RNase HII adalah enzim internal ribonuklease yang diperoleh dari Pyrococcus abysidia dan diekspresikan secara rekombinan dalam Bakteri E. Coli. Ia mengenali untai ganda DNA-rN-DNA/DNA, memotong di tempat di mana ribonukleotida dimasukkan ke dalam DNA. Akan tetapi, aktivitasnya pada RNA untai tunggal sangat rendah, dan tidak menunjukkan aktivitas pemotongan pada dsDNA atau ssDNA. RNase HII memotong di tempat residu ribonukleotida tunggal dari ujung 5', menghasilkan gugus fosfat 5' dan ujung hidroksil 3' setelah pemotongan. Enzim RNase HII ini memiliki aktivitas optimal pada suhu 70~75°C, aktif antara 50°C dan 75°C, tetapi memiliki aktivitas yang sangat rendah pada suhu kamar. Produk ini sangat termostabil, dengan hampir tidak ada kehilangan aktivitas setelah inkubasi pada suhu 95°C selama 45 menit, dan kompatibel dengan berbagai sistem reaksi PCR.

Spesifikasi

Komponen

Penyimpanan

Produk ini harus disimpan pada suhu -25~-15℃ selama 2 tahun.

Aplikasi Produk

1. Deteksi oleh LAMP dengan probe sensitivitas tinggi.
2. PCR bergantung RNase HII (rhPCR).
3. Penghapusan ribonukleotida yang tidak cocok yang terbentuk selama reaksi berantai polimerase.
4. Degradasi bagian RNA dari fragmen Okazaki.

Catatan

1. Produk ini hanya untuk keperluan penelitian.
2. Harap bekerja dengan jas lab dan sarung tangan sekali pakai, demi keselamatan Anda.

Angka

1. Bakteri E. coli residu DNA genomik < 0,5 salinan/100 U

Deteksi Bakteri E.coli residu DNA genomik pada berbagai batch RNase HII menunjukkan bahwa residu DNA genomik inang YeasenRNase HII jauh di bawah 0,5 salinan/100 U.

Gambar 4. Deteksi Bakteri E.coli residu DNA genomik

2. Uji Tahan Panas 95°C

Setelah pemanasan RNase HII pada suhu 95°C selama 0 hingga 45 menit, aktivitas enzim RNase HII diuji. Hasil menunjukkan bahwa hampir tidak ada kehilangan aktivitas enzim dalam YeasenRNase HII bahkan setelah 45 menit pemanasan.

Gambar 5. Uji ketahanan panas 95°C

3. Tidak ada residu eksonuklease, enzim Nicking, atau RNase (dosis 1 U)

Inkubasi 1 U dari berbagai batch RNase HII dengan substratnya masing-masing DNA/RNA pada suhu 37°C selama 4 jam, hasil elektroforesis gel agarosa menunjukkan bahwa tidak ada eksonuklease, enzim penorehan, atau residu RNase dalam RNase HII.

Gambar 6. Deteksi eksonuklease, enzim nicking, dan residu RNase

Dokumen:

Buku Panduan