Keterangan
Kit Penghitungan Sel-8 (CCK-8) adalah kit deteksi yang cepat dan sangat sensitif berdasarkan reagen WST-8 (2-(2-metoksi-4-nitrofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-disulfofenil)-2H-tetrazolium monosodium salt). WST-8 adalah reagen MTT yang ditingkatkan dan dapat direduksi menjadi formazan oranye-kuning yang sangat larut dalam air oleh dehidrogenase dalam mitokondria. Jumlah formazan yang dihasilkan sebanding dengan jumlah sel hidup. Nilai OD formazan pada 450nm yang dideteksi oleh pembaca mikroplat dapat secara tidak langsung menunjukkan jumlah sel yang hidup. Kit ini banyak digunakan untuk skrining obat, uji proliferasi sel dan sitotoksisitas, pengujian sensitivitas obat tumor, dan deteksi aktivitas faktor biologis.
Keuntungan metode CCK-8
1. Perbandingan metode CCK-8 dengan metode deteksi proliferasi/toksisitas sel lainnya.
| Metode deteksi | Metode MTT | Metode XTT | WST - 1 metode | Metode CCK 8 |
|---|---|---|---|---|
| Kelarutan air dari produk formazan | Rendah (perlu menambahkan pelarut organik untuk melarutkan dan kemudian menguji) | Tinggi | Tinggi | Tinggi |
| Karakteristik produk | Bubuk | 2 botol larutan | Larutan | 1 botol larutan |
| Metode penggunaan | Campurkan ke dalam larutan dan gunakan | Solusinya disiapkan tepat sebelum digunakan. | Di luar kotak | Di luar kotak |
| Sensitivitas deteksi | Tinggi | Sangat tinggi | Sangat tinggi | Tinggi |
| Deteksi waktu | Panjang | Pendek | Pendek | Yang terpendek |
| Panjang gelombang deteksi | Panjang gelombang 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| sitotoksisitas | Toksisitas tinggi, hilangnya morfologi sel secara total | Toksisitas rendah, morfologi sel tidak berubah | Rendah toksisitas, morfologi sel tidak berubah | Toksisitas rendah, morfologi sel tidak berubah |
| Stabilitas reagen | Umum | Rendah | Umum | Tinggi |
| Pengujian sampel massal | Bisa dilakukan | Sesuai | Sesuai | Sesuai |
2. Fenol merah dan serum tidak mengganggu deteksi CCK-8.
3. Karena sitotoksisitas reagen CCK-8 sangat rendah, waktu pengukuran optimal dapat ditentukan dengan membaca berulang kali menggunakan pembaca mikroplat pada waktu yang berbeda setelah menambahkan reagen CCK-8.
Pengiriman dan Penyimpanan
Produk dapat disimpan pada suhu -25~-15ºC di tempat yang kering dan gelap selama dua tahun.
Tindakan pencegahan
1. Pada percobaan pertama, disarankan untuk menentukan jumlah sel yang optimal dan waktu inkubasi reagen CCK-8 yang optimal.
2. Jika memungkinkan, gunakan pipet multisaluran untuk mengurangi variasi antar sumur replikasi. Hindari gelembung dalam percobaan karena gelembung akan mengganggu pembacaan OD. Saat menambahkan reagen CCK-8, sebaiknya tambahkan di dekat dinding pelat kultur daripada memasukkannya ke dalam media kultur.
3. Sel darah putih mungkin memerlukan waktu inkubasi yang lebih lama.
4. Bila menggunakan pelat standar 96-sumur, jumlah sel yang ditanam minimal 1.000 sel/sumur (100 μL). Sensitivitas deteksi untuk sel darah putih relatif rendah, jadi disarankan untuk menanam minimal 2.500 sel/sumur (100 μL). Bila menggunakan pelat 24-sumur atau 6-sumur, hitung jumlah sel yang sesuai untuk setiap sumur dan tambahkan volume reagen CCK-8 yang sesuai (volume reagen CCK-8 yang ditambahkan adalah 10% dari volume media kultur di setiap sumur pelat).
5.Jika filter 450 nm tidak tersedia, filter dengan absorbansi antara 430-490 nm dapat digunakan, tetapi filter 450 nm dapat mencapai sensitivitas deteksi tertinggi.
6. Fenol merah tidak mempengaruhi pengukuran karena absorbansi fenol merah dalam medium dapat dihilangkan dengan mengurangi absorbansi gugus kosong.
7. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai saat melakukan percobaan.
Instruksi
I. Membuat kurva standar
1. Siapkan suspensi sel, tentukan kepadatan sel, lalu plat sel.
2. Encerkan sel secara berurutan dengan media kultur sesuai rasio tertentu (misalnya rasio 1:2) untuk membentuk gradien konsentrasi sel, umumnya 3-5 gradien konsentrasi sel, 3-6 sumur replikasi untuk setiap konsentrasi.
3. Setelah disemai, kulturkan sel selama 2-4 jam untuk membuatnya melekat. Kemudian, tambahkan reagen CCK-8, inkubasi selama jangka waktu tertentu dan ukur nilai OD. Gambarkan kurva standar dengan jumlah sel sebagai sumbu X dan nilai OD sebagai sumbu Y. Berdasarkan kurva standar ini, jumlah sel dalam sampel yang tidak diketahui dapat ditentukan (Premis penggunaan kurva standar ini adalah bahwa kondisi eksperimen harus konsisten).
II. Uji viabilitas sel
1. Sel plat (100 μL/sumur) dalam plat 96-sumur. Tempatkan plat dalam inkubator (37°C, 5% CO2) selama jangka waktu pra-inkubasi.
2. Tambahkan 10 μL reagen CCK-8 ke setiap sumur (hati-hati jangan sampai muncul gelembung di sumur, karena akan mengganggu pembacaan OD) lalu aduk perlahan.
3. Letakkan pelat dalam inkubator dan inkubasi selama 1-4 jam.
4. Ukur absorbansi pada 450 nm dengan pembaca mikroplat.
5. Jika nilai OD tidak segera diukur, tambahkan 10 μL larutan HCl 0,1 M atau larutan SDS 1% w/v ke setiap sumur, tutup pelat dan simpan di tempat yang terlindung dari cahaya pada suhu ruangan. Nilai absorbansi tidak akan berubah dalam waktu 24 jam.
III. Uji proliferasi sel dan sitotoksisitas
1. Sel plat (100 μL/sumur) dalam plat 96-sumur. Tempatkan plat dalam inkubator (37°C, 5% CO2) selama 24 jam untuk pra-inkubasi.
2. Tambahkan 10 μL berbagai konsentrasi zat yang akan diuji ke pelat.
3. Letakkan pelat dalam inkubator dan inkubasi selama jangka waktu tertentu (misalnya 6, 12, 24, atau 48 jam).
4. Tambahkan 10 μL reagen CCK-8 ke setiap sumur (hati-hati jangan sampai muncul gelembung di sumur, karena akan mengganggu pembacaan OD) lalu aduk perlahan.
5. Letakkan pelat dalam inkubator dan inkubasi selama 1-4 jam.
6. Ukur absorbansi pada 450 nm dengan pembaca mikroplat.
7. Jika nilai OD tidak segera diukur, tambahkan 10 μL larutan HCl 0,1 M atau larutan SDS 1% w/v ke setiap sumur, tutup pelat dan simpan di tempat yang terlindung dari cahaya pada suhu ruangan. Nilai absorbansi tidak akan berubah dalam waktu 24 jam.
Catatan: Jika zat tersebut mengalami oksidasi atau reduksi, ganti media kultur lama dengan media baru (buang media lama, cuci sel dua kali dengan media baru, lalu tambahkan media baru) sebelum menambahkan reagen CCK-8 untuk menghilangkan efek zat tersebut.Jika zat itu sendiri hanya memiliki A sedikit pengaruh pada nilai absorbansi, tidak perlu mengganti media kultur dan pengaruh zat dapat dihilangkan dengan cara mengurangkan nilai absorbansi gugus kosong dengan zat tersebut.
Rumus perhitungan
Tingkat kelangsungan hidup sel = [(AC) /(BC)] x100%
Tingkat penghambatan = [(BA) /(BC)] x100%
A: Absorbansi kelompok eksperimen (absorbansi media kultur yang berisi sel, reagen CCK-8, dan zat yang akan diuji)
B: Absorbansi kelompok kontrol (absorbansi media kultur yang mengandung sel, reagen CCK-8)
C: Absorbansi gugus kosong (absorbansi media kultur yang mengandung reagen CCK-8)
Kutipan
[1] Sun L, Li P, Ju X, dkk. Di dalam Karakterisasi struktural vivo dari genom RNA SARS-CoV-2 mengidentifikasi protein inang yang rentan terhadap obat yang digunakan ulang. Sel. 2021;184(7):1865-1883.e20. doi:10.1016/j.cell.2021.02.008(JIKA:41.584)
[2] Wei S, Zhao Q, Zheng K, dkk. Glutamilasi TAB1 yang terkait dengan GFAT1 mendukung aktivasi p38 MAPK dan meningkatkan kelangsungan hidup sel kanker paru-paru dalam kondisi kekurangan glukosa. Cell Discov. 2022;8(1):77. Diterbitkan 9 Agustus 2022. doi:10.1038/s41421-022-00423-0(JIKA:38.079)
[3] Chen X, Zhang D, Su N, dkk. Visualisasi dinamika RNA dalam sel hidup dengan RNA fluoresensi yang terang dan stabil. Nat Biotechnol. 2019;37(11):1287-1293. doi:10.1038/s41587-019-0249-1(JIKA:31.864)
[4] Yang F, Xiao Y, Ding JH, dkk. Heterogenitas ferroptosis pada kanker payudara triple-negatif mengungkap strategi kombinasi imunoterapi yang inovatif [diterbitkan daring sebelum cetak, 11 Oktober 2022]. Cell Metab. 2022;S1550-4131(22)00411-9. doi:10.1016/j.cmet.2022.09.021(JIKA:31.373)
[5] Rong QX, Wang F, Guo ZX, dkk. GM-CSF memediasi penghindaran imun melalui peningkatan ekspresi PD-L1 pada limfoma sel T/pembunuh alami ekstranodal. Mol Cancer. 2021;20(1):80. Diterbitkan 29 Mei 2021. doi:10.1186/s12943-021-01374-y(JIKA:27.401)
[6] Xia B, Shen X, He Y, dkk. Protein amplop SARS-CoV-2 menyebabkan kerusakan patologis seperti sindrom gangguan pernapasan akut (ARDS) dan merupakan target antivirus. Cell Res. 2021;31(8):847-860. doi:10.1038/s41422-021-00519-4(JIKA:25.617)
[7] Yang X, Zhao X, Zhu Y, dkk. FBXO34 meningkatkan aktivasi laten HIV-1 melalui modulasi pasca-transkripsi. Infeksi Mikroba Emerg. 2022;11(1):2785-2799. doi:10.1080/22221751.2022.2140605(JIKA:19.568)
[8] Zhou Z, Zhang X, Lei X, dkk.Penginderaan kromatin sitoplasma oleh cGAS mengaktifkan respons imun bawaan pada infeksi SARS-CoV-2. Signal Transduct Target Ther. 2021;6(1):382. Diterbitkan 3 November 2021. doi:10.1038/s41392-021-00800-3(JIKA:18.187)
[9] Li M, Hao B, Zhang M, dkk. Melatonin meningkatkan kekebalan antitumor NK yang diinduksi frekuensi radio, menyebabkan pemrograman ulang metabolisme kanker dan penghambatan perkembangan beberapa tumor paru. Signal Transduct Target Ther. 2021;6(1):330. Diterbitkan 1 September 2021. doi:10.1038/s41392-021-00745-7(JIKA:18.187)
[10] Qi S, Zhu Y, Liu X, dkk. Protein WWC memediasi aktivasi LATS1/2 oleh kinase Hippo dan menyiratkan strategi penekanan tumor. Mol Cell. 2022;82(10):1850-1864.e7. doi:10.1016/j.molcel.2022.03.027(JIKA:17.970)
[11] Zhu J, Li X, Cai X, dkk. Monometilasi arginin oleh PRMT7 mengendalikan kekebalan bawaan antivirus yang dimediasi MAVS. Mol Cell. 2021;81(15):3171-3186.e8. doi:10.1016/j.molcel.2021.06.004(JIKA:17.970)
[12] Teng KX, Niu LY, Xie N, Yang QZ. Agen fotodinamik supramolekul untuk oksidasi NADH dan pembentukan radikal superoksida secara simultan. Nat Commun. 2022;13(1):6179. Diterbitkan 19 Oktober 2022. doi:10.1038/s41467-022-33924-3(JIKA:17.694)
[13] Zhong J, Guo Y, Lu S, dkk. Desain rasional pelacak dengan sensitivitas yang ditingkatkan untuk menemukan inhibitor APC-Asef yang efisien. Nat Commun. 2022;13(1):4961. Diterbitkan 24 Agustus 2022. doi:10.1038/s41467-022-32612-6(JIKA:17.694)
[14] Liu F, Wang X, Duan J, dkk. Degradasi Berurutan AURKA yang Dimediasi Koktail PROTAC Temporal Membatalkan Sel Punca Leukemia Myeloid Akut. Adv Sci (Weinh). 2022;9(22):e2104823. doi:10.1002/advs.202104823(JIKA:16.806)
[15] Ji C, Qiu M, Ruan H, dkk. Analisis Transkriptom Mengungkapkan Relung Simbiosis Perancah 3D untuk Mempercepat Penyembuhan Cacat Tulang. Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2105194. doi:10.1002/advs.202105194(JIKA:16.806)
[16] Feng L, Dou C, Xia Y, dkk. Terapi Nanozim Berlapis Membran Sel Mirip Neutrofil untuk Kerusakan Otak Iskemik dan Pemulihan Fungsi Neurologis Jangka Panjang. ACS Nano. 2021;15(2):2263-2280. doi:10.1021/acsnano.0c07973(JIKA:15.881)
[17] Wang Z, Gong X, Li J, dkk. Kendaraan Nano Polifluorokarbon Penghantar Oksigen Meningkatkan Oksigenasi Tumor dan Meningkatkan Imunitas Antitumor yang Dimediasi Fotodinamik. ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(JIKA:15.881)
[18] Jiang Z, He L, Yu X, dkk. Antiangiogenesis yang Dikombinasikan dengan Penghambatan Jalur Hipoksia Memfasilitasi Terapi Fotodinamik Dosis Rendah yang Diinduksi Sinar-X [diterbitkan secara daring sebelum dicetak, 25 Juni 2021]. ACS Nano. 2021;10.1021/acsnano.1c01063. doi:10.1021/acsnano.1c01063(JIKA:15.881)
[19] Gong X, Li J, Xu X, dkk. Nanosistem penghantar oksigen yang terinspirasi oleh mikrovesikel meningkatkan modulasi stroma tumor dan kekebalan antitumor yang dimediasi oleh radioterapi. Biomaterial. 2022;290:121855. doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121855(JIKA:15.304)
[20] Deng J, Xu W, Lei S, dkk. Perekrutan dan Pematangan Sel Dendritik yang Bergantung pada Sel Pembunuh Alami yang Diaktifkan oleh Nanogel Responsif untuk Menargetkan Imunoterapi Kanker Pankreas. Kecil. 2022;18(44):e2203114. doi:10.1002/smll.202203114(JIKA:15.153)
Pembayaran & Keamanan
Informasi pembayaran Anda diproses dengan aman. Kami tidak menyimpan detail kartu kredit atau memiliki akses ke informasi kartu kredit Anda.
Pertanyaan
Anda mungkin juga menyukai
FAQ
Produk ini hanya untuk keperluan penelitian dan tidak ditujukan untuk penggunaan terapeutik atau diagnostik pada manusia atau hewan. Produk dan konten dilindungi oleh paten, merek dagang, dan hak cipta milik
Aplikasi tertentu mungkin memerlukan hak kekayaan intelektual pihak ketiga tambahan.