近年、分子生物学技術の急速な発展に伴い、核酸に基づく診断方法が広く確立され、人間の病気の実験室検査に広く応用されています。他の核酸増幅技術と比較して、等温増幅は、高速、効率的、特異的であり、特殊な機器を必要としないという利点があります。そのため、登場以来、多くの学者によってPCRに匹敵する可能性のある検出方法と見なされてきました。

その結果、等温増幅技術に基づく診断機器およびキットの開発と応用は、分子診断におけるポイントオブケア検査 (POCT) の新たな方向性を示すものになると考えられます。

主流の等温増幅技術の原理の紹介

1、ループ媒介等温増幅

(LAMP) テクノロジー

原理：ループ介在等温増幅（LAMP）は、鎖置換活性を有するBst DNAポリメラーゼを利用します。標的遺伝子の6つの領域を標的とする4種類の特異的プライマーを設計し、等温条件下で標的配列を効率的かつ迅速かつ特異的に増幅できます。増幅は60〜65℃の一定温度で実行でき、15〜60分以内に10 ^{9〜10 10}倍の核酸増幅を達成できます。

利点と用途：等温増幅法は、反応が速く、特異性が高く、機器がシンプルで操作しやすく、結果の解釈が容易なため、病原菌、寄生虫、ウイルス、疾患、遺伝子組み換え製品の検出に応用されています。また、臨床感染症診断、環境モニタリング、食品安全などの分野で広く使用されることが期待されており、分子ポイントオブケア検査（ POCT ）プラットフォームに適した理想的な方法となっています。

分類： LAMP検出法は、濁度測定法、pH指示薬法、蛍光色素法（NHB、カルセイン、SYBR Green、Sytoなど）、蛍光プローブ法など、いくつかの種類に分類されます。

2、リコンビナーゼポリメラーゼ増幅（RPA）技術

原理：リコンビナーゼ酵素はプライマーに結合すると、二本鎖DNA内の相同配列を検索できるタンパク質-DNA複合体を形成します。プライマーが相同配列を見つけると、鎖交換反応が起こり、DNA合成の形成と開始につながり、テンプレート上のターゲット領域が指数関数的に増幅されます。置換されたDNA鎖は一本鎖結合（SSB）タンパク質に結合して、それ以上の置換を防ぎます。このシステムでは、主にリコンビナーゼ、Bsu酵素、およびSSBタンパク質の活性に依存して、2つの反対のプライマーによって合成イベントが開始されます。この技術により、37〜42°Cの温度で10〜30分以内に対象ターゲットを迅速に検出できます。

利点と用途： RPAは、高感度、強力な特異性、専門機器への依存度の低さ、さまざまな検出形式を統合する能力を誇ります。特に、草の根レベルや現場でのポイントオブケア検査に適しています。RPAは、体外診断、動物疾患、食品安全、バイオセーフティ、農業などの分野で幅広く応用できます。

分類： RPA 検出法は、ゲル電気泳動法、EXO プローブ法、Fpg プローブ法、ラテラルフローディップスティック法 (LF-RPA)、凝集分析法など、いくつかの種類に分類されます。

製品パフォーマンスショーケース

01 pH感受性色素RT-LAMP試薬

pH 感度染料 RT-LAMP は、60 ～ 65℃ の等温条件下で、視覚染料を感度指示薬として使用し、恒温水槽または標準 PCR 装置を使用してワンステップ RNA 核酸増幅を完了します。わずか 30 分で、反応後の色の変化を使用して病原体感染の有無を判定でき、より直感的な結果が得られます (陽性はオレンジ黄色、陰性はマゼンタ)。この方法は、大規模な集団の迅速な検査に適しています。

おすすめ商品：

RT-LAMP pH感度染料キット（13906ES）
RT-LAMP pH 感受性色素発色バージョン凍結乾燥可能キット（13920ES）

パフォーマンスショーケース：

1.RT-LAMP/RPAミックス選択ガイド

製品分類	RT-LAMPミックス			RPAミックス
製品名	RT-LAMP 色素アッセイキット(UDG plus)	RT-LAMP pH 感度染料キット	RT-LAMP pH 感受性染料発色性バージョン凍結乾燥可能キット	クイックヒューズアンプ
製品品番	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
製品カテゴリー	蛍光染料	pH感受性染料	pH感受性染料	プローブ
製品構成	2 つのコンポーネント バッファー、酵素ミックス	3つのコンポーネント バッファー、RT酵素、Bst酵素	4つのコンポーネント バッファー、RT酵素、Bst酵素、凍結保護剤	4つのコンポーネント 緩衝剤、酵素ミックス、酢酸マグネシウム
フリーズドライ対応	いいえ	はい、凍結保護剤なし	はい、凍結保護剤を含む	いいえ

2.LAMP/RT-LAMP酵素選択ガイド

製品分類	Bst酵素		逆転写酵素		UDG酵素
製品名	Bstプラス	凍結乾燥Bstプラス	Ⅲ 逆転写酵素	III 逆転写酵素、 グリセロールフリー	UDG	UDG、グリセロールフリー
製品品番	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
酵素活性	40単位/μL	60 U/μL	200単位/μL	600単位/μL	1U/μL	1U/μL
製品構成	3つのコンポーネント	2 つのコンポーネント	2 つのコンポーネント	単一成分	シングル- 成分	単一成分
フリーズドライ対応	いいえ	はい	いいえ	はい	いいえ	はい

3、RPA酵素選択ガイド

製品分類	バス	T4X	T4Y	ＳＳＢ	CK	エクソ
製品名	バス	T4 紫外線X	T4 紫外線Y	32 グラム	クレアチンキナーゼ	エキソヌクレアーゼIII
製品品番	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
酵素活性	5U/μL	2μg/μL	2μg/μL	5μg/μL	2μg/μL	100単位/μL
製品構成	単一成分	単一成分	単一成分	単一成分	単一成分	2 つのコンポーネント
フリーズドライ対応	いいえ	いいえ	いいえ	いいえ	いいえ	いいえ