RNA untai ganda (dsRNA) muncul sebagai produk sampingan selama transkripsi mRNA secara in vitro. Produk sampingan ini memiliki sifat imunogenik dalam tubuh manusia, yang mampu memicu respons imun, sehingga menurunkan kadar mRNA. Hal ini menjadikan dsRNA sebagai pengotor proses yang merepotkan sehingga memerlukan eliminasi menyeluruh dan kontrol ketat terhadap keberadaan residunya.

Untuk mengatasi masalah ini, kit deteksi ELISA RNA untai ganda (dsRNA) menggunakan prinsip percobaan enzim-linked immunoassay (ELISA) sandwich antibodi ganda untuk mengukur sisa dsRNA. Kit ini tidak hanya dapat digunakan dalam deteksi dsRNA biasa, tetapi juga dalam deteksi peudo UTP, N1-Me-peudo UTP dan dsRNA yang dimodifikasi 5-OMe-UTP.

Prosedur ini melibatkan penambahan sampel standar dan sampel uji ke dalam pelat enzim (disebut sebagai 36717-A) yang sebelumnya dilapisi dengan antibodi anti-dsRNA. Selanjutnya, antibodi deteksi dsRNA berlabel biotin (36717-F) ditambahkan dalam bentuk encer. Terakhir, Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) dimasukkan untuk membuat kompleks yang terdiri dari antibodi, antigen, biotin, dan SA-HRP.

Setelah pencucian pelat, penambahan larutan kromogenik TMB (36717-K) memulai perkembangan warna. Di bawah pengaruh katalisis enzim HRP, TMB mengalami transformasi dari tidak berwarna menjadi biru, yang kemudian dihentikan melalui penerapan larutan penghenti (36717-L). Pada akhirnya, transformasi ini menghasilkan rona kuning, yang intensitasnya berkorelasi positif dengan kuantitas dsRNA yang diidentifikasi dalam sampel.

Kit ini memiliki tujuan serbaguna, memungkinkan pengoptimalan proses pemurnian produk biologis, pengendalian pengotor selama tahap antara, dan pengujian pelepasan untuk penilaian produk akhir.

Pproduk Bahasa Indonesia: Validasi Laporan

Komponen

Pengiriman dan Penyimpanan

Kit ini dikirim dengan bungkus es dan dapat disimpan pada suhu 2°C ~8°C. Produk yang belum dibuka berlaku selama satu tahun. Setelah reagen dibuka, produk ini berlaku selama setengah tahun. Jangan pernah membekukan produk ini.

Instruksi

1. Persiapan sebelum percobaan

1) Bahan percobaan yang tidak tersedia dalam kit ini tetapi diperlukan untuk percobaan:

a. Ujung bebas RNase;

b. Tabung sentrifus bebas RNase;

c. Kertas bebas debu;

d. Pelat praperlakuan sampel bebas RNase;

e. Air deionisasi atau air suling ganda.

2) Instrumen dan peralatan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan:

a. Pembaca mikroplat multifungsi (termasuk mode deteksi panjang gelombang ganda, mencakup 450nm dan 650nm; mampu menggunakan 450nm sebagai panjang gelombang deteksi dan 650nm sebagai panjang gelombang referensi);

b. Mesin pencuci pelat otomatis penuh, mixer vortex, mixer suhu konstan, sentrifus;

c. Mikropipet presisi dan mikropipet multisaluran dengan spesifikasi berbeda;

d. Timer, kulkas 4℃;

e. Pengocok mikroplat.

2. Analisis hasil

a. Jika nilai OD sampel yang akan diuji melebihi nilai OD pada titik tertinggi kurva standar, sampel perlu diencerkan dan diukur ulang.

b. Prosedur Pengembangan Kurva: Buat kurva standar dengan memplot konsentrasi standar pada sumbu x dan nilai absorbansi standar terkalibrasi yang sesuai pada sumbu y. Berbagai alat perangkat lunak statistik dan gambar dapat membantu dalam pembuatan kurva standar dan penentuan konsentrasi sampel yang tidak diketahui. Sebaiknya gunakan metode pemasangan empat parameter atau lima parameter untuk percobaan ini.Terakhir, hitung jumlah sisa dsRNA dalam sampel dengan mengacu pada kurva standar dan mempertimbangkan faktor pengenceran sampel.

c. Kurva baku yang diberikan merupakan contoh ilustrasi (hanya untuk tujuan referensi). Kandungan sampel yang sebenarnya harus ditentukan menggunakan kurva baku yang secara khusus dibuat untuk standar eksperimen yang sama.

3. Bagan alur percobaan

Gambar 5 Bagan alur percobaan

4. Kinerja produk

Kinerja perangkat ini telah dievaluasi sepenuhnya. Untuk keterangan lebih lanjut, silakan hubungi staf teknis untuk mendapatkan laporan verifikasi kinerja terkait.

5. Catatan

1. Harap baca buku petunjuk ini dengan saksama sebelum menggunakan perangkat ini.
2. Harap gunakan produk ini dalam masa berlakunya, dan dilarang mencampur reagen terkait dari batch yang berbeda.
3. Semua reagen harus dikembalikan ke suhu ruangan sebelum digunakan.
4. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai.
5. Produk ini hanya untuk tujuan penelitian ilmiah.
   
   

   Dokumen:

   Lembar Data Keselamatan

   Buku petunjuk