糖尿病患者により多くの治療オプションを提供するために、21世紀初頭にグルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）類似体などのいくつかの新しい糖尿病薬が登場しました。GLP-1類似体の代表的な薬の1つであるセマグルチドは、さまざまな経口血糖降下薬と併用すると血糖を効果的に制御することが複数の臨床試験研究で証明されており、患者の減量、収縮期血圧の低下、膵臓β細胞機能の改善に役立ちます。その3つの製剤（血糖降下注射剤オゼンピック、経口血糖降下薬リベルサス、減量注射剤ウェゴビー）は、2023年に売上高が200億ドルを超えました。血糖値の低下と減量におけるその優れたパフォーマンスにより、業界ではセマグルチドがしばらくの間強力な販売勢いを維持し、多くの企業がレイアウトを競い合うと予想されています。
セマグルチドの主鎖構造は、29アミノ酸中間ポリペプチドArg34GLP-1（9-37）または27アミノ酸中間ポリペプチドArg34GLP-1（11-37）です。この中間ポリペプチドの生産と製造には、主に化学合成とバイオ調製法が含まれます。化学合成と比較して、バイオ調製は容量のボトルネックを突破し、大規模な連続生産に適しており、生産コストをさらに削減し、より大きな経済的利益をもたらすことができます。
表1. セマグルチド中間体ポリペプチドのバイオ調製法の例
|
バイオ調製法（例1）
|
バイオ調製法（例2）
|
|
|
遺伝子合成 |
融合ペプチド、エンテロキナーゼ切断部位、および標的主分子配列を含む融合タンパク質配列を合成する |
GLP-1(9-37)遺伝子配列とタンデム発現配列を合成する |
|
細菌工学の構築 |
大腸菌に導入して組み換え細菌を構築する |
大腸菌に導入して組み換え細菌を構築する |
|
融合タンパク質発現 |
融合ペプチド配列の最適化、タンパク質の等電点や親水性の変更などにより、融合タンパク質の発現が効果的に増加する。 |
高密度発酵誘導後、GLP-1（9-37）を発現するタンデム発現封入体タンパク質が得られ、リフォールディングにより可溶性タンパク質が得られる。 |
|
中間ペプチドの取得 |
融合タンパク質は、エンテロキナーゼ切断、精製、およびその他のステップを経て、セマグルチド中間ポリペプチドArg34GLP-1（9-37）を得ることができる。 |
可溶性タンパク質は、Kex2酵素とカルボキシペプチダーゼBによる2段階の酵素切断と精製工程を経て、セマグルチド中間体ポリペプチドGLP-1(9-37)を得る。 |
エンテロキナーゼまたはKex2酵素とカルボキシペプチダーゼBの組み合わせは、セマグルチド（バイオ調製法）の主ペプチド鎖の重要な酵素であり、酵素切断効果とコストは生産にとって非常に重要です。 Yisheng Biologyは、製薬会社に安定した酵素原料を提供することに尽力しており、高品質の酵素と完全な品質管理基準を提供して、顧客の生産能力とバッチ安定性の向上、コストの削減、および迅速な市場参入を支援します。
セマグルチドの
1.組み換えエンテロキナーゼ
組み換えエンテロキナーゼ（rEK）は、高純度のウシ腸管エンテロキナーゼ軽鎖サブユニットであり、天然抽出エンテロキナーゼと同じ特異的切断酵素活性を有し、切断部位はAsp-Asp-Asp-Asp-Lysであり、タンパク質のN末端に位置する融合タンパク質を除去して不要な融合タグを除去することができ、N末端融合によく選択されるプロテアーゼであり、他の残基に対する不規則な切断レベルが低い。
Yisheng は現在、さまざまなソース、さまざまなグレード、His タグの有無にかかわらず、組み換えエンテロキナーゼをお客様に提供しており、その中から選択できます。
特徴
高い特異性: 4 つのアスパラギン酸を含むリジンのカルボキシル末端を切断する特定のプロテアーゼ: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys。
高純度:他のプロテアーゼは使用せず、非特異的な切断もありません。
動物由来成分不使用:組み換え生産、外因性ウイルス汚染なし、生産工程で動物由来の原材料は一切使用していません。
安定した品質:バッチ生産により、安定した継続的なバッチ生産が保証され、バッチ間の差異がなく、品質が安定します。
十分な容量: 500L 発酵槽で約 50 MU のエンテロキナーゼを得ることができます。
異なるグレードの製品供給: R&D グレード (20395ES)、GMP グレード (20396ES)、GMP グレード製品は ISO 13485 品質管理システムに準拠しています。
テストデータ
エンテロキナーゼ活性検査:
図1.
注: 陽性基質 (20391ES) は、DDDDK (エンテロキナーゼ認識切断部位) によって接続された 2 つの特定のタンパク質配列で構成される融合タンパク質であり、全体の分子量は約 64.6 kDa です。これは、エンテロキナーゼによって、それぞれ分子量が約 27.9 kDa と 36.6 kDa の 2 つの独立したタンパク質断片に特異的に切断されます。この製品は、エンテロキナーゼ基質として、組み換えまたは天然エンテロキナーゼの半定量的または定性的な酵素活性検出に使用できます。
エンテロキナーゼ純度試験:
注: エンテロキナーゼの理論値は 22.7 kDa です。ピキア パストリスでの発現後のグリコシル化効果により、SDS-PAGE では対象タンパク質の分子量が約 40 kDa であることが示されています。通常、グリコシル化されたバンドは、わずかに拡散した上向きのバンドになります (右図を参照)。当社では、お客様が脱グリコシル化し、ゲルを流して純度を測定するための脱グリコシル化酵素 Endo H (カタログ番号 20414) も提供しています (左図を参照)。
エンテロキナーゼ切断特異性試験:
図3.
注: 同じ条件下で、
エンテロキナーゼ反復凍結融解加速安定性試験：
図 4.
注：
25°C で 7、16、32 日間、37°C で 7、14 日間保存した場合、酵素活性は初期の酵素活性から大きく変化しませんでした。
2. 組み換え Kex2 酵素、カルボキシペプチダーゼ B
表 2.
|
製品番号 |
20418ES |
20417ES |
|
製品名 |
酵母で発現した組み換えKex2プロテアーゼ |
|
|
製品グレード |
GMPグレード |
GMPグレード |
|
ソース |
ピキア・パストリスからの組み換え発現 |
大腸菌からの組み換え発現 |
|
活動 |
≥10.0単位/mgプロ |
≥170 USP単位/mgプロ |
|
分裂部位 |
Arg-Arg、Lys-Argなどの二塩基性アミノ酸のカルボキシル酸末端のペプチド結合を特異的に認識し切断する。 |
C末端の塩基性アミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジン）のアミノ末端側でタンパク質を特異的に加水分解する |
|
製品アプリケーション |
1. ペプチド医薬品製造における酵素切断プロセス。 2. タンパク質の酵素消化およびペプチドマッピング、配列決定など |
1. 組み換えインスリンおよびその類似体の製造。 2. タンパク質のC末端アミノ酸の決定。 3. タンパク質のC末端のヒスチジンタグの除去。 4. その他の組換えペプチド物質の製造。 5. 特定の特殊化合物の酵素合成。 |
Kex2酵素とカルボキシペプチダーゼBの組み合わせ：タンデム発現プロセスの要件、酵素切断後のセマグルチド中間体の高収率
YイーゼンGMPグレード酵素生産拠点
ISO認証を受けた超清浄分子酵素生産基地 - UCF.MEは、工業用AKTA精製および物理化学分析装置、100リットルの高密度発酵ユニット、1万級の標準クリーンワークショップ、自動化生産ラインを備えています。5L、10L、30L、100L、500L、1,500Lなど、さまざまな仕様の発酵および精製システムを所有しており、分子酵素産業化の分野で5Lから1,500Lまでの生産規模拡大が可能で、研究開発、パイロット規模、大規模生産など、さまざまな段階で下流顧客のコア酵素原料のニーズを完全に満たしています。
販促品情報
|
製品名 |
製品番号 |
仕様 |
定価($） |
プロモーション価格($） |
|
20395ES60/76/90/ 92/94 |
100 U/500 U/ 500 0ユー/ 100 KU/ 1 MU(1000 KU) |
45/115/ 825/ 12000/ 360000 |
45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
関連製品情報
|
製品名 |
製品番号 |
仕様 |
|
20391ES03/11 |
1mg/4mg |
|
|
酵母で発現した組み換えKex2プロテアーゼ |
20418ES60 |
100μg |
|
20417ES03/10 |
1mg/10mg |
|
|
20414ES92/97 |
10000 U/50000 U |