Manik-manik Concanavalin A (ConA) adalah mikrosfer polimer superparamagnetik yang telah digabungkan secara kovalen dengan Concanavalin A (lektin pengikat mannosa/glukosa tanaman yang diisolasi dari biji tanaman sereal) di permukaannya. Manik-manik ini memiliki beberapa karakteristik yang menonjol, termasuk monodispersitas dan reaktivitas magnetik yang kuat. Ketika Ca²⁺ dan Mg²⁺ ion hadir, manik magnetik ConA dapat secara efisien dan cepat memisahkan dan memurnikan berbagai biomolekul seperti polisakarida, glikoprotein, dan glikolipid dengan memanfaatkan afinitas antara globulin A ConA dan gugus terminal α-D-manosa dan α-D-glukosa.

Manik-manik magnetik ConA menawarkan metode yang mudah untuk memisahkan atau memperbaiki sel, memastikan kehilangan sel minimal selama langkah pencucian berikutnya. Selain itu, manik-manik ini dapat digunakan untuk pengumpulan dan fiksasi inti sel. Selain itu, manik-manik ini berguna dalam teknik inovatif seperti CUT & Run dan CUT & Tag, yang merupakan pendekatan revolusioner yang digunakan dalam eksperimen ChIP-seq.

Singkatnya, manik magnetik ConA adalah alat yang ampuh untuk pemurnian biomolekul yang efisien, pemisahan dan fiksasi sel yang mudah, pengumpulan inti sel, dan penerapan dalam teknik eksperimen mutakhir.

Spesifikasi

Karakteristik

Gambar dan Tabel

Tabel 1. Yeasen Manik ConA memiliki tingkat penangkapan yang tinggi. Jumlah Concanavalin A (ConA) yang digunakan secara proporsional dengan mikrosfer telah diverifikasi untuk memastikan kapasitas pengikatan maksimum sekaligus mencegah agregasi manik magnetik yang berlebihan setelah pengikatan sel dalam eksperimen CUT&Tag. Misalnya, penggunaan 10 μL manik berlapis ConA dapat mengikat sejumlah sel yang setara dengan kadar E7, dengan efisiensi pengikatan melebihi 98%.

Gambar 1. Yeasen Manik ConA menunjukkan dispersitas yang tinggi. Dalam proses pelabelan manik, sealant non-biologis dipilih untuk memastikan penutupan yang efisien tanpa terpengaruh oleh variasi antar-batch. Ini menjamin penyegelan manik magnetik yang sangat baik, mempertahankan monodispersitasnya yang tinggi selama penyimpanan manik berlapis ConA, yang bermanfaat untuk pengikatan yang efisien terhadap molekul karbohidrat dalam percobaan berikutnya.

Gambar 2. Distribusi sinyal kromatin CUT&Tag menggunakan Yeasen Dengan Manik-manik A.

Penyimpanan

Produk ini sebaiknya disimpan pada suhu 2~8℃ selama 2 tahun.

Instruksi

Operasi berikut mengambil pemurnian glikoprotein atau isolasi sel sebagai contoh, POTONG&Tandai percobaan , melihat Yeasen Cat# 12598ES untuk protokol.

1. Persiapan buffer

1）Disediakan oleh pelanggan

1. Bahan yang Diperlukan Tidak Termasuk: Dudukan Magnetik, Tabung Eppendorf, Tabung PCR, Dudukan Magnetik, Thermocycler dll.
2. Menyeimbangkan Manik-manik pada suhu ruangan minimal 30 menit. Suspensikan kembali manik-manik secara menyeluruh dengan cara memutar atau mengocok botol.

1. Penanganan sampel（ mengambil sel mamalia sebagai contoh )

1. Siapkan sel mamalia (1,0×10 ⁴~1.Ukuran 0×10 ⁵ sel), sentrifus (4℃，600×g, 3~5 menit) dan hati-hati membuang cairan supernatan.
2. Tambahkan 140 μL buffer pengikat, aduk rata dan suspensikan kembali sel, sentrifus dan kumpulkan (4℃，600×g, 3~5 menit), hati-hati membuang cairan supernatan.
3. Tambahkan 90 μL Buffer pengikat, aduk rata dan suspensikan kembali sel.
   Perhatian: Sel mamalia yang melekat erat dapat diperoleh melalui pencernaan parsial menggunakan enzim seperti tripsin. Untuk jaringan hewan, sel tumbuhan, atau sel jamur, memperoleh sel atau protoplas yang tersebar sering kali memerlukan perlakuan khusus yang disesuaikan dengan karakteristik spesifiknya.

1. Siapkan manik ConA

1. Pipet perlahan manik ConA hingga suspensi penuh, tempatkan 10 μL suspensi manik-manik dalam tabung sentrifus 200 μL yang baru.
2. Tambahkan 40 μL Buffer pengikat, aduk rata dan diamkan pada dudukan magnetik selama 1 menit lalu buang supernatan setelah manik-manik magnetik menyerap ke dinding samping tabung sentrifus.
3. Tambahkan 10 μL Buffer pengikat, aduk rata dan suspensikan kembali manik-manik ConA.

1. Contoh pengikatan

1. Tambahkan sampel sel yang telah dipersiapkan ke dalam manik-manik yang telah diolah terlebih dahulu, pipet perlahan manik-manik yang telah disuspensikan kembali, lalu inkubasi pada mixer terbalik (suhu ruangan 30 menit atau 4℃ semalaman).
2. Berdirilah di atas dudukan magnet selama 1 menit, tunggu manik-manik magnet terserap ke dinding samping tabung sentrifus, buang supernatan dengan hati-hati.
3. Menambahkan 500 μL buffer elusi ke kompleks manik-manik sel-ConA dan Pipet dengan perlahan ke menggantungkan kembali manik-manik, kemudian Berdirilah di atas dudukan magnet selama 1 menit, tunggu manik-manik magnet terserap ke dinding samping tabung sentrifus, buang supernatan dengan hati-hati.
4. Ulangi langkah 3) tiga atau empat kali lagi.

1. Elusi

1. Untuk glikoprotein, tambahkan 50~250 μL buffer elusi, pipet perlahan manik-manik yang telah disuspensikan, lalu inkubasi pada mixer terbalik (suhu ruangan selama 10~30 menit). Setelah campuran terbalik, diamkan pada dudukan magnet selama 1 menit, kumpulkan supernatan ke tabung 1,5 mL baru untuk melakukan SDS-PAGE atau Western blot.
2. Untuk sel, tidak perlu elusi.

Catatan

1. Menyeimbangkan KonA manik-manik pada suhu ruangan sebelum digunakan.
2. Hindari pembekuan, jika tidak maka akan terjadi kerusakan bahan manik atau hilangnya aktivitas.
3. ConA memerlukan kehadiran ion Ca2+ dan Mn2+ agar aktif, jadi reagen yang mengandung EDTA, atau kelator ion logam lainnya harus dihindari selama percobaan.
4. Ketika diinkubasi dengan sel, manik-manik ConA dapat berkumpul, yang merupakan hal normal dan tidak mempengaruhi penggunaan normal manik-manik magnetik.
5. Produk ini hanya untuk keperluan penelitian.
6. Harap bekerja dengan jas lab dan sarung tangan sekali pakai, demi keselamatan Anda.

Buku petunjuk