Keterangan
Reagen transfeksi universal Hieff Trans™ adalah reagen transfeksi liposom serbaguna, praktis, dan efisien yang dikembangkan berdasarkan nanoteknologi terkini. Reagen ini cocok untuk transfeksi DNA, RNA, dan oligonukleotida, termasuk sel primer. Sel yang sulit ditransfeksi, termasuk neuron, memiliki efisiensi transfeksi yang tinggi. Formulanya yang unik memungkinkannya untuk ditambahkan langsung ke medium, dan keberadaan serum tidak memengaruhi efisiensi transfeksi, yang mengurangi kerusakan sel yang disebabkan oleh penghilangan serum. Tidak perlu membuang kompleks reagen transfeksi asam nukleat atau menggantinya dengan medium baru setelah transfeksi, dan medium baru juga dapat diganti setelah 4-6 jam sesuai dengan status nutrisi sel.
Komponen Produk
| Nomor Komponen | Komponen | Kucing#/Ukuran | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universal-A | 0,5 mililiter | 1 ml air | 5×1ml |
| 40808-B | Universal-B | 0,5 mililiter | 1 ml air | 5×1ml |
Pengiriman dan Penyimpanan
Produk ini dikirim dengan bungkus es dan dapat disimpan pada suhu 2-8℃ selama satu tahun. Jangan dibekukan!
Perhatian
1) Selama operasi transfeksi, lebih baik pertemuan sel mencapai 70%-90%, dan kerapatan pelapisan spesifik ditentukan sesuai dengan situasi sel.
2) Persiapan kompleks transfeksi memerlukan pengenceran DNA dan reagen transfeksi dalam medium bebas serum.
3) Antibiotik tidak dapat ditambahkan ke media selama transfeksi.
4) Penggunaan DNA atau RNA dengan kemurnian tinggi membantu memperoleh efisiensi transfeksi yang lebih tinggi, dan endotoksin dalam plasmid merupakan musuh transfeksi.
5) Simpan pada suhu 2-8ºC, hati-hati jangan membuka tutupnya berulang kali dalam waktu lama.
6) Konsentrasi asam nukleat dan volume reagen harus dioptimalkan untuk penggunaan pertama untuk mendapatkan efisiensi transfeksi maksimum.
7) Produk ini hanya untuk tujuan penelitian ilmiah!
Instruksi
Transfeksi DNA
[Catatan] Jumlah reagen transfeksi yang digunakan dipengaruhi oleh jenis sel dan kondisi eksperimen lainnya. Sebaiknya atur gradien untuk mengoptimalkan jumlah penggunaan optimal untuk pertama kalinya.
1) Sel-sel ditanam dan pertemuan sel harus mencapai 70%-90% pada saat transfeksi.
2) Encerkan larutan Universal-B dengan media Opti-MEM sesuai tabel di bawah ini dan aduk perlahan.
3) Encerkan DNA dengan media Opti-MEM untuk memperoleh DNA premix, lalu tambahkan larutan Universal-A dan aduk perlahan untuk memperoleh DNA encer.
4) Tambahkan DNA yang telah diencerkan ke dalam larutan Universal-B yang telah diencerkan (perbandingan 1:1).
5) Inkubasi pada suhu ruangan selama 5 menit.
6) Tambahkan kompleks DNA-liposom ke dalam sel tetes demi tetes dan aduk perlahan.
7) Inkubasi pada suhu 37°C, inkubator CO2 5% selama 48-96 jam hingga analisis ekspresi gen.
Transfeksi siRNA
Prosedur untuk transfeksi siRNA sama dengan transfeksi DNA, kecuali bahwa larutan Universal-A (langkah 3) tidak perlu ditambahkan saat mengencerkan siRNA.
Tabel 1 Jumlah transfeksi dalam berbagai wadah kultur sel (hanya untuk referensi)
| Wadah kultur sel | 96 sumur | 24 sumur | 6 sumur | |
| Sel yang melekat | Ukuran 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Encerkan larutan Universal-B dengan media Opti-MEM sesuai tabel di bawah dan aduk perlahan. | Media Opti-MEM | 5 mikroliter | 25 mikroliter | 125 mikroliter |
| Universal-B | 0,2 mikroliter | 1 mikroliter | 5 mikroliter | |
| Encerkan DNA dengan media Opti-MEM untuk memperoleh campuran DNA, lalu tambahkan larutan Universal-A dan aduk perlahan untuk memperoleh DNA encer. | Media Opti-MEM | 5 mikroliter | 25 mikroliter | 125 mikroliter |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 mikrogram | 0,5 mikrogram | 2,5 mikrogram | |
| Universal-A (2 μL/μg DNA) | 0,2 mikroliter | 1 mikroliter | 5 mikroliter | |
| Tambahkan DNA yang telah diencerkan ke dalam larutan Universal-B yang telah diencerkan (perbandingan 1:1). | Larutan DNA yang diencerkan | 5 mikroliter | 25 mikroliter | 125 mikroliter |
| Universal-B | 5 mikroliter | 25 mikroliter | 125 mikroliter | |
| Inkubasi pada suhu ruangan selama 5 menit. | ||||
| Kompleks DNA-Liposom | Komponen (setiap sumur) | 96 sumur | 24 sumur | 6 sumur |
| Opti-MEM | 10 mikroliter | 50 mikroliter | 250 mikroliter | |
| DNA(0,5–5 μg/μL) | 0,1 mikrogram | 0.5 mikrogram | 2,5 mikrogram | |
| Universal-B | 0,2 mikroliter | 1 mikroliter | 5 mikroliter | |
| Universal-A | 0,2 mikroliter | 1 mikroliter | 5 mikroliter | |
| Tambahkan kompleks DNA-liposom ke dalam sel tetes demi tetes dan aduk perlahan. | Kompleks DNA-Liposom | 10 mikroliter | 50 mikroliter | 250 mikroliter |
[Catatan] Jumlah yang digunakan dalam tabel hanya sebagai referensi. Jumlah spesifik DNA dan larutan Universal-B yang digunakan harus dioptimalkan sesuai dengan jenis sel dan kondisi eksperimen lainnya. Sebaiknya pertahankan rasio antara 1:0,5-1:5.
(1) T: Dapatkah serum hadir ketika menyiapkan kompleks reagen transfeksi asam nukleat?
A: Keberadaan serum akan memengaruhi pembentukan liposom. Disarankan untuk menggunakan medium bebas serum (umumnya medium MEM) saat menyiapkan kompleks reagen transfeksi asam nukleat.
(2) T: Bisakah reagen transfeksi dibekukan?
A: Reagen ini harus disimpan pada suhu 2-8°C, dan harus dihindari pembukaan tutup yang berulang dan berkepanjangan, karena pembukaan tutup dalam jangka panjang akan menyebabkan oksidasi liposom dan memengaruhi efisiensi transfeksi.
(3) T: Apa saja yang harus saya perhatikan saat menggunakan Hieff Trans™ Universal Transfection Reagen?
A: 1) Selama operasi transfeksi, lebih baik pertemuan sel mencapai 70%-90%, dan kerapatan pelapisan spesifik ditentukan sesuai dengan situasi sel.
2) Persiapan kompleks transfeksi memerlukan pengenceran DNA dan reagen transfeksi dalam medium bebas serum.
3) Antibiotik tidak dapat ditambahkan ke media selama transfeksi.
4) Penggunaan DNA atau RNA dengan kemurnian tinggi membantu memperoleh efisiensi transfeksi yang lebih tinggi, dan endotoksin dalam plasmid merupakan musuh transfeksi.
5) Simpan pada suhu 2-8ºC, hati-hati jangan membuka tutupnya berulang kali dalam waktu lama.
6) Konsentrasi asam nukleat dan volume reagen harus dioptimalkan untuk penggunaan pertama untuk memperoleh efisiensi transfeksi tertinggi.
(4) T: Apakah perlu dihentikan setelah transfeksi?
A: Tidak perlu. Tidak perlu membuang kompleks reagen asam nukleat-transfeksi atau mengganti dengan medium baru setelah transfeksi, dan medium baru juga dapat diganti setelah 4-6 jam sesuai dengan status nutrisi sel.
(5) T: Dapatkah reagen transfeksi digunakan untuk transfeksi pengemasan vektor virus?
A: Ya, tentu.Efisiensi pengemasan vektor virus tidak selalu terkait dengan efisiensi transfeksi, tetapi juga terkait dengan pemilihan plasmid pengemasan dan rasio antar plasmid.
Pembayaran & Keamanan
Informasi pembayaran Anda diproses dengan aman. Kami tidak menyimpan detail kartu kredit atau memiliki akses ke informasi kartu kredit Anda.
Pertanyaan
Anda mungkin juga menyukai
FAQ
Produk ini hanya untuk keperluan penelitian dan tidak ditujukan untuk penggunaan terapeutik atau diagnostik pada manusia atau hewan. Produk dan konten dilindungi oleh paten, merek dagang, dan hak cipta milik
Aplikasi tertentu mungkin memerlukan hak kekayaan intelektual pihak ketiga tambahan.