Hieff Canace^{Waktu Standar} Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase, merupakan generasi baru DNA dengan ketepatan tinggi Polimerase berdasarkan DNA Polimerase Pfu. Hieff Canace^{Waktu Standar} Uracil+ DNA Polimerase dengan ketelitian tinggi memungkinkan reaksi PCR yang cepat dan akurat untuk templat yang kompleks. Ketepatannya ditingkatkan secara signifikan, dan sepenuhnya menghindari kegagalan amplifikasi yang disebabkan oleh penggunaan primer/templat/dNTP yang mengandung dUTP. Produk ini dilengkapi dengan penyangga enzim yang dioptimalkan dan penambahan komponen peningkatan PCR, menjadikan enzim sangat efisien dan mudah beradaptasi dengan berbagai templat, cocok untuk amplifikasi templat yang kompleks.

Komponen Produk

Pengiriman dan Penyimpanan

Komponen dikirim dengan bungkus es dan dapat disimpan pada suhu -20°C selama 1 tahun.

Aplikasi Produk

Amplifikasi perpustakaan fidelitas tinggi menggunakan primer/templat/dNTP yang mengandung dUTP.

Perhatian

1. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai saat beroperasi.

2. Hanya untuk keperluan penelitian!

Instruksi

Hieff Canace^{Waktu Standar} Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase digunakan dengan cara yang sedikit berbeda dari enzim high-fidelity konvensional. Harap baca petunjuk dengan saksama sebelum digunakan.

1. Sistem reaksi yang direkomendasikan

Semua operasi harus dilakukan di atas es. 2×Canace^{Waktu Standar} Buffer PCR Uracil+ harus tercampur dengan baik setelah pencairan. Sebelum konfigurasi sistem, panaskan terlebih dahulu instrumen PCR. Setelah penambahan komponen, campurkan sampel dengan baik menggunakan pipet dan putar hingga ke dasar tabung, lalu letakkan di instrumen PCR yang telah dipanaskan terlebih dahulu untuk amplifikasi. Setelah digunakan, kembalikan semua komponen ke suhu -20 °C untuk penyimpanan.

Tabel 1. Reaksi amplifikasi PCR

[Catatan]:

1) Reagen: Cairkan setiap komponen secukupnya sebelum digunakan;

2)Templat: Penggunaan templat DNA berkualitas tinggi yang dimurnikan dapat secara signifikan meningkatkan efisiensi dan tingkat keberhasilan amplifikasi;

3) dNTP: Konsentrasi akhir dNTP yang direkomendasikan adalah 200 μM. dNTP yang disediakan dalam kit tidak mengandung dUTP. Jika keadaan khusus memerlukan persiapan templat yang mengandung dUTP, dUTP tambahan dapat ditambahkan hingga mencapai konsentrasi akhir 400 μM.

4) Konsentrasi polimerase: 1 U/50 μL direkomendasikan. Konsentrasi dapat dioptimalkan antara 0,5-2 U/50 μL, jangan melebihi 2 U/50 μL. Untuk mencegah polimerase merusak primer karena aktivitas eksonuklida 3'→5', disarankan untuk menambahkan polimerase ke sistem reaksi pada langkah terakhir.

5) Konsentrasi akhir Mg2+: Konsentrasi akhir sistem adalah 2 mM. Silakan minta perusahaan kami untuk menyediakan buffer dengan konsentrasi Mg2+ rendah atau tanpa Mg2+ jika Anda memiliki kebutuhan khusus.

2. Prosedur reaksi yang direkomendasikan

Tabel 2. Prosedur reaksi amplifikasi PCR

[Catatan]：

1) Suhu dan waktu denaturasi awal: 98℃ direkomendasikan. Waktu yang disarankan adalah 30 detik untuk templat sederhana seperti DNA plasmid, 1 menit untuk pustaka, 3 menit untuk templat kompleks seperti cDNA dan DNA genomik, dan 5-10 menit untuk templat dengan kandungan GC tinggi.

2) Suhu dan waktu anil: 60℃ direkomendasikan, atau gradien suhu dapat diatur untuk menemukan suhu optimal untuk anil primer sesuai kebutuhan. Waktu anil yang disarankan adalah 20 detik dan dapat disesuaikan dalam 10-30 detik. Waktu anil yang terlalu lama dapat menyebabkan dispersi produk yang diperkuat pada gel.

3)Suhu dan waktu perpanjangan: 72℃ direkomendasikan. Waktu perpanjangan disesuaikan dengan kebutuhan aktual.