Kit ini dilengkapi dengan buffer lisis yang kuat, yang dapat dengan cepat melisiskan sampel (misalnya sel, ekor tikus, telinga tikus, jari kaki tikus, otot, dll.) untuk melepaskan DNA genomik, dan lisat dapat langsung ditambahkan ke sistem reaksi PCR tanpa pemurnian, yang memudahkan pengoperasian. Selain itu, kit ini memerlukan input sampel yang rendah, 5 mg jaringan tikus atau 1-5 mm ekor tikus dapat digunakan untuk eksperimen.

Komponen

Penyimpanan

19697-A (Larutan Lisis) harus disimpan di 2~8℃ untuk 1 bertahun-tahun. Jika digunakan beberapa kali, harap bekukan dalam kemasan terpisah untuk menghindari kontaminasi silang. 19687-B (Solusi Berhenti) harus disimpan di -25~-16℃ untuk 1 bertahun-tahun.

Instruksi

Pelepasan DNA Genom Tikus

1. Klip 5-10 mg jaringan hewan atau 1-5 mm ekor tikus dalam tabung sentrifus 1,5 mL*.
2. Tambahkan 90 μL Buffer ML ke dalam tabung sentrifus di atas, putar perlahan agar lisat meresap ke dalam sampel secara menyeluruh, lalu sentrifus sebentar.
3. Inkubasi pada suhu 95°C selama 15 menit dalam inkubator termostatik**.
4. Tambahkan 10 μL Buffer MT, aduk untuk mencampur, dan hentikan lisis.
5. Langkah opsional: sentrifugasi pada 12000 rpm selama 2 menit.
6. Pindahkan supernatan ke tabung sentrifus baru dan simpan pada suhu 4°C atau -20°C atau ambil supernatan langsung untuk amplifikasi PCR berikutnya.

* Jaringan harus dipotong sebanyak mungkin untuk memungkinkan reaksi lisis berjalan lebih lancar.

**Inkubasi pada suhu 95°C selama 15 menit umumnya cukup untuk sebagian besar kebutuhan PCR. Jika jumlah DNA yang dibutuhkan lebih banyak atau sampel sulit dilisis, waktu dapat diperpanjang hingga 30 menit. Blok jaringan tidak perlu dilisiskan sepenuhnya, dan residu dapat dihilangkan pada langkah sentrifugasi berikutnya.

Pelepasan DNA Genom Sel

Setelah membudidayakan sel yang ditransfeksi dalam pelat 48-sumur selama 3 hari dan mencapai kepadatan sel sekitar 70.000 sel/sumur, singkirkan medium selengkap mungkin. Kemudian tambahkan 90ul buffer ML langsung per sumur dan pipet setiap sumur. Pindahkan semuanya ke pelat PCR 96 sumur. Setelah diolah dengan mesin PCR pada suhu 95 °C selama 5-15 menit dan didinginkan, tambahkan 10ul buffer MT dan tiup secara merata dan menyeluruh. Dengan menggunakan enzim fidelitas tinggi (Cat# 10164) atau enzim Taq, tambahkan 0,5-2ul lisat sel ke setiap 50ul sistem reaksi PCR dan lakukan PCR.

Gambar 1. PCR langsung dengan lisat sel yang diobati dengan 19697.

Catatan

1. Produk ini hanya untuk keperluan penelitian.
2. Harap bekerja dengan kacamata, jas lab, dan sarung tangan sekali pakai demi keselamatan Anda.
3. Untuk menghindari kontaminasi silang antara sampel, perlu untuk merendam tepi perangkat pengambilan sampel atau bagian yang bersentuhan langsung dengan sampel dalam larutan natrium hipoklorit 2% setelah setiap pengambilan sampel, mencucinya beberapa kali, dan kemudian mengeringkan cairan yang tersisa dengan handuk kertas bersih sebelum menggunakannya lagi.Demi kenyamanan pengujian, beberapa perangkat pengambilan sampel dapat disiapkan dan dibersihkan secara seragam setelah digunakan guna memastikan bahwa setiap sampel diambil dengan perangkat pengambilan sampel yang bebas kontaminasi.
4. Disarankan untuk menggunakan jaringan hewan yang baru diambil. Dalam kasus jaringan yang dibekukan dalam jangka panjang, pembekuan dan pencairan berulang harus dihindari sebisa mungkin, jika tidak maka akan menyebabkan degradasi pola dan mempengaruhi efisiensi PCR.

Dokumen:

Buku Panduan