—ブロット膜を指先で点灯しましょう！

ECL 試薬は、西洋ワサビペルオキシダーゼ (HRP) の化学発光基質として知られ、現在、ウェスタンブロッティング検出で使用される最も感度の高い試薬です。市販の ECL 試薬の一般的な問題には、消光、高いバックグラウンド、不安定性、低濃度タンパク質の検出の難しさなどがあり、最終的な実験結果に影響を及ぼす可能性があります。

Yeasen Biotech は、免疫検出の分野で優れた科学研究者を集めています。ルミノール原料の品質を厳密に管理し、増強剤と安定剤の配合を継続的に改善することで、さまざまな実験のニーズを満たす 4 種類の ECL 試薬を開発しました。これらには、強化、超高感度、耐久性、超高感度の製品が含まれます。これらは、低存在量から高存在量までのターゲットタンパク質の検出要件を満たすだけでなく、実験に影響を与えることなく発光強度を高め、より鮮明な画像をもたらします。

製品の特徴

優れた感度 - ピコグラムから低フェムトグラムレベルまでの抗原を検出します。
より高い信号対雑音比 - 精密な発光基質によりバックグラウンドノイズが低減されます。
抗体効率の向上 - 抗体の結合親和性を高めるために最適化された基質システム。
高いコストパフォーマンス - より低価格でより高いパフォーマンスを実現します。
優れた安定性 - 新しい酸化剤により、4°C で最大 1 年間の安定した保管が保証されます。

製品原理

ECL 試薬検出の核となる原理は、酸化反応による発光です。発光基質の主成分であるルミノールは、アルカリ条件下で、西洋ワサビペルオキシダーゼ (HRP) の触媒作用により H2O2 によって酸化され、3-アミノフタル酸の励起状態中間体を形成します。基底状態に戻ると、最大発光波長 425 nm の光子が放出されます。これらの光子信号は、X 線フィルムまたは CCD イメージングデバイスで捕捉できます。

選択ガイド

Yeasen は現在、ユーザーの免疫ブロッティングアプリケーションのニーズに完全に応えられるよう、それぞれ独自の機能を備えた 4 種類の ECL 製品を提供しています。

では、実験にはどの製品を選択すればよいでしょうか?

表1. ECL試薬選択ガイド

イェーセン	強化されたECL 強化タイプ	スーパーECL 超敏感タイプ	スーパーデュラ耐久タイプ	マキシシグナル超高感度タイプ
適用可能なサンプル	豊富なタンパク質サンプルをターゲットとする	存在量が少なく、サンプルが限られているターゲット	存在量が少なく、サンプルが限られているターゲット	極めて少ない存在量、貴重なサンプルをターゲットとする
検出感度	中ピコグラムレベル	低ピコグラムレベル	中フェムトグラムレベル	低フェムトグラムレベル
信号持続時間	2時間未満	12時間未満	24時間以内	8時間未満
適用可能な検出システム	すべての試薬はX線フィルム、CCDイメージングデバイスに適しています
一次抗体希釈濃度	1:1000-1:4000	1:1000-1:10,000	1:1000-1:50,000	1:5000-1:100,000
二次抗体希釈濃度	1:1000-1:4000	1:2000-1:10,000	1:50,000-1:250,000	1:100,000-1:500,000
推奨メンブレン	NCメンブレン	NC膜またはPVDF膜	NC膜またはPVDF膜	NC膜またはPVDF膜
保存安定性	室温で1年間			4℃で1年間、室温で半年
利点	同じ感度レベルの中で最も強い信号	最高のコストパフォーマンス比、ほとんどのWB実験に適しています	信号持続時間が最も長く、多重露光に非常に適しています	優れた感度、微量タンパク質の検出に非常に適しています

注意: 推奨される抗体希釈濃度は、抗体ストック濃度 1 mg/mL に基づいています。

製品アプリケーション

Yeasen ECL試薬は、同レベルの他のブランドの製品と比較して、使用効果が優れています。

図 1. Yeasen ECL Ultra-Sensitive Substrate Super とブランド T の同等の基質 Pico の検出効果の比較。

図 2. Yeasen ECL 超高感度基板 MaxiSignal と他社の同等基板 West Femto の検出効果の比較。

図 3. Yeasen ECL 耐久性基板 SuperDura と他社の同等基板 West Dura の検出効果の比較。

出版された文献

[1]Wang Z、Lu Z、Lin S、et al。ロイシンtRNA合成酵素2発現B細胞は大腸癌の免疫回避に寄与する。免疫。2022;55(6):1067-1081.e8。doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)

[2] Wu Z、Liu D、Pan D、et al.ミニチュアAcidibacillus sulfuroxidansCas12f1の構造とエンジニアリング[J]。Nature Catalysis、2023、6（8）：695-709。DOI：10.1038 / s41929-023-00995-4（IF：38）

[3] Yao J、Wu D、Zhang C、et al。マクロファージIRX3は食事誘発性肥満と代謝性炎症を促進する。Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)

[4] He X、Li J、Zhou G、et al. 抑制性介在ニューロンのシナプス可塑性による海馬リズムと記憶のゲーティング。ニューロン。2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

価格優位性

図7. Yeasen ECL製品と他のブランドの同レベルの製品との価格比較

よくある質問

遭遇した問題	原因分析	推奨ソリューション
フィルムには反転画像がある	フィルムには反転画像がある	フィルムには反転画像がある
フィルムに茶色または黄色の帯がある	フィルムには反転画像がある	フィルムには反転画像がある
蛍光消光	操作時間が長すぎると膜が徐々に乾燥します	膜の乾燥を防ぐ
	プラスチックラップ、現像液、定着液の汚染	良い実験習慣を身につける
	反応システム内のHRPが不十分	HRP標識物質の増加
フィルムにバンドがないか信号が弱い	転送効率が低い	転写効率を向上させ、判定には染色済みマーカーを使用する
	抗原/抗体が不十分または不一致	抗原/抗体の量を増やすか、適切な抗原/抗体を選択する
	X線フィルムの問題	露光後にX線フィルムが完全に黒く（透明ではない）なった場合は、フィルムが完全に露光されたことを意味します。新しいX線フィルムを使用してください。
	開発者/フィクサーの問題	フィルムを事前に露光してチェックし、問題がある場合は新しい現像液/定着液と交換します。
	反応システム内のHRP過剰	HRP標識物質を希釈する
高い背景	一次抗体と二次抗体の濃度が高すぎる	抗体濃度を下げ、ブロッキング時間を延長する
	抗体が十分に洗浄されていない	洗濯回数を増やす
	不完全なブロック	ブロッキング条件を最適化する
	間違ったブロッキング剤が使用された	別のブロッキング剤を使用する
	露出曝露	露出時間を短縮する
	抗体の特異性が低い	高品質の抗体に置き換える
	反応システム内のHRP過剰	HRP標識物質を希釈する
空きのあるバンド	高濃度の抗原と二次抗体	サンプルを希釈してゲルを再実行するか、混合した発色溶液を冷却して膜に適用し、すぐに迅速に展開します。
不規則なバンド形状	転写中の気泡またはメタノールによる水和の不均一（PVDF膜の場合）	転送条件を最適化します。
映画のスポット	HRP標識物質の凝集体	HRP標識物質を0.2μmの膜でろ過する
非特異的バンド	反応システム内のHRP過剰	HRP標識物質を希釈する
	非特異的タンパク質結合を引き起こすSDS	実験手順ではSDSを使用しないでください
	抗体の特異性が低い	高品質の抗体に置き換える
	不十分なブロック	ブロッキング時間を延長するか、別のブロッキング剤を使用する

注文情報

製品名	製品番号	仕様
スーパーECL検出試薬	36208ES60/76	100mL/50mL
強化ECL化学発光基質キット	36222ES60/76	100mL/500mL
スーパーシグナルスーパーデュラ延長持続基質	36223ES10/60/70/76	10mL/100mL/200mL/500mL
スーパーシグナルマキシシグナル最大感度基板	36224ES10/60/70/76	10mL/100mL/200mL/500mL

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