan meningkatkan efisiensi pemurnian, cocok untuk pemurnian protein fusi GST yang nyaman dalam penelitian ilmiah dan bidang industri.
2. Menggunakan manik magnetik ini untuk eksperimen GST Pull-down, karena pemisahan magnetik tidak memerlukan beberapa sentrifugasi dan waktu inkubasi yang lama, operasinya lebih sederhana, lebih cepat, dan lebih otomatis dibandingkan dengan metode kromatografi tradisional.

Informasi Produk

Penempatan Produk	Nama Produk	Nomor Produk	Spesifikasi
Tag Pemurnian Proteinnya	HisSep Ni-NTA Agarosa Damar	20502ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	HisSep Ni-NTA Agarosa Damar 6FF	20503ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Kolom Kromatografi HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL	Tanggal 20504ES08/25	5ml/5x5ml
	Kolom Kromatografi HisSep Ni-NTA 6FF, 1 mL	20505ES03/08	1ml/5x1ml
	HisSep Ni-NTA MagBeads	20561ES08/25	5ml/25ml
Tag GST Pemurnian Protein	Resin Glutathione Agarosa GST Sep	20507ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Resin Agarosa Glutathione GSTSep 4FF	20508ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Kolom Kromatografi Glutathione 4FF GSTSep, 1 mL	20509ES03/08	1ml/5x1ml
	Kolom Kromatografi Glutathione 4FF GSTSep, 5 mL	Tanggal 20510ES08/25	5ml/5x5ml
	GSTSep Glutathione MagBeads	20561ES08/25	5ml/25ml