Quick T4 DNA Ligase merupakan produk enzim tunggal yang dapat digunakan untuk ligasi fragmen DNA dan adaptor dalam proses konstruksi pustaka NGS. Produk ini telah diverifikasi melalui sekuensing berthroughput tinggi dan memiliki kualitas yang sangat baik. Bagi pelanggan yang tidak memerlukan penyesuaian sistem eksperimental, disarankan untuk membeli Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607).

Komponen Produk

Pengiriman dan Penyimpanan

Produk dikirimkan dengan bungkus es dan dapat disimpan pada suhu -20°C selama dua tahun.

Definisi Satuan

Dalam sistem reaksi ligasi 20 μL, ketika 6 μg λDNA-Hind Ⅲ direaksikan pada suhu 16℃ selama 30 menit, jumlah enzim yang dibutuhkan untuk memberikan lebih dari 50% ligasi fragmen DNA didefinisikan sebagai satu unit (U).

Perhatian

1. Jika terjadi sedikit endapan ketika buffer mencair, harap balikkan dan aduk rata sebelum digunakan;

2. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai saat bekerja.

3. Produk ini HANYA untuk keperluan penelitian!

Instruksi

1. Kit konstruksi pustaka DNA arus utama saat ini umumnya tidak dimurnikan setelah perbaikan ujung dan perawatan A-Tailing, dan langsung melakukan ligasi adaptor. Silakan lihat persiapan berikut untuk sistem reaksi. Aduk secara menyeluruh, putar sebentar dan inkubasi selama 15 menit pada suhu 20°C.

[Catatan]: *50% PEG 6000 tidak disediakan dalam kit, Anda harus menyiapkannya sendiri.

**Lihat tabel berikut untuk jumlah adaptor.

***Jumlah Quick T4 DNA Ligase yang digunakan dapat ditambahkan 1-5 μL sesuai kebutuhan.

2. Kualitas dan konsentrasi adaptor yang digunakan secara langsung memengaruhi efisiensi ligasi dan hasil pustaka. Penggunaan adaptor yang terlalu banyak dapat menghasilkan lebih banyak dimer adaptor, sedangkan penggunaan yang lebih rendah dapat memengaruhi efisiensi ligasi dan hasil pustaka. Tabel berikut mencantumkan jumlah adaptor yang direkomendasikan untuk digunakan dalam berbagai situasi Input DNA menggunakan kit ini.

[Catatan]: Mol DNA masukan (pmol)≈ DNA masukan(ng)/ [0,66 × Panjang rata-rata DNA masukan (bp)].

Contoh perhitungan ligasi adaptor: Berapa banyak adaptor yang harus ditambahkan ketika DNA masukan adalah 100 ng dan panjangnya 300 bp?

Langkah 1: Hitung jumlah mol DNA masukan. Rumus: Mol DNA masukan (pmol) ≈ DNA masukan (ng)/ [0,66 × Panjang rata-rata DNA masukan (bp)]; Mol DNA masukan (pmol) = 100 ÷ (0,66 × 300) = 0,5 pmol;

Langkah 2: Berdasarkan tabel di atas, hitunglah jumlah mol adaptor yang ditambahkan.; Bila DNA masukan adalah 100ng, maka rasio molar adaptor: DNA masukan adalah 100:1, dan jumlah mol adaptor yang ditambahkan = 100 x 0,5 pmol = 50 pmol;

Langkah 3: Hitung volume penambahan adaptor. Konsentrasi adaptor = 15 μmol/L (jika Anda menggunakan adaptor perusahaan lain, Anda perlu menentukan konsentrasinya sesuai dengan petunjuknya); Volume adaptor yang ditambahkan = mol adaptor yang ditambahkan (50 pmol) ÷ konsentrasi adaptor (15 μmol/L) = 3,34 μL (Catatan: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Singkatnya, volume yang dapat ditambahkan adaptor adalah 3,4 μL. (Catatan: Volume penambahan maksimum adaptor tidak melebihi 5 μL).