タンパク質電気泳動はタンパク質分析技術です。タンパク質は緩衝液中で負または正に帯電し、電気泳動と呼ばれる電場で陽極に移動します。タンパク質分子が異なれば、電気泳動移動度も異なります。タンパク質電気泳動の非常に重要な部分はゲル調製です。従来のゲル調製は数時間かかることが多く、液漏れ、ゲルの不均一、気泡などの問題もあります。調製の手間に加えて、原料試薬にも一定の毒性があり、接着剤ディスペンサーの本体に害を及ぼしますが、プレキャスト接着剤の登場により、これらの問題を解決できます。では、タンパク質電気泳動の基本原理とプレキャストゲルの機能と原理は何ですか？

1. タンパク質電気泳動の基本原理は何ですか?
2. プレハブ接着剤の機能と原理は何ですか?
3. イェーセン社が提供するプレハブ接着剤の導入
4. よくある質問
5. 製品の詳細

1. タンパク質電気泳動の基本原理は何ですか?

タンパク質や核酸などのほとんどの生体高分子は、陽イオン基と陰イオン基を持っており、これらは両性イオンと呼​​ばれています。粒子を溶液中に分散させ、デンプンゲル、寒天またはアガロースゲル、ポリアクリルアミドゲルなどを支持媒体とするゾーン電気泳動法をゲル電気泳動といいます。ポリアクリルアミドゲル電気泳動は、支持体がポリアクリルアミドゲルである電気泳動法です。ポリアクリルアミドゲルの細孔の大きさを制御して重合させ、同様の分子ふるいの作用でタンパク質を分離すると考えられています。

タンパク質電気泳動には、ネイティブポリアクリルアミドゲル電気泳動（ネイティブPAGE）とドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）の2つの形式があります。ネイティブPAGEは、電気泳動中にタンパク質をそのまま維持し、分子量、形状、および付随する電荷に基づいて勾配で分離します。一方、SDS-PAGEは、サブユニットの分子量に応じてタンパク質を分離します。SDSは陰イオン性洗剤です。変性剤および可溶化剤として、分子内および分子間の水素結合を切断し、分子を折り畳み、タンパク質分子の二次構造と三次構造を破壊することができます。強力な還元剤として、メルカプトエタノール、ジチオトレイトールは、システイン残基間のジスルフィド結合を切断することができます。サンプルとゲルに還元剤とSDSを加えると、分子はポリペプチド鎖に解重合され、解重合されたアミノ酸側鎖とSDSがタンパク質-SDSミセルに結合されます。タンパク質-SDSミセルの負電荷はタンパク質の元の電荷を超え、異なる分子間の電荷差と構造差がなくなります。タンパク質の移動度はタンパク質の分子量のみに依存し、タンパク質の分子量は既知の分子量の標準と比較することで決定できます。

2. プレハブ接着剤の機能と原理は何ですか?

従来のハンドキャストゲルと比較して、プレキャストタンパク質ゲルは、多数の有毒試薬との接触を避け、多くの時間を節約し、ハンドキャストゲルの大きな差異の問題を効果的に解決できます。

ゲルは 2 つの異なるゲル層で構成され、上層はスタッキング ゲル、下層は分離ゲルです。スタッキング ゲルはスタッキング ゲルとも呼ばれます。ゲルの濃度は比較的低く、細孔サイズは比較的大きいです。サンプルはスタッキング ゲルに加えられ、大きな細孔サイズのゲルの移動によって狭い領域に濃縮されます。分離ゲルは電気泳動ゲルとも呼ばれ、通常は細孔サイズが小さく、適切なゲル濃度を選択するとサンプル成分を十分に分離できます。

分離ゲルは、固定ゲルと勾配ゲルに分けられます。ポリアクリルアミドの濃度は、8％、10％、12％、15％、4％〜12％、4％〜20％です。最初の4つは固定濃度のプレキャストゲルで、最後の2つは勾配ゲルです。濃度は、単離されたタンパク質の分子量の範囲を表します。ゲル勾配は勾配ミキサーによって形成されます。高濃度のアクリルアミド溶液をガラス板に加えると、溶液の濃度が勾配に従って低下し、ゲルの細孔サイズは上部で大きく、下部で小さくなります。固定ゲルは、大きすぎても小さすぎてもいけない分離範囲内でのみタンパク質を分離できます。勾配ゲルにはこの制限がなく、大きな分子は上部で分離され、小さな分子は下部で分離されます。グラジエントゲルの細孔径は徐々に小さくなるため、タンパク質が浸透できない細孔径付近のタンパク質を濃縮する効果があり、電気泳動後は非常に狭いゾーンが形成されます。分子量の差が小さいタンパク質は、固定ゲルでは分離できないことが多いですが、グラジエントゲルでは分離できます。

3. イェーセン社が提供するプレハブ接着剤の導入

YEASEN プレキャスト プロテイン プラス ゲルには、勾配濃度と固定濃度が含まれており、さまざまな濃度でさまざまなタンパク質電気泳動のニーズを満たすことができます。独自のゲル調製プロセスで調製され、優れた電気泳動効果があります。市場のあらゆる種類の電気泳動タンク (Bio-RAD、Tanon、Life など) と互換性があり、幅広い適応性、高解像度、高い安定性、明確で均一なバンドなどの利点があります。

3.1 YEASEN プレキャスト プロテイン プラス ジェルがプラスチック ボードにアップグレードされ、品質が向上しました。

使い方は簡単：すぐに使用可能。プラスチックボードの底から粘着テープを剥がします。

幅広い用途：変性タンパク質と天然タンパク質に対応

透明バンド：プラスチックプレートの特殊処理により、タンパク質の吸着が大幅に減少します

時間の節約：実験は最速18分で完了します

品質保証: 厳格なバッチ間安定性保証

長期保存可能：4℃で12か月間保存可能

3.2 以下のパラメータは適切なゲルシリーズを選択するのに役立ちます

電気泳動緩衝液システム: 変性タンパク質泳動緩衝液または天然タンパク質泳動緩衝液

ウェル数とサンプルロード数: 10または15ウェル、最大サンプルサイズはそれぞれ70μLと40μLでした。

ゲル濃度: 8%、10%、12%、15%、4%-12%、4%-20%

表1. ゲル濃度と直線分離範囲

3.3 データは

図1. データは

図2. データは

4. よくある質問

Q1: プレキャストゲルは 4℃ に置く必要がありますか? しばらく室温で放置しても問題ありませんか?

A: 4℃を推奨します。12か月間保存できます。0℃以下で保存しないでください。室温（25℃）で30日間保存できます。

Q2: 勾配濃度と固定濃度のどちらを選択すればよいですか? プレキャストゲルで分離されたタンパク質の最小分子量はどれくらいですか?

A: プレキャストゲルによるタンパク質分離のサイズはその濃度に関係しており、対応する分離範囲は上図に示されています。

固定濃度プレキャストゲルは分解能が優れています。勾配濃度プレキャストゲルは分離範囲が広く、用途も広いため、お客様は自分のニーズに応じて適切な濃度を選択する必要があります。

当社の 4% ～ 20% 勾配プレキャストゲル (Cat#36250、Cat#36256) は、3.5kDa までの低分子量タンパク質を広範囲に分離します。

図3.勾配プレキャストゲルデータ

Q3: プレキャストゲルには特別なバッファーを装備する必要がありますか? バッファーを自分で作れますか?

A: YEASEN 特殊バッファー (Cat#36236、Cat#36237) とプレキャストゲルの適用性は優れています。他のバッファーと混ぜないでください。バッファーは試薬を購入して調製できますが、お客様は当社の配合を使用する必要があります。配合は、関連するプレキャストゲルの説明書に記載されています。

Q4: 分離ゲルと濃縮ゲルをどのように区別しますか? 断面電圧電気泳動には必要ですか?

A: 2 つの成分は同じですが、濃度が同じではないため、肉眼では区別できません。濃縮された接着剤の高さは 1.5 cm です。

いいえ、150 V での電気泳動が推奨されており、実験を完了するには 30 ～ 40 分かかります。

Q5: プレキャストゲルは、市場にあるあらゆる種類の電気泳動タンクに適していますか?

A: はい、当社のプレキャストゲルは、市場にあるあらゆる種類の電気泳動タンクに適しています。

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra システム) および Tanon VE180 (シーリング ストリップの逆の組み立てに注意)。

Life Technology Novex ミニセル（特殊バッフルと併用）

10 cm電気泳動タンク内のその他のゲルプレート幅。

5. 製品の詳細

Yeasenが提供する製品は次のとおりです。

表2. 製品詳細