Kit Metilasi Bisulfit DNA Supercepat Hieff (berbasis Kolom) dengan cepat mengubah sitosin yang tidak termetilasi dalam sampel DNA menjadi urasil, sementara sitosin yang termetilasi tidak berubah. Selama perlakuan bisulfit suhu tinggi, DNA untai ganda berubah sifat menjadi untai tunggal. Dengan adanya HSO3-, residu sitosin mengalami deaminasi dan diubah menjadi urasil, dengan sitosin termetilasi tetap tidak berubah. Dalam amplifikasi PCR berikutnya, urasil digantikan oleh timin (T). Proses konversi hanya memakan waktu 5 menit, mengakomodasi masukan DNA mulai dari 100 pg hingga 2 μg, dan mencapai efisiensi konversi ≥99% untuk sitosin yang tidak termetilasi. DNA yang dikonversi cocok untuk aplikasi hilir seperti amplifikasi PCR dan pengurutan NGS.

Fitur

Input Rendah: Cocok untuk mengkonversi sampel mulai dari 100 pg hingga 2 μg

Waktu konversi singkat: sekitar 5 menit.

Kerusakan Sampel Minimal: Menjaga integritas sampel yang baik pasca konversi.

Efisiensi Konversi Tinggi: Tingkat konversi ≥99%, tingkat konversi tinggi di wilayah GC tinggi dengan tingkat positif palsu yang rendah.

Cocok untuk sampel langka, seperti konversi metilasi DNA sel tunggal.

Mampu melakukan konversi metilasi sampel RNA.

Produk Komponen

Catatan:

Untuk 10 pengujian per kotak: Tambahkan 4,4 mL etanol anhidrat ke larutan pencuci.

Untuk 50 pengujian per kotak: Tambahkan 22 mL etanol anhidrat ke larutan pencuci.

Setelah menambahkan etanol anhidrat, balikkan dan aduk rata, lalu simpan untuk penggunaan selanjutnya. Pastikan tutup botol tertutup rapat untuk mencegah penguapan etanol, yang dapat memengaruhi kinerja reagen.

Angka

Gambar 4. Konversi bisulfit pada sampel DNA genomik manusia dilakukan menggunakan kit konversi 12225 dan kompetitor Q. Selanjutnya, kit persiapan pustaka DNA untai tunggal khusus metilasi digunakan untuk menghasilkan pustaka. Data hasil pustaka dan kendali mutu disajikan di atas. Hasilnya menunjukkan bahwa ketika mengurutkan pustaka gabungan dari kit 12225 dan kompetitor Q, kit 12225 menghasilkan keluaran data yang lebih tinggi, mencapai rasio tepat sasaran (%) yang lebih tinggi, dan menunjukkan tingkat duplikasi yang lebih rendah (%).

Pengiriman dan Penyimpanan

Simpan larutan konversi 12225-A pada suhu ruangan, terlindungi dari cahaya. Simpan komponen lainnya pada suhu ruangan. Masa simpan adalah 12 bulan.

Catatan:

1. Untuk memastikan keberhasilan percobaan hilir, ukur jumlah total DNA masukan secara akurat selama langkah konversi. Disarankan untuk menggunakan Qubit 3.0/4.0 untuk kuantifikasi DNA, dengan rasio A260/A280 antara 1,7 dan 1,9. Kisaran DNA masukan harus antara 100 pg dan 2 μg, dengan kisaran optimal 100 ng hingga 1 μg. Masukan DNA yang tidak mencukupi dapat menghambat deteksi hilir, sementara masukan yang berlebihan dapat mengurangi efisiensi pemulihan dan konversi.

2. Larutan konversi, larutan desulfonasi, dan larutan pencuci mengandung komponen yang mudah menguap. Setelah digunakan, segera kencangkan tutupnya dan simpan pada suhu ruangan.

3. Untuk sampel pascakonversi, lanjutkan dengan eksperimen hilir segera. Untuk penyimpanan jangka pendek, simpan pada suhu -20°C, dan untuk penyimpanan jangka panjang, simpan pada suhu -80°C.

4. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai selama bekerja.

5. Produk ini hanya untuk keperluan penelitian!

Instruksi

Penyiapan reagen dan bahan habis pakai: tabung sentrifus steril 1,5 mL, air bebas enzim, etanol absolut, tabung PCR;

aku Konversi bisulfit:

1) Siapkan tabung PCR steril yang sesuai dengan jumlah sampel yang akan diuji, dan siapkan sistem reaksi sesuai tabel berikut:

2) Sistem transformasi

Gunakan pipet untuk meniup dan mencampur sistem di atas atau pusaran dan campurkan selama 5 detik, lalu sentrifus selama beberapa saat, dan sentrifus larutan reaksi ke dasar tabung PCR.

kita Catatan: 1. Pada saat ini, volume total larutan reaksi dalam tabung PCR adalah 200 μL. Agar transformasi lebih lengkap, larutan reaksi harus dibagi menjadi bagian yang sama dan dipindahkan ke tabung PCR steril baru setelah ditiup dan dicampur pada langkah 2), dan prosedur transformasi harus dijalankan. Setelah konversi, larutan reaksi dalam dua tabung PCR digabungkan ke dalam kolom pemurnian yang sama untuk pemurnian.

2. Jika volume sampel antara 20 dan 40 μL, kurangi volume larutan transformasi untuk mempertahankan volume total 200 μL.

3. Jika volume sampel adalah 50 μL, 150 μL larutan transformasi ditambahkan, volume total dipertahankan pada 200 μL, dan waktu transformasi diperpanjang menjadi 6-10 menit.

3) Pengaturan program konversi CT

Tabung PCR ditempatkan pada instrumen PCR dengan program yang telah ditetapkan untuk menjalankan reaksi.

aku Pemurnian

1) Ttransfer 200 μL dari konversi solusi untuk Pkolom urifikasiS, sentrifus selama 30-60 detik 13000 G, buang filtratnya, dan masukkan kolom pemurnian ke dalam Ctabung koleksiS lagi;

2) Tambahkan 100 μL Penyangga Pencuci ke dalam Kolom Pemurnian (pastikan etanol absolut telah ditambahkan), sentrifus selama 30-60 detik 13000 G, buang filtratnya, dan masukkan kolom pemurnian ke dalam Ctabung koleksiS lagi;

3) Tambahkan 200 μL Penyangga Desulfonasi ke dalam Kolom Pemurnian , dan biarkan reaksi pada suhu kamar selama 20 menit. Setelah reaksi, sentrifus selama 30-60 detik 13000 G, buang filtratnya, dan tempatkan Kolom Pemurnian di dalam Ctabung koleksiS lagi;

4) Tambahkan 200 μL Penyangga Pencuci ke Kolom Pemurnian, sentrifus selama 30-60 detik 13000 G buang filtratnya, dan tempatkan Pkolom urifikasiS di dalam Ctabung koleksiS lagi;

5) Ulangi langkah 4) sekali;

6) Mentransfer Kolom Pemurnian ke dalam tabung sentrifus 1,5 mL yang telah disiapkan, tambahkan 10-30 μL Penyangga Elusi ke tengah membran filter setelah membuka penutup dan mengeringkan, dan kumpulkan DNA setelah didiamkan selama 1 menit pada suhu ruangan dan disentrifugasi selama 1 menit pada 13000 GBahasa Indonesia:

7) Simpan DNA sementara pada -20 ℃. Untuk penyimpanan jangka panjang, harap simpan DNA pada -80 ℃ dan hindari pembekuan dan pencairan berulang yang tidak perlu.

Catatan: Produk transformasi yang dimurnikan dapat langsung digunakan dalam reaksi PCR atau proses pengurutan berikutnya.

Buku petunjuk