Hifair™ Kit Probe RT-qPCR Satu Langkah Multiplex V (UDG Plus) adalah kit PCR kuantitatif multipleks yang berbasis RNA sebagai cetakan. Dalam proses percobaan, transkripsi balik dan PCR kuantitatif dilakukan dalam tabung yang sama, yang menyederhanakan operasi percobaan dan mengurangi risiko kontaminasi.

Dalam kit ini, untai pertama cDNA disintesis secara efisien dengan Hifair tahan panas^{Waktu Standar} V Reverse Transcriptase dan diperkuat secara kuantitatif oleh UNICON^{Waktu Standar} HotStart Taq DNA Polymerase. Kit ini terutama berisi buffer MP yang dioptimalkan, campuran enzim, dll. Larutan buffer sudah mengandung Mg²⁺ dan dNTP. Selain itu, faktor-faktor yang secara efektif dapat menghambat amplifikasi PCR non-spesifik dan meningkatkan efisiensi amplifikasi beberapa reaksi qPCR ditambahkan, yang dapat memastikan efisiensi amplifikasi dan melakukan hingga beberapa reaksi amplifikasi. Sistem dUTP/UDG ditambahkan untuk secara efektif mencegah risiko kontaminasi aerosol.

Fitur

Sensitivitas tinggi: Bahasa Indonesia:Sistem buffer yang dioptimalkan dengan cermat meningkatkan sensitivitas deteksi templat konsentrasi rendah hingga 250 salinan/mL；

Stabilitas super: Produk telah lulus uji stabilitas waktu nyata selama 18 bulan.

Sistem anti polusi dUP/UDG: Bahasa Indonesia:Sistem anti polusi dUTP/UDG diperkenalkan untuk menurunkan polusi aerosol produk secara efisien, mengurangi positif palsu, dan memastikan hasil yang autentik；

Mendukung program cepat: kompatibel dengan program cepat, 40 menit dapat menghasilkan hasil;

Komponen

Catatan: 1) 2×Hifair^{Waktu Standar} Penyangga VMP adalah singkatan dari Hifair^{Waktu Standar} Penyangga Probe RT-qPCR Satu Langkah Multiplex VBahasa Indonesia: yang meliputi dNTP, dUTP, Mg2+, stabilisator, penambah daya, dan masih banyak lagi.

2) Hifair^{Waktu Standar} Campuran Enzim V terutama berisi Hifair tahan panas^{Waktu Standar} V transkriptase terbalik, UNICONWaktu Standar Polimer DNA Taq HotStart dan UDGase.

Penyimpanan

TDia produk sebaiknya menjadi tersimpan pada -25°C~-15°C untuk 18 bulan.

Instruksi

Komposisi Reaksi

Catatan: Bahasa Indonesia:Pastikan untuk mencampur dengan baik sebelum digunakan, hindari gelembung berlebihan yang disebabkan oleh getaran keras.

a) Dasar-dasar/Menguji konsentrasi: Bahasa Inggris: Primer campuran termasuk primer multipleks, tergantung pada situasinya, konsentrasi primer optimal mungkin antara 0,1 dan 1,0 μM.Campuran probe termasuk perbedaan pelabelan probe multipleks kelompok fluoresensi, tergantung pada situasi konsentrasi probe optimal mungkin antara 0,05 dan 0.5 Jumlah total unit pengukuran adalah 10 ...

c) Pengenceran templat: qPCR sangat sensitif dan direkomendasikan untuk mengencerkan templat. Nilai Ct kontrol yang sesuai adalah antara 20 dan 35.

D) Persiapan sistem: buka kepala dengan elemen filter. Hindari kontaminasi silang dan kontaminasi aerosol.

Protokol Bersepeda yang Dioptimalkan

Catatan: Bahasa Indonesia:a) Rtranskripsi everse: Suhu dapat memilih 42suhu udara atau 50suhu udara selama 10-15 menit.

b) Reaksi amplifikasi: Suhu diatur berdasarkan nilai Tm primer yang dirancang.

C) Akuisisi sinyal fluoresensi: Harap atur prosedur eksperimen sesuai dengan persyaratan manual instrumen.

3. Aplikasi peralatan

Peralatan dengan Rox: Bahasa Indonesia:ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Cepat, StepOne™, StepOne Plus™

Peralatan dengan Rox Rendah: Bahasa Indonesia:ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 dan 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

Peralatan tanpa Rox: Bahasa Indonesia:

Bio-RaCFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Bahasa Indonesia: Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000 dari Corbett

Ilmu Terapan Roche Sepeda LightCycler® 480, Sepeda LightCycler® 2.0, Sepeda LightCycler® 96

Termo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid Bahasa Indonesia: SmartCycler®; ilumina Eko qPCR

Catatan

Harap kenakan APD yang diperlukan, seperti jas lab dan sarung tangan, untuk memastikan kesehatan dan keselamatan Anda.!

Harap gunakan bahan habis pakai RNasefree untuk percobaan.

Tes sensitivitas

13650 yang disimpan pada suhu -20°C selama 18 bulan (kelompok eksperimen) dan yang masih dalam masa simpan (kelompok kontrol) diuji secara bersamaan untuk pengenceran gradien (500 kopi/ml, 250 kopi/ml) dari pseudovirus SARS-CoV-2, yang menargetkan gen ORF dan gen N. Delapan sumur replikasi diuji untuk setiap konsentrasi, dengan tingkat deteksi 100%. Selain itu, tidak ada perbedaan signifikan dalam bentuk puncak kurva amplifikasi dan nilai Ct.

Uji stabilitas waktu nyata

13650 disimpan pada suhu -20°C selama 18 bulan dan yang masih dalam masa simpan. Kedua kelompok diuji secara bersamaan untuk gen ORF dan gen N pseudovirus SARS-CoV-2 pada konsentrasi 1000 kopi/ml dengan 20 sumur replikasi. Tingkat deteksi untuk keduanya adalah 100%, dan tidak ada perbedaan signifikan dalam bentuk kurva amplifikasi atau nilai Ct.

Gambar 1. Rdiedit oleh: 13650 dalam masa simpannya；biru: Bahasa Indonesia:13650 disimpan pada suhu -20°C selama 18 bulan[ sunting ]

Kinerja stabil setelah siklus beku-cair berulang

Dengan melakukan 30 dan 50 siklus beku-cair pada reagen 13650 menggunakan es kering, bersama dengan reagen yang disimpan secara normal pada suhu -20°C, dan secara bersamaan menguji gen ORF pseudovirus SARS-CoV-2, hasilnya menunjukkan bahwa kinerja reagen 13650 tidak terpengaruh setelah 50 siklus beku-cair.

Gambar 2. Merah: 13650 disimpan secara normal pada suhu -20°C; Ungu: Bahasa Indonesia:13650 hingga 30 siklus beku-cair；Hijau: Bahasa Indonesia:13650 hingga 50 siklus beku-cair.

Kompatibel dengan Protokol Standar dan Cepat

Menggunakan 13650ES, gen ORF dan gen N dari pseudovirus SARS-CoV-2 dideteksi di bawah sistem reaksi yang sama dengan protokol standar dan cepat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa di bawah sistem 4-plex, tidak ada perbedaan dalam bentuk puncak kurva amplifikasi dan nilai Ct antara kedua protokol.

Dokumen:

Buku Panduan