Aureobasidin A, juga dikenal sebagai AbA, Basifungin, breomycin A, adalah antibiotik peptida ester siklik yang diisolasi dari jamur berfilamen Aureobasidium Pullulans No. R106. Ia memiliki kemampuan antijamur yang kuat dan merupakan penghambat sintase ceramide terfosforilasi inositol AUR1. Ia beracun bagi ragi bahkan pada konsentrasi yang lebih rendah (0,1-0,5 μg/mL). Spesies jamur yang rentan terhadap Aureobasidin A meliputi Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharces pombe, Candida glabrata, Aspergillus nidulans, dan A. niger. Spesies jamur yang rentan terhadapnya meliputi ragi gigi (Saccharomyces cerevisiae), Schizaccharomyces millet (Schizosaccharomyces pombe), Candida glabrata (Candida glabrata), Aspergillus nest (Aspergillus nidulans), dan Aspergillus niger (A. niger.). Mekanisme kerjanya adalah Aureobasidin A menghambat aktivitas inositol phosphoramidite (inositol phosphorylceramide, IPC) synthase, yang menjadi dasar pertumbuhan jamur, dan mengganggu sintesis sphingolipid, sehingga selanjutnya membunuh strain tersebut. Lebih banyak gen yang mengkode sintase IPC telah dipelajari seperti gen AUR 1 dari Saccharomyces cerevisiae dan gen AURA dari A. sinensis, yang memiliki homologi. Menonaktifkan gen pengkode ini membuat strain menjadi resistan terhadap Aureobasidin A, seperti gen AUR 1-C.

Aureobasidin A sangat cocok sebagai penanda seleksi obat untuk menyaring klon positif. Resistensi Aureobasidin A juga merupakan pelapor ideal dalam studi hibrida tunggal dan hibrida ganda ragi. Produk ini adalah larutan Aureobasidin A yang dilarutkan dalam metanol dengan konsentrasi 1 mg/mL.

Fitur

Kemurnian≥97%

Produksi standar, menggunakan mode produksi massal pabrik

Aplikasi

Studi hibrida ragi dua

Studi hibrida ragi tunggal

Penanda pemilihan obat ragi yang ketat

Resistensi Aureobasidin A merupakan reporter ideal untuk studi hibridisasi ragi

Spesifikasi

Komponen

Pengiriman dan Penyimpanan

Itu Aureobasidin A(AbA) Produk harus disimpan di -15℃ ~ -25℃ untuk 2 bertahun-tahun.

Instruksi

1. Konsentrasi kerja

Silakan merujuk pada literatur yang relevan untuk konsentrasi spesifik, dan jelajahi serta optimalkan sesuai dengan kondisi eksperimen Anda sendiri (seperti tujuan eksperimen, jenis sel, karakteristik kultur, dll.)

2. Percobaan sel (percobaan in vitro)

Aureobasidin A menghentikan pertumbuhan sel ragi melalui keracunan ceramide dan kekurangan inositolphosphorylceramides yang penting.^[1].

Pengulangan tandem rangkap tiga dari setiap motif kotak CArG disintesis. Semua fragmen DNA dikloning ke dalam vektor Y1H pAbAi (Clontech, Mountain View, AS) menggunakan situs restriksi yang sesuai. Kemudian, setiap konstruksi pAbAi yang telah dirakit dilinearisasi dengan BstbI dan ditransformasikan ke dalam galur Saccharomyces cerevisiae Y1HGold menurut Manual Sistem Transformasi Ragi 2 (Clontech, Mountain View, AS). Klon yang membawa fragmen DNA yang diinginkan disaring untuk aktivasi otomatis pada medium penghilangan urasil sintetis yang dilengkapi dengan Aureobasidin A dalam konsentrasi 100–900 ng/mL, sesuai indikasi (Clontech, Mountain View, AS)^[2].

Kerangka baca terbuka (ORF) gen SlBES1 diperkuat dan diligasikan ke dalam plasmid pGBKT7-GAL4BD. Konstruksi fusi GAL4BD-SlBES1 selanjutnya ditransformasikan ke dalam sel ragi Y2H Gold.-Pelat medium Trp digunakan untuk membudidayakan transforman ragi.Itu sebuahAktivitas galaktosidase dari transforman diidentifikasi dengan X-sebuah-gal dan ekspresi AUR1-C disaring oleh Aureobasidin A^[3].

3. Konsentrasi penghambatan minimum Aureobasidin untuk berbagai ragi

4. Prosedur Operasional (untuk sistem transformasi khamir yang resisten terhadap AbA)

1) Tambahkan 0,5 mL kultur ragi semalam ke dalam 50 mL media YPD (komposisi: 1 L media cair mengandung 10 g ekstrak ragi, 20 g polipepton, 20 g D-glukosa; untuk media padat, tambahkan 2% agar tambahan).

2) Inkubasi pada suhu 30℃ selama kurang lebih 6 jam, hingga OD660 menjadi 1-2. Bila menggunakan diploid, ukur OD660 menjadi 2-4.

3) Sentrifus pada 1.000Bahasa Indonesia:g selama 5 menit.

4) Suspensikan kembali pelet dalam 10 mL Larutan A (komposisi: 100 mM Lithium asetat, 10 mM Tris-HCl pH 7,5, 1 mM EDTA), lalu sentrifus pada kecepatan 1.000Bahasa Indonesia:g selama 5 menit.

5) Bahasa Inggrissuspensikan pelet dalam Larutan A sampai OD660 menjadi 150.

6) Aliquot 100 µL suspensi sel ke dalam tabung dan inkubasi pada suhu 30℃ selama 1 jam.

7) Tambahkan 5 µg vektor (DNA melingkar atau linier) dan 150 µg DNA Pembawa (yang telah dipanaskan pada suhu 100℃ selama 10 menit dan kemudian didinginkan dengan cepat).

Catatan: pAUR101 memerlukan DNA linear untuk transformasi. Penggunaan DNA sirkular akan mengurangi efisiensi transformasi atau bahkan dapat gagal. pAUR112 dan pAUR123 memerlukan DNA plasmid lengkap untuk transformasi.

8) Tambahkan 850 µL Larutan B (komposisi: larutkan 40 g Polietilen Glikol 4000 dalam 100 mL Larutan A dan aduk rata, siapkan segar sebelum digunakan), dan aduk perlahan.

9) Inkubasi pada suhu 30℃ selama 30 menit, kemudian pada suhu 42℃ selama 15 menit.

10) Diamkan pada suhu ruangan selama 10 menit.

11) Sentrifus pada kecepatan 5.000 rpm selama 1 menit, dan suspensikan kembali pelet dalam 5 mL media YPD.

12) Inkubasi pada suhu 30℃ selama 6 jam hingga semalaman.

13) Sentrifus pada 5.000-10.000 rpm, dan suspensikan kembali pelet dalam 1-10 mL NaCl 0,9%.

14) Plat 100 µL suspensi sel ke pelat media selektif YPD (mengandung konsentrasi AbA tertentu, tergantung pada jenis galur).Inkubasi pada suhu 30℃ selama 3-4 hari hingga transformasi selesai.

15) Pilih transforman positif, dan/atau tentukan efisiensi transformasi (dinyatakan sebagai jumlah koloni yang ditransformasi per mikrogram DNA plasmid).

Dokumen:

Lembar Data Keselamatan

60231Dokumen Referensi _MSDS_HB22042angka 0_ID.pdf

Buku Panduan

60231Buku Panduan HB250116_ID.pdf

Angka

Gambar 1. Bagan pertumbuhan lempeng ragi

Strain eksperimental:GS115

Jumlah penggunaan: 0,05 μg/ml[Bahasa Indonesia]0,1 mg/ml[Bahasa Indonesia]0,5 μg/ml[Bahasa Indonesia]1 mg/ml

Perlakuan: 3-5 Haris di 3angka 0℃

Baris atas adalah Yeasen produk, dan baris bawah adalah merek T *.